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蛇毒神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞GAP-43表达的影响
目的 探讨蛇毒神经生长因子(vNGF)对大鼠脑缺血再灌注的保护作用.方法 选用体重220～280 g的健康雄性Wistar大鼠,分为假手术组、对照组及vNGF组(再分为25 U、50 U、100 U 3个剂量组).所有大鼠侧脑室注药7 d后处死.大鼠模型分别观察:按Longa法进行神经功能评分;免疫组化法检测GAP-43的表达.结果 神经功能评分:假手术组神经功能评分为0分,其余各组均出现神经功能缺损,vNGF组大鼠评分低于对照组(P<0.05).免疫组化:除假手术组外各组GAP-43均有表达.vNGF组的表达较对照组高(P<0.05).vNGF组25 U组GAP-43表达增加.50 U组表达继续增高,100 U组表达高.结论 在大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后,vNGF能增强GAP-43的表达,对神经细胞有明显的保护作用.
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蛇毒神经生长因子在兔眼内的药代动力学研究
目的研究蛇毒神经生长因子(venom nerve growth factor,v-NGF)兔眼结膜下及玻璃体内注射两种给药方式,不同时间内玻璃体中的药代动力学行为.方法蛇毒神经生长因子经131I标记,在注射入兔眼结膜下和玻璃体腔后测定玻璃体内1h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h的131I每分钟计数率(CPM).结果经分析表明,结膜下注射v-NGF后兔眼玻璃体内药物浓度在6 h达高峰;而玻璃体内注射在1 h达高峰并能在眼内达到较高的药物浓度及维持较长时间.结论玻璃体内注射v-NGF后,该药在眼内有良好的分布.
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蛇毒神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后微管相关蛋白1B的影响
目的 探讨玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子是否对实验性大鼠视网膜缺血再灌注损伤的视网膜中的微管相关蛋白1B有影响而起到神经保护作用.方法 采用升高大鼠眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型.实验组和对照组分别注入蛇毒神经生长因子和平衡盐溶液,通过免疫组织化学法检测再灌注后不同时间段各组大鼠视网膜组织中微管相关蛋白1B的表达.结果 微管相关蛋白1B的表达在实验组于再灌注后6 h加强,48h达高峰.而对照组在再灌注后24h增强,96h才达高峰,而且高峰浓度实验组较对照组强(P<0.01).结论 通过向大鼠玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子可以提高视网膜微管相关蛋白1B的表达而对实验性视网膜缺血再灌注损伤有神经保护作用.
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蛇毒神经生长因子对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的神经保护研究
目的 探讨玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子,对实验性视网膜缺血再灌注损伤是否具有神经保护作用.方法 采用升高大鼠眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型.实验组和对照组分别注入蛇毒神经生长因子和平衡盐溶液,应用图像分析系统计数视网膜神经节细胞和测量视网膜内层厚度,透射电镜观察视网膜超微结构.结果 视网膜缺血再灌注开始,实验组大鼠视网膜水肿、视网膜内层厚度变薄和视网膜神经节细胞(RGCs)数目减少较对照组轻,并且实验组于再灌注24h后RGCs数目逐渐增多,48h后视网膜内层厚度逐渐增加.再灌注后168h,对照组大鼠视网膜内层厚度及RGCs数目明显低于实验组,差异显著有统计学意义(P＜0.05);电镜观察对照组再灌注后24 h出现膜盘排列紊乱、变形,神经纤维层内大量的线粒体肿胀、空泡化和RGCs核染色质浓缩、边集,出现凋亡小体,胞浆内细胞器空泡化且大量减少.而实验组膜盘排列尚整齐,RGCs轻度肿胀,胞浆内细胞器较丰富,神经纤维层中的线粒体轻度肿胀,微管结构较清楚.结论 通过向大鼠玻璃体腔内注射蛇毒神经生长因子可以减轻视网膜内层的损伤,对实验性视网膜缺血再灌注损伤有神经保护作用.
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蛇毒神经生长因子抑瘤作用的实验研究
目的:探讨神经生长因子(NGF)对小鼠荷腹水瘤H22细胞的抑制作用.方法:用不同剂量(5,10,20 μg/kg)的NGF对荷腹水瘤H22小鼠进行治疗,观察其对小鼠腹水瘤H22的影响.利用放射免疫测定法(RIA)测定荷瘤小鼠血浆内皮素(ET)含量.结果:NGF大剂量组对小鼠腹水瘤H22有明显的抑制作用(抑瘤率46.36%).荷腹水瘤H22小鼠ET水平明显高于对照组(P＜0.05),大剂量组小鼠ET含量明显降低(P＜0.05).结论:NGF对小鼠腹水瘤H22细胞的生长具有抑制作用,可能与其降低荷瘤鼠ET水平有关.
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蛇毒神经生长因子抗肿瘤体外实验研究
目的:探讨蛇毒神经生长因子(NGF)对人肿瘤细胞增殖的抑制作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)法、台盼蓝拒染法和集落形成作为观察指标,以NGF5,10,15,20μg/ml处理4种人肿瘤细胞(人白血病细胞株K 562、人胰癌细胞株JF305,人肺癌细胞株AGZY-83a和人胃癌细胞株MG-803),选用不同作用时间,分别观察NGF对上述细胞的影响.阿霉素(Adr)为阳性对照药.结果:NGF对4种人肿瘤细胞均有细胞毒性作用,K 562和JF 305比后两者显示出更好的量效关系(P均<0.05).NGF处理24,48和96 h后K 562和JF 305细胞的生长均受到抑制(P<0.05,P<0.01).并有显著的剂量效应关系.处理JF305细胞24,48和96 h,NGF的半抑制浓度(IC50),时间-效应关系亦明显;NGF对K 562细胞的生长抑制作用以48 h为显著.NGF还可显著抑制JF 305细胞的集落形成,并有明显的量效关系(P<0.01),其IC50为12.86μg/ml.结论:NGF对4种人肿瘤细胞均具有细胞毒性和生长抑制作用,对K 562、JF 305作用更显著.
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蛇毒神经生长因子对鼠视网膜神经节细胞GAP-43表达的影响
目的 通过对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)的研究,观察蛇毒神经生长因子(venom nerve growth factor,vNGF)在鼠视神经横断伤后对RGC的保护作用.方法 将24只SD大鼠随机平均分为实验对照组、实验治疗组.各组右眼制作视神经横断伤模型,实验治疗组向玻璃体腔内注入0.8 g·L-1 vNGF 0.025 mL,实验对照组向玻璃体腔内注入0.025 mL平衡盐液.左眼未做任何处理,作为正常对照组.于损伤后7 d、14 d取材,应用病理图像分析计数RGC及观察大鼠视网膜神经纤维层厚度变化,进行GAP-43免疫组织化学染色分析.结果 光镜下,伤后7～14 d,实验治疗组大鼠RGC数目明显高于实验对照组,有非常显著性统计学差异(P<0.01),2组均比正常对照组RGC数目下降,有非常显著性统计学差异(P<0 01).免疫组织化学结果:实验治疗组7 d时GAP-43表达明显,14 d时稍减弱;实验对照组7 d时有GAP-43表达,但较实验治疗组弱,到14 d时表达明显减弱.结论 在视神经横断伤后,vNGF能增加并延长GAP-43的表达强度,提高RGC的存活数量,对RGC有明显的保护作用.
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蛇毒神经生长因子对体外培养鼠视网膜神经节细胞的保护作用
目的 研究蛇毒神经生长因子(venom nerve growth factor,vNGF)对离体培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的存活和轴突再生的影响.方法 采用新生大鼠视网膜神经细胞体外原代培养技术,加入不同浓度的vNGF,通过检测细胞的活力选择一个佳浓度进行培养,行抗Thy-1.1免疫细胞化学染色,观察RGCs在体外的存活时间,比较实验组和对照组的RGCs个数、胞体直径和轴突长度.结果 vNGF的佳浓度是80 μg·L-1,用该浓度作用于细胞,实验组与对照组细胞存活时间分别为13～14 d和7～8 d,轴突长度分别为(111.78±10.65) μm 和(78.73±8.23) μm.阳性细胞个数分别为(224.23±3.83)个和(182.47±2.79)个.结论 vNGF能促进体外视网膜神经细胞和RGCs的存活以及轴突的伸长,有视神经保护作用.
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蛇毒神经生长因子对鼠视网膜神经节细胞微管相关蛋白-1B的影响
目的 通过对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)微管相关蛋白-1B(microtubule associated protein-1B,MAP-1B)的研究,观察蛇毒神经生长因子(venom nerve growth factor,vNGF)在鼠视神经夹伤后对RGCs的保护作用.方法 将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组、实验治疗组,每组20只.制作视神经夹伤模型,用头部宽1 mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向右眼玻璃体内注入vNGF 100 BU(0.025 mL).实验对照组向右眼玻璃体内注入0.025 mL平衡盐液.2组的左眼均未做任何处理,作为正常对照组.于损伤后3 d、7 d、14 d、30 d、60 d取材,在光镜下计数RGCs,透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化,并进行MAP-1B免疫组织化学染色分析.结果 光镜下,伤后3～30 d实验治疗组的RGCs数目高于实验对照组,差异有显著统计学意义(P＜0.01),伤后2组RGCs数目均比正常对照组少,差异有显著统计学意义(P＜0.01).伤后60 d,实验治疗组与实验对照组之间的RGCs数目差异无统计学意义(P＞0.05),实验治疗组、实验对照组与正常对照组差异有显著统计学意义(P＜0.01). 电镜下,伤后14 d实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组多,排列也较整齐.免疫组织化学结果:实验治疗组2周内MAP-1B表达逐渐增强,1个月时明显减弱;实验对照组3 d时有MAP-1B表达,到2周时表达明显减弱.结论 在视神经损伤早期,vNGF能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高MAP-1B的表达强度,提高RGCs的存活数量,对RGCs有明显的保护作用.
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蛇毒神经生长因子对大鼠视神经夹伤保护的电镜观察
目的研究蛇毒神经生长因子在视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护作用.方法将Wistar大鼠40只随机分为实验对照组和实验治疗组.制作实验性视神经夹伤模型,用头部宽1 mm的微型血管夹夹伤大鼠右眼视神经后,实验治疗组向伤眼玻璃体腔内注入蛇毒神经生长因子100 BU(0.025 mL).实验对照组向伤眼玻璃体腔内注入0.025 mL平衡盐液.于损伤后第3 d、7 d、14 d、30 d、60 d取材,用透射电镜观察不同时间段各组视网膜形态学变化.结果电镜下大鼠视网膜改变:实验治疗组和对照组电镜下均可见坏死和凋亡.伤后14 d,实验治疗组视网膜微管数目比实验对照组较多,排列比较整齐.结论在视神经损伤早期,蛇毒神经生长因子能减轻视神经夹伤后微管的损坏,提高视网膜神经节细胞的存活数量,对视网膜神经节细胞有明显的保护作用.
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蛇毒神经生长因子对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达影响
目的 探讨大鼠脊髓损伤后应用蛇毒神经生长因子对Caspase-3表达的影响.方法 将55只成年SD雄性大鼠随机分为蛇毒神经生长因子组(A组)、生理盐水组(B组)、假手术组(C组),按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分评价神经损伤程度及神经功能恢复情况;脊髓损伤后不同时间点(6 h、1 d、3 d、7 d、14 d)取材,HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测Caspase-3阳性细胞的表达,来比较分析两组的差异性.结果 HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组;BBB评分A组相对B明显提高,差异有显著性意义(P<0.05).A组和B组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达,神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均为B组>A组(P<0.05).结论蛇毒神经生长因子能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡,能改善脊髓损伤后的功能表现.
