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耳穴经皮电刺激对颞叶癫痫大鼠癫痫发作频率与海马区胶质细胞活性及炎性因子的影响
目的:观察经皮电刺激耳迷走神经支配的耳穴对颞叶癫痫大鼠自发癫痫发作频率、海马区胶质细胞活性及促炎细胞因子白细胞介素(IL)-6、抗炎细胞因子IL-10表达的影响,探讨耳穴刺激对颞叶癫痫的缓解效应及其可能的细胞与分子机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组,每组12只.采用氯化锂-匹罗卡品多次小剂量重复注射制备慢性颞叶癫痫大鼠模型.对治疗组耳甲腔内耳穴"心""肺""皮质下"进行经皮电刺激干预,每日1次,每次20 min,治疗6周.用长时程视频系统监测大鼠的癫痫发作情况,治疗后用免疫荧光与Real-time PCR方法观察癫痫大鼠海马区小胶质细胞标记物Iba 1、星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及IL-6、IL-10的表达情况.结果:模型组大鼠癫痫自发频率随时间延长显著增加,治疗组大鼠的自发癫痫频率较模型组显著降低(P<0.05).与正常组比较,模型组大鼠海马CA 1、CA 3区Iba 1、GFAP、IL-6免疫阳性细胞数明显增多(P<0.05),IL-6 mRNA表达水平显著上调(P<0.05).与模型组比较,治疗组大鼠海马CA 1、CA 3区Iba 1、GFAP、IL-6免疫阳性细胞数明显减少(P<0.05),IL-6 mRNA表达水平显著下调(P<0.05),IL-10阳性细胞数及mRNA表达水平显著上调(P<0.05).结论:耳迷走神经支配的耳穴经皮电刺激干预能显著降低慢性颞叶癫痫大鼠的癫痫发作频率,此效应可能与下调海马区胶质细胞活性,下调海马内促炎细胞因子IL-6,上调抗炎细胞因子IL-10的蛋白及基因表达水平密切相关.
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中医药保护脑缺血再灌注损伤后神经血管单元的作用
脑缺血再灌注损伤(CIRI)是多环节、多因素、多途径的酶促级联反应,其发生发展与炎症、氧化应激、血管功能紊乱、细胞凋亡等机制密切相关.目前针对CIRI后特定神经元或血脑屏障等单一结构功能改变的研究较多,而对脑组织整体变化的研究较少.神经血管单元是由血管、神经元、血脑屏障及神经胶质细胞相互作用构成的整体.当CIRI损伤后,出现神经元变性、坏死,血脑屏障通透性改变,小胶质细胞增生等一系列复杂的病理变化,终引起继发性脑损伤.因此在治疗策略中,通过加强神经细胞-细胞间和非神经细胞之间的信号联系,双向调节神经-胶质细胞-血管内皮细胞,促进神经元存活,提高突触重塑及神经再生等修复过程,是保证神经血管单元间正常功能和血流的物质基础,可作为新的治疗靶点,故神经血管单元概念的提出为缺血性脑损伤的基础研究及临床治疗提供了新的研究方向.中医药具有多组分、多靶点及整体调节的优势特点,能够对CIRI后神经血管单元起到整体保护作用.笔者拟对CIRI后神经血管单元结构的改变及中医药对其调节作用机制进行综述.
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脊髓胶质细胞——电针镇痛研究新靶点
新近发现,脊髓胶质细胞活化与病理性疼痛的发生和维持密切相关,突破了人们对疼痛发生和维持的传统观念——仅有神经元参与.体内和体外研究都提示电针可干预脊髓胶质细胞活化,且抑制胶质细胞活化可协同电针镇痛作用,因此认为脊髓胶质细胞及其与神经元构建的网络系统可能成为电针镇痛研究的又一新靶点.
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补肾活血方对阿尔茨海默病模型大鼠脑内胶质细胞的影响
全楷体目的:观察补肾活血中药黄芪三仙汤对AD大鼠脑内海马区胶质细胞的影响,探讨补肾活血中药治疗阿尔茨海默病(AD)的中枢免疫调节机制.方法:大鼠随机分组,于大鼠右侧Meynert核注入β-淀粉样蛋白(Aβ1-40)制成AD模型,4周后观察各组脑组织中神经胶质细胞超微结构变化.结果:模型组海马区可见神经胶质细胞增生,神经细胞变性.在变性神经细胞的周边和血管周围小胶质细胞增生活跃,脂褐素较多.治疗组和假手术组可见神经胶质细胞,数量较模型组明显减少.正常对照组可见少量脂褐素,其余超微结构基本正常.结论:黄芪三仙汤能明显抑制CNS的免疫炎性反应,抑制神经原变性、坏死,从而达到治疗AD的作用.
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银杏叶提取物对衰老大鼠前额叶皮层和海马炎性细胞因子及胶质细胞超微结构的影响
目的 探讨银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract 50,GBE50)对衰老模型大鼠前额叶皮层和海马炎性细胞因子以及胶质细胞损伤的作用及可能的机制.方法 45只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(12只)、模型组(11只)、GBE50低剂量组(10只)和GBE50高剂量组(12只).采用D-半乳糖腹腔注射42天的方法建立衰老大鼠模型；造模第22天开始,GBE50低、高剂量组分别给予GBE50 75、150 mg/(kg·d)灌胃给药,持续21天.用药结束后采用放射免疫分析法和实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠前额叶皮层和海马IL- 1β、IL-6和TNF-α蛋白含量和mRNA表达；透射电镜观察海马CA1区胶质细胞的超微结构.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠前额叶皮层和海马IL- 1β、TNF-α蛋白含量及mRNA表达均明显升高(P＜0.05,P＜0.01),海马IL-6蛋白含量明显降低(P＜0.01).与模型组比较,GBE50低、高剂量组前额叶皮层和海马IL-1β蛋白含量及mRNA表达明显下调；GBE50低、高剂量组前额叶皮层和低剂量组海马TNF-α蛋白含量明显下调(P＜0.05,P＜0.01)；GBE50低剂量组前额叶皮层和GBE50高剂量组海马IL-6蛋白含量明显上调,GBE50低、高剂量组前额叶皮层IL-6 mRNA表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).GBE50低、高剂量对大鼠海马CA1区胶质细胞超微结构的损伤具有明显恢复作用.结论 GBE50对衰老大鼠神经炎症反应具有抑制作用,其机制可能与其对前额叶皮层和海马细胞因子、胶质细胞超微结构有不同程度的调节作用有关.
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从神经血管单元探讨中医药治疗帕金森病的思路
帕金森病(PD)临床治疗主要以多巴胺(DA)替代疗法为主,疗效并不理想.近年来研究表明,神经血管单元包括脑血管内皮转运机制异常所导致的神经毒性物质清除障碍以及与DA能神经元、胶质细胞相互作用功能异常可能是PD发病的重要原因.重视神经血管单元中各成分的相互作用,将其作为一个功能性整体来研究,并运用中药多组分、多层次、多靶点和多机制的优势,在诸多靶点中选择有效的干预,是中医药治疗PD的新思路.
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电针对阿尔茨海默病大鼠海马区胶质细胞活化及神经元超微结构的影响
目的 观察电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区胶质细胞活化及神经元超微结构的影响,探讨电针对神经元的保护作用.方法 Meynert核注射微量Aβ1-40制备AD大鼠模型,随机分成正常组、假手术组、模型组和电针组,每组14只.电针组选取百会、太溪、足三里电针治疗.免疫组化法观察各组大鼠海马区胶质细胞的表达,用透射电镜观察神经元超微结构.结果 模型组海马区胶质细胞活化,数量增多,神经细胞变性,内质网扩张,线粒体肿胀.经电针治疗后,活化胶质细胞数量较模型组减少,超微结构基本正常.结论 电针治疗可减少AD大鼠胶质细胞的活化,对神经元具有保护作用.
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左旋丁基苯酞抑制氧糖剥夺/复氧所致原代培养小鼠脑胶质细胞内NF-κB和IκB-α蛋白表达
目的 观察左旋丁基苯酞(1-NBP)对原代培养小鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后NF-κB、IKB-α蛋白表达的影响.方法 体外培养小鼠脑胶质细胞,建立细胞OGD/R损伤模型.将胶质细胞分为5组:正常对照(Nc)组、OGD 24 h/R 24 h组、1-NBP 20、100及500 μmol/L组.Western-blot检测各组细胞核蛋白中NF-κB蛋白表达和胞质蛋白中IκB-α蛋白降解情况.结果 OGD 24 h/R 24 h组NF-κB蛋白表达较NC组明显增加(P＜0.01);I-NBP 100和500 μmol/L组NF-κB蛋白表达较OGD 24 h/R 24 h组明显下降(P＜0.01).OGD 24 h/R 24 h组IκB-α蛋白降解比NC组增多(P＜0.01);1-NBP 500 μmol/L组IκB-α蛋白降解较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P＜0.05).结论 1-NBP能抑制脑胶质细胞OGD/R后炎症反应,表现为减少IκB-α蛋白降解,抑制NF-κB活化.
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水通道蛋白在胶质细胞的表达及其意义
20世纪80年代,美国学者Peter Agre发现质膜上存在一类介导水快速跨膜转运的膜蛋白,这类膜蛋白被称作水通道蛋白.已有大量研究发现胶质细胞表达的水通道蛋白对神经系统疾病的发生有重要作用.本文综述水通道蛋白在胶质细胞的表达定位及其意义,为中枢和周围神经系统疾病的诊断和治疗提供新的靶点.
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神经干细胞微环境的研究进展
传统观念认为,成年哺乳动物中枢神经系统是不可能再生的.近年来的一些研究表明,成年啮齿类和灵长类动物CNS仍然可产生新的神经元,并证实在成人脑组织中也有神经干细胞(neural stem cells,NSCs)存在.神经干细胞在体外可被生长因子诱导而增殖,并保持分化成神经元或胶质细胞的潜能,移植后能在宿主的神经组织中生存、整合及分化,并且通过基因转染后可表达外源性基因产物.因此,人们对神经系统损伤的修复机制以及神经系统退行性疾病的治疗又有了新的认识,目前迫切需要解决的就是体外培养神经干细胞保持其强大的增殖能力和诱导神经干细胞定向分化的问题.目前已证实,局部微环境在神经干细胞的增殖和分化中起着重要作用,成体脑内神经干细胞微环境因素包括细胞间的相互作用、体细胞信号、血管微环境、细胞外基质和基板等,以及在胚胎水平通过染色体修饰和重建的调控亦参与了干细胞生物学的增殖和分化过程.
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神经干细胞诱导分化的研究进展
长期以来人们一直认为人脑的神经元缺乏再生能力,如遇损伤,失去的神经细胞是永久性的,它只能由胶质细胞所替代,这使得中柩神经损伤后的治疗与恢复非常困难.然而,随着研究的进一步深入,这一传统认识已被打破.1992年,Reynolds和Richards先从成年鼠的纹状体和海马中分离出能够不断增殖并具有分化潜能的细胞群落,提出了神经干细胞(neural stem cell,NSC)的概念.此后10年间,神经干细胞的研究成为当今生命科学的研究热点之一,从神经干细胞的分离、体外培养,到移植治疗神经系统疾病,都取得了较大发展.
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脑缺血后的神经发生及Wnt/β-catenin信号通路的调控
长期以来人们一直认为,成年哺乳动物神经系统是非再生性组织,即脑内的神经细胞是终生存活的,成熟的神经元没有再生能力.成年人脑损伤后,脑内失去神经细胞的现象也是永久的,失去的神经细胞只能由胶质细胞充填.近年的研究打破了这一传统认识.20世纪后十几年在神经生物学领域内的重要进展之一就是发现在成年脑组织内存在具有多向分化潜能的神经干细胞(neural stem cell,NSC).
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外周炎症性疼痛刺激诱导大鼠中脑导水管周围灰质胶质细胞激活及细胞因子的表达
目的 观察完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠中脑导水管周围灰质(PAC)中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子IL-β、TNF-α的表达变化.方法 结合行为学检测,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting以及免疫组织化学的方法,观察了大鼠后爪注射CFA后疼痛感觉的变化,并检测了PAG中上述标记物和细胞因子在基因水平和蛋白水平的表达变化.结果 注射CFA后,注射侧后爪出现热痛过敏和机械性触诱发痛;大鼠的热痛过敏14d基本恢复正常,但机械性触诱发痛持续到21d时仍未恢复正常;星形胶质细胞标记物GFAP在急性期和慢性期有显著增加;小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子(IL-β、TNF-α)在急性期、亚急性期和慢性期均有增加.结论 小胶质细胞的激活可能与炎性疼痛的起始相关,而星形胶质细胞可能与疼痛的维持相关,细胞因子表达的增加可能对痛觉过敏的发生起重要作用.
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脊髓混合性胶质细胞机械损伤后的形态变化
目的建立体外培养的脊髓胶质细胞机械损伤模型,观察机械性损伤刺激后,混合性胶质细胞内不同细胞的形态变化及其特性. 方法 14～15d胎龄的小鼠脊髓制成细胞悬液后,在含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养4周,形成富含星形胶质细胞的平铺混合胶质细胞,用塑料滴头刮损后,在刮损缘的反应性胶质细胞增生,肥大,向刮损裸区内生长并发生细胞分裂. 结果增长的细胞沿刮损方向呈极性排列,可伸出纤长的突起,突起上有串珠样结构自胞体向突起末端移动,并可相互间发生融合. 结论免疫细胞化学染色表明损伤边缘的胶质细胞GFAP染色加深,但进入损伤区的细胞并非GFAP阳性,也不为识别纤维细胞抗原的抗体所标记,其可能的来源和特性还有待进一步确定.
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不同诱导因子对人脐带血非造血干细胞神经分化的影响
目的 探讨诱导人脐带血非造血干细胞向神经细胞分化的佳条件.方法 通过密度梯度离心法原代培养脐带血非造血干细胞;用流式细胞术分析脐带血获得的贴壁细胞的CD34、CD90、CDl66、HLA-ABC、HLA-DR等免疫表型;并用不同诱导因子组合:1.维甲酸(RA);2.表皮生长因子(EGF)+碱性成纤维细胞生长因子(bFGF);3RA+EGF+bFGF;4二甲基亚砜(DMSO)+丁羟基茴香醚(BHA)诱导后,用免疫荧光化学法检测各组脐带血非造血干细胞中β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖苷酶-C(Gal-C)等神经细胞、星型胶质细胞及少突胶质细胞的特异性标记抗原的表达.结果 脐带血非造血干细胞CD90、CD166、HLA-ABC表达阳性;无论那一种诱导因子组合,分化为少突胶质细胞的比率均高于神经元及星型胶质细胞;即各组分化为少突胶质细胞数＞神经元的细胞数＞星型胶质细胞数.对于少突胶质细胞(Ga-C)以RA+EGF+bFGF组合诱导率高,达57.02%,其次是DMSO+BHA诱导组.而对于神经元及星型胶质细胞的分化各组比较,以RA组高,其次是DMSO+BHA诱导组合.结论 RA对神经元及星型胶质细胞的诱导作用较好,而RA+EGF+bFGF组合对于少突胶质细胞诱导作用明显.
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海马背侧注射β-淀粉样蛋白25～35激活胶质细胞和 p38丝裂原活化蛋白激酶诱导神经元凋亡
目的：探讨海马背侧注射β-淀粉样蛋白25～35（ Aβ25～35）后胶质细胞与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）激活的关系，及Aβ25～35诱导神经元凋亡的可能机制。方法采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察海马背侧注射Aβ25～35后不同时段小胶质细胞（ MG）、星形胶质细胞（ AS）的激活和磷酸化p38MAPK（ p-p38MAPK）在海马组织中的表达；酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）及白细胞介素-1β（ IL-1β）在海马组织中的含量；Nissl染色法观察海马神经元存活；TUNEL染色观察海马神经元凋亡。结果注射Aβ25～35后海马内抗特异性标记小胶质细胞（ox-42）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）、和p-p38MAPK的表达与TNF-α、IL-1β的含量同步增加，于7d达到高峰，而Nissl阳性神经元数量逐渐减少，TUNEL阳性神经元数量则逐渐增多，亦于7d达到高峰。结论海马背侧注射Aβ25～35可能通过激活胶质细胞和p38MAPK，使TNF-α，IL-1β含量增加导致海马神经元凋亡。
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壁虎胚胎大脑皮层神经元和胶质细胞的分离、培养及纯化
目的 建立多疣壁虎胚胎大脑皮层神经元和胶质细胞的分离、培养及纯化方法.方法 分离孵化15d的多疣壁虎胚胎的大脑皮层,经胰酶消化,细胞计数后接种于培养瓶.采用差速贴壁及反复传代相结合的纯化培养方法培养胶质细胞;采用添加B27的神经元培养基培养神经元,并用免疫细胞化学方法鉴定.结果 获得体外培养的壁虎GFAP阳性表达胶质细胞,4代后纯度达95%以上;采用神经元培养基,神经元生长良好,NF、MAPⅡ表达阳性,第10d纯度达95%以上.结论 建立了壁虎细胞的培养方法,并获得高纯度的胶质细胞和神经元,为进一步对神经系统的深入研究提供细胞模型.
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雌激素受体在发育不同时期大鼠大脑的表达
目的探讨雌激素受体(ER)在大鼠大脑神经元及神经胶质细胞表达的增龄性变化.方法采用免疫组织化学方法观察不同年龄正常组及脑损伤组SD大鼠脑内ER的表达变化并行统计学分析.结果正常老年组海马齿状回神经元ER表达明显少于青年组;脑损伤组海马各区出现大量ER阳性反应的胶质细胞,且青年组阳性胶质细胞明显多于老年组.结论老年组海马齿状回神经元雌激素受体表达下降,从而更易发生退行性变;在受到伤害性刺激时青年组胶质细胞表达更多的雌激素受体,从而更好地利用雌激素的神经保护作用.
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阿尔采末病中的炎症反应
阿尔采末病(Alzheimer病)是常见的老年病之一,其发病机制尚不明确,但已有大量相关的实验结果和假说,其中脑内的免疫炎症反应是一个重要的方面.小胶质细胞和星形胶质细胞是参与脑内炎症反应的主要免疫细胞.小胶质细胞可吞噬淀粉样蛋白,激活补体系统,释放大量炎性介质,激活星形胶质细胞.星形胶质细胞活化后参与淀粉样蛋白和其他病理沉积物的吞噬,也释放某些炎性细胞因子,部分反馈性抑制小胶质细胞活性.此外,脑内的炎症反应还与环氧酶、磷脂酶及自由基等密切相关.目前包括抑制胆碱脂酶活性、抗氧化、抑制淀粉样蛋白生成及聚集等在内的治疗方案均不能达到理想的疗效,而流行病学调查和临床实验回顾表明部分非甾体抗炎药可以降低其发病危险性,因此开发疗效更好、特异性更强、副作用低的抗炎药物是较有前景的方向.
关键词： Alzheimer病 炎症 细胞因子 淀粉样蛋白 胶质细胞 -
胶质细胞介导性激素的神经系统作用
性激素在神经系统的作用包括调节突触可塑性,参与脑的性别分化、衰老过程和神经损伤修复等.胶质细胞表达性激素受体,是性激素的靶细胞.性激素通过对胶质细胞的作用,再影响神经系统的功能,胶质细胞成为性激素对神经系统作用的中间环节.
