小鼠鼻腔滴注纳米二氧化铈进入嗅球的研究

目的 研究鼻腔滴注的纳米二氧化铈(CeO2)颗粒可否通过嗅神经到达嗅球.方法 对小鼠左鼻孔滴注40μg放射性纳米CeO2材料,首次滴注后的第1、3和7天后麻醉处死小鼠,分离双侧的嗅球和嗅上皮组织,采用放射性示踪方法对双侧嗅球和嗅上皮组织中的纳米CeO2含量进行定量比较.结果 左侧嗅球和嗅上皮组织中的纳米CeO2含量呈现显著的时间累积效应,右侧嗅球和嗅上皮组织中的纳米CeO2含量增加无统计学意义(P＞0.05).结论 沉积在鼻腔粘膜上的纳米CeO2颗粒可以通过嗅神经到达嗅球.

138 人参养荣汤对嗅球损害小鼠脑内单胺和神经生长因子含量的影响

嗅三针对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马生长抑素、精氨酸加压素含量的影响

目的:观察嗅三针对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆功能及海马神经肽的影响,探讨嗅三针治疗VD的作用机制.方法:成年SD雄性大鼠40只,随机分为正常组、VD模型组、VD嗅球损毁针刺组、嗅三针组,每组10只.四血管阻断法制作VD大鼠模型,电凝法损毁嗅球模型.电针双侧"迎香""印堂",每日1次,共6周,水迷宫测试大鼠学习记忆能力,放射免疫法测定海马神经肽生长抑素(soma-tostatin,SS)和精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)含量.结果:定位航行试验显示:平均逃避潜伏期比较,VD模型组长于正常组(P＜0.01);嗅三针组短于VD模型组及VD嗅球损毁针刺组(P＜0.01);VD嗅球损毁针刺组与VD模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05).空间探索试验显示:原平台象限跨越相应平台的次数比较,VD模型组少于正常组(P＜0.01);嗅三针组多于VD模型组及VD嗅球损毁针刺组(P＜0.01);VD模型组与VD嗅球损毁针刺组比较差异无统计学意义(P＞0.05).海马 SS、AVP含量比较,VD模型组低于正常组(P＜0.05);嗅三针组高于VD模型组及VD嗅球损毁针刺组(P＜0.05);VD模型组与VD嗅球损毁针刺组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:嗅三针能够增强VD大鼠学习记忆功能,并且能提高海马神经肽SS、AVP的含量,其治疗效应的发挥与嗅觉传导通路的完整性有关.

“嗅三针”干预对帕金森病模型小鼠嗅球超微结构及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察“嗅三针”干预对脂多糖(LPS)经鼻诱导的帕金森病小鼠嗅球超微结构和中脑黑质胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响,为帕金森病的早期诊治提供思路及证据.方法:选用C57BL/6雄性小鼠40只,随机分为空白组、模型组、电针组、药物组,每组10只.除空白组外,其余各组均周经鼻灌注LPS 30 d建立帕金森模型.电针组自造模结束笫1天起取双侧“迎香”“印堂”穴进行电针干预,留针20 min,每日1次,5d为一疗程,疗程间休息2d,共进行4个疗程.药物组腹腔注射左旋多巴注射液10 mg/mL,每日1次,5d为一疗程,疗程间休息2d,共进行4个疗程.空白组与模型组不进行干预.各组小鼠于干预结束后第1天采用足迹分析及游泳试验评分法进行行为学测试,并采用透射电镜观察嗅球超微结构变化,免疫印迹法测定中脑黑质GFAP蛋白表达的变化.结果:①造模后,模型组、电针组、药物组小鼠震颤、怕冷等症状显著,且体质量较空白组显著下降(均P＜ 0.01);行为学测试结果显示,模型组、电针组、药物组小鼠步长及游泳时间均较空白组小鼠显著减少(均P＜ 0.01),确认造模成功.②第1个疗程后,电针组未见震颤、怕冷、立毛等症状.经4个疗程干预后,电针组小鼠体质量较模型组显著升高(P＜ 0.05),药物组未见震颤、怕冷、立毛等症状,但体质量较模型组未发生明显变化(P＞ 0.05).③干预后,与空白组比较,模型组小鼠步长及游泳时间均显著减少(均P＜ 0.01);与模型组比较,电针组和药物组小鼠步长和游泳时间明显增加(均P＜ 0.01).④干预后,与空白组比较,模型组嗅球组织细胞器及超微结构病理改变明显,与模型组比较,电针组改善了嗅球超微结构.⑤干预后,与空白组比较,模型组小鼠黑质中GFAP蛋白的表达显著升高(P＜ 0.05);与模型组比较,电针组与药物组黑质中GFAP表达均下降(均P＜ 0.05).结论:“嗅三针”早期干预可以改善LPS经鼻诱导的帕金森病模型小鼠行为学障碍,其机制可能与“嗅三针”改善嗅球超微结构及降底黑质GFAP的表达有关.

僧帽细胞电位发放的模型分析

本文构造从感觉神经元、僧帽细胞到大脑皮层神经元,并反馈到颗粒细胞的嗅觉神经系统模型.数值分析模型结构中各个神经元的电位发放,特别是嗅小球内的细胞电位变化,结果显示僧帽细胞的发放对感觉神经元的刺激变化较大,僧帽细胞对皮层细胞的相图出现各种模式,从而模型刻画了嗅觉系统中僧帽细胞的信息传递特性.

拟老年痴呆大鼠脑中GFAP和NSE蛋白表达的改变

目的 了解老年痴呆模型大鼠海马及嗅球中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的差异,从而了解嗅觉与老年痴呆的关系.方法 成年SD大鼠,通过向大鼠侧腑室内注射Aβ建立模型后用免疫组化方法 检测海马及嗅球中GFAP和NSE的表达,并对嗅球中两者蛋白水平表达的变化进行初步的检测.结果 通过比较模型组与对照组海马及嗅球组织,模型组GFAP的表达显著增加,而NSE的表达则降低.结论 老年痴呆大鼠模型组与对照组嗅觉系统内GFAP和NSE蛋白表达存在显著性差异.

成年大鼠嗅球和鼻腔嗅粘膜成鞘细胞的分离、培养与鉴定

目的在嗅球成鞘细胞(OECs)移植到脊髓可有助于损伤神经纤维再生的基础上,分别对嗅球和嗅粘膜的OECs进行培养,探索自体嗅粘膜作为OECs供体的可能性. 方法根据OECs、成纤维细胞和星形胶质细胞贴壁时间的不同,采用差时贴壁方法分离出OECs,培养14div后进行NGFRp75和GDNF的免疫细胞化学染色. 结果按形态学和免疫组织化学特性,培养的嗅球和嗅粘膜OECs可分为3 类:双极细胞、三级细胞和扁圆细胞,其中以双极细胞多.嗅粘膜的双极成鞘细胞的突起更加细长. 结论差时贴壁细胞分离法是一种简单、经济、实用的成鞘细胞分离方法.鼻腔嗅粘膜OECs的形态学和免疫细胞化学特性与嗅球OECs基本相同,本实验为临床开展自体嗅粘膜OECs修复脊髓损伤的研究提供参考.

Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学观察

目的 探讨小鼠室管膜下区(SVZ)的神经干细胞孵育成熟以及沿喙端迁移流(RMS)切线迁移至嗅球(OB)的过程,尤其是Reelin对细胞迁移和细胞分化的影响.方法 选用野生型(WT)小鼠50只和纯合reeler小鼠23只胚胎16 d至生后90 d的各年龄点小鼠大脑,应用尼氏染色、免疫荧光染色、墨汁灌注及电子显微镜技术标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系,比较两组小鼠RMS的发育情况.结果 胚胎后期至出生早期,在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网,它们相互联系构成SVZ神经于细胞孵育的血管龛(niche);神经干细胞在niche中孵育成熟后可以进入RMS,切线迁移至嗅球,到达嗅球后转变为放射状迁移,分化为各种神经元整合入嗅球;神经干细胞在RMS的迁移过程中,放射状胶质细胞协同血管为其提供支架引导;reeler小鼠也能形成RMS,但形态有所改变,主要在嗅球处,神经干细胞失去规律排列,呈散乱分布.结论 室管膜下区的niche是神经干细胞的主要来源;血管协同放射状胶质细胞为RMS中的神经干细胞提供支架引导作用;作为调节细胞迁移的重要信号,Reelin可以通过其交互作用影响血管的发育,Reelin缺失导致嗅球处神经干细胞放射状迁移的转变障碍.

帕金森病MPTP食蟹猴模型嗅球细胞凋亡

目的 建立1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢毗啶(MPTP)帕金森病(PD)模型,探讨模型组嗅球细胞凋亡和胶质细胞增生情况.方法 3只成年健康食蟹猴,静脉注射MPTP建立PD模型,另3只静脉注射生理盐水作为对照.取出嗅球,免疫组织化学染色检测Caspase-3、Bcl-2、离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在食蟹猴嗅球中的表达情况,采用Image J v1.8.0软件分析模型组和对照组之间的差异.结果 MPTP损伤后,与对照组相比,模型组嗅球突触小球层Caspase-3阳性细胞数明显增加,而Bcl-2表达减少;与对照组相比,模型组嗅球突触小球层和外网状层的GFAP和Iba-1阳性细胞数增加.结论 MPTP可诱导食蟹猴嗅球突触小球层细胞凋亡,并伴有星形胶质细胞增生和小胶质细胞激活,这可能与帕金森病的功能障碍有关.

1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶对食蟹猴嗅球多巴胺能神经元的影响

目的：建立食蟹猴1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）帕金森病系统性模型，探讨嗅球中多巴胺（DA）及多巴胺/cAMP调节磷蛋白（DARPP32）的表达情况。方法3只成年健康食蟹猴，静脉注射MPTP，建立帕金森病系统性模型，取出嗅球，切片，免疫组织化学染色DA和DARPP32，摄片并观察DA和DARPP32在食蟹猴嗅球中的分布及表达情况，采用Image Pro-Plus软件，半定量分析模型组和正常组之间DA和DARPP32的表达差异。结果食蟹猴嗅球中DA和DARPP32神经元集中分布于突触小球层， DA神经纤维分布于突触小球层，而DARPP32神经纤维分布于嗅球各层，以突触小球层（ GL）和外网状层（ EPL）为密集。 MPTP损伤后，与正常对照组比较，DA和DARPP32神经元及神经纤维均减少，以DA神经元及神经纤维减少明显。结论食蟹猴嗅球中DA神经元和神经纤维分布于突触小球层。食蟹猴MPTP帕金森病系统性模型的嗅球DA能神经元和纤维明显减少，可能与帕金森病嗅觉障碍有关。

喙端迁移流的发生及其细胞凋亡

目的 研究生后不同日龄小鼠喙端迁移流(RMS)的发育,神经干细胞增殖和凋亡的规律. 方法 利用Caspase-8免疫荧光标记法和5'-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)法,对小鼠RMS内的神经干细胞增殖和凋亡进行研究(n=92). 结果 生后早期小鼠脑内,尤其是室管下区(SVZ)和RMS,存在大量的增殖细胞.随着小鼠年龄的增加,脑内干细胞逐渐减少,到成年,大脑皮质几乎见不到增殖的神经干细胞,但在SVZ和RMS仍可以看到许多增殖的神经干细胞.在RMS,神经干细胞增殖的同时伴随着细胞凋亡,干细胞的增殖与凋亡存在着正相关关系.结论 RMS的神经干细胞增殖与凋亡有重要的生理意义,通过细胞凋亡,RMS可以调节神经干细胞向嗅球迁移的数量,也可以调节干细胞向颗粒细胞分化.

嗅鞘细胞移植促进神经修复的研究与进展

嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)是分布于嗅觉系统嗅球和嗅上皮基底膜的一种特殊的胶质细胞.研究表明,嗅鞘细胞在中枢和周围神经系统内均能够促进损伤神经轴突的再生和类髓鞘的形成,促进受损神经功能的修复.中枢源性与周围源性的嗅鞘细胞具有相似的生物学特性,鼻黏膜活检可以是嗅鞘细胞自体移植的来源.本文就近年来嗅鞘细胞在神经损伤修复中的应用研究的现状和进展做一综述.

上呼吸道感染后嗅球体积与嗅觉功能的相关性

目的 分析上呼吸道感染后嗅觉功能障碍患者的嗅球体积与嗅觉功能的相关性.方法 25例因上呼吸道感染而致嗅觉功能障碍的患者(患病组)纳入研究,其中14例嗅觉功能丧失,11例嗅觉功能减退.以25名年龄相匹配的健康志愿者作为对照组.两组均接受Sniffin Sticks嗅觉功能测试及3D MRI.患病组中11例于2～6个月后复查嗅觉功能及MRI.结果 与对照组相比,患病组双侧嗅球体积显著减小(P均＜0.05).患病组中,嗅觉丧失患者的嗅球体积小于嗅觉减退者(P＜0.05).11例复查患者中,4例嗅觉功能好转,嗅球体积较前增大；7例嗅觉功能及嗅球体积无明显变化.结论 嗅球体积与嗅觉功能具有相关性；上呼吸道感染后嗅球体积减小可以反映嗅觉障碍的程度.

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床应用前景

嗅鞘细胞是一种特殊神经胶质细胞,具有神经膜细胞和星形胶质细胞二者的特性,主要存在于中枢神经的嗅球及外围神经的嗅黏膜中.嗅鞘细胞起源于嗅黏膜的固有层,它包绕嗅神经,通过筛状板终到达嗅球的嗅神经层和嗅小球层.

嗅鞘胶质细胞的培养、鉴定及在脊髓损伤中的应用

近几年随着对神经系统研究的不断深入,人们发现成熟的嗅觉系统感觉神经细胞与其它中枢神经系统不同,能够不停地进行自我更新,其新形成的轴突长入嗅球后可形成完整的突触功能联系.

胰岛素样生长因子1与缺氧缺血性脑病的研究进展

一、胰岛素样生长因子1(insulin-Like growth factor-1,IGF-1)及其受体在中枢神经系统(CNS)中的分布IGF-1是一种含70个氨基酸的多肽,分子量11KD.它在脑组织有广泛的分布,且不同区域的含量不尽相同.Yamaguchi等[1]用放免法测得成年SD大鼠8个脑区组织内IGF-1含量由高到低依次为:垂体、嗅球、上脑干、小脑、纹状体、海马、低位脑干、大脑皮层.

用于移植的嗅鞘细胞的纯化培养方法研究

目的 探讨移植用成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方法.方法 取成年SD大鼠嗅球,将分离消化所得细胞悬液进行接种.然后分别于接种后2 h、6 h和18 h 3个时间点进行单步骤差速贴壁法去除成纤维细胞,纯化嗅鞘细胞,纯化培养约11 d时采用神经生长因子受体P75(NGFRP75)和碘化丙啶(PI)双染OECs并对其纯度及细胞数量进行免疫荧光鉴定分析.结果 纯化培养11 d后在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,数量级达106/mL,形态以梭形、双极或三极突起为主,亦有少量多极或单极细胞.2 h、6 h和18 h组嗅鞘细胞纯度分别为(53±5)%、(73±8)%和(69±13)%,组间差异有统计学意义(F=11.766,P<0.001). 结论分别经2、6、18 h单步骤差速贴壁法纯化的OECs在纯度和数量级上均可满足移植用细胞的要求,且方法简单、经济、快捷.

嗅球切除大鼠抑郁动物模型的研究进展

寻找有效的抗抑郁药是医药研究人员的迫切任务,而建立有效的抑郁动物模型是筛选新型抗抑郁药的前提.

嗅鞘细胞移植治疗自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的研究嗅鞘细胞(OECs)的培养及其对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用.方法取36只EAE模型大鼠,将其随机分为移植组18只,假手术组18只.用新生Wistar大鼠嗅球培养出OECs,移植组将OECs悬液注入EAE大鼠的侧脑室;假手术组按以上方法注入等量生理盐水.观察2组大鼠运动功能评分、组织病理学变化以及血管内皮生长因子(VEGF)表达情况.结果(1)OECs移植组运动功能评分从第1天的(6.8±0.7)分降至第20天的(1.1±0.3)分,显著优于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)组织病理切片可见OECs移植组髓鞘修复明显优于假手术组;(3)OECs移植组VEGF的表达从第1天的(22.1±2.8)个/mm2增至第10天的(300.6±5.1)个/mm2,后逐渐降至第21天的(99.0±3.5)个/mm2,在各时间点的表达均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论OECs移植可以促进EAE的髓鞘修复,改善运动功能,同时可使VEGF大量表达,诱导病灶周围新生血管的生成.

神经干细胞和嗅鞘细胞联合移植与神经干细胞移植治疗实验性脑出血的比较

目的对比神经干细胞(NSCs)和嗅鞘细胞(OECs)联合移植与NSCs移植治疗大鼠脑出血的疗效.方法制作大鼠脑出血模型,记录细胞移植后对照组和移植组(NSCs组、NSCs-OECs组)大鼠运动功能,采用免疫组化观察移植细胞在体内存活、分化和迁徙的情况.结果 NSCs-OECs组和NSCs组移植NSCs分别有14.19%和2.96%分化为神经元,差异有统计学意义(χ2＝154.79,P<0.01),30 d时神经功能缺损评分NSCs组为1.60±0.13,NSCs-OECs组为1.01±0.11,差异有统计学意义(P<0.05),OECs移植后能存活、迁徙,NSCs移植后能存活、分化为神经元、星形和少突胶质细胞,并向损伤区迁徙.结论 OECs-NSCs移植改善脑出血大鼠运动功能的疗效优于单纯NSCs移植.