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蛋白磷酸酶-2A催化亚基C在小鼠不同器官中的分化表达与定位
目的 探讨蛋白磷酸酶-2A(PP-2A)的催化亚基 (PP-2Ac)在6只小白鼠不同器官中的表达模式与定位.方法 运用RT-PCR、免疫印迹法及免疫荧光技术等实验手段,分别从mRNA水平、蛋白和组织水平进行研究.结果在mRNA水平上,PP-2Ac在大脑中表达高,卵巢中表达次之,而肌肉、肾脏、脾脏、心脏、肝脏、肺及乳腺中表达相对较低,胃中表达低;在蛋白水平上,也是大脑中的表达高,卵巢、脾脏、心脏、肝脏和肺中表达水平相对较高,肌肉、肾脏、乳腺中表达相对较低,胃中表达低.免疫荧光结果显示,PP-2Ac的表达具有一定的组织特异性和细胞特异性.结论 PP-2A是哺乳动物体内重要的蛋白磷酸酶之一.
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渗入脑内的免疫球蛋白G与外周脂多糖引起大鼠脑内Toll样受体4的表达
目的 探讨从血循环中渗入到脑内的自体内源性免疫球蛋白G (IgG)对外周脂多糖(LPS)刺激引起的中枢神经系统内Toll 样受体4 (TLR4)表达的作用.方法 将SD大鼠20只随机分为4组,每组5只.LPS+生理盐水组:腹腔注射LPS 100μg/kg,6h后尾静脉给予生理盐水15μg/kg;AD组:尾静脉给予盐酸肾上腺素(AD)15μg/kg;LPS+AD组:先腹腔给予LPS,6h后静脉注射AD;对照组大鼠静脉注射生理盐水作为对照.后一次注射后30 min处死动物,取脑,分别用免疫荧光染色和RT-PCR方法 检测脑内TLR4的表达. 结果 免疫荧光染色显示,单独给予AD的动物中IgG免疫阳性产物呈斑片状分布于脑实质. LPS+生理盐水组的IgG免疫阳性产物仅限于血管周围;在LPS+AD组,IgG渗出区域内可见TLR4免疫阳性产物与小胶质细胞标志物Iba-1共存,双标的细胞分散于脑实质及血管附近,而LPS+盐水组TLR4阳性细胞呈内皮细胞样.RT-PCR结果显示,LPS+AD组TLR4的表达显著高于LPS+生理盐水组、AD单独注射组以及生理盐水对照组. 结论 大鼠血循环中的IgG渗入脑内可促进外周LPS引起的脑内TLR4表达.
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乏氧对肺癌细胞系HIF家族成员HIF-1α、HIF-2α和HIF-β表达的影响及其相关性
目的 探讨乏氧对不同类型肺癌细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)和乏氧诱导因子-β(HIF-β)基因表达的影响及其相关性. 方法 以0.5%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,采用定RT-PCR和Western blotting方法 分别检测乏氧处理4～24h人肺癌细胞系SPCA1、A549、H446、SH77、H520和95D中HIF-1α、HIF-2α和HIF-βmRNA和蛋白水平的表达. 结果 1.常氧下不同肺癌细胞系HIF-1α、HIF-2α mRNA表达水平较低,短期乏氧HIF-1α mRNA降低而HIF-2α mRNA增加,随乏氧时间延长两者mRNA表达逐渐增加.2.HIF-1α和HIF-2α蛋白在常氧下表达均较低,乏氧下两者表达增强但变化趋势不一致,HIF-1α蛋白在所有细胞中均有表达,HIF-2α蛋白仅在某些细胞有表达.3.HIF-β mRNA和蛋白在常氧或乏氧下表达无明显变化.4.相关性分析表明,乏氧下HIF-2α mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.989,P=0.011);而HIF-1α和HIF-β mRNA与蛋白无相关性. 结论 肺癌细胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-β对乏氧刺激表现出不同的应答方式且具有细胞特异性,乏氧对HIF-1α和HIF-2α的调控可能分别发牛在翻译和转录水平,而对HIF-β无明显的调控作用.
关键词： 肺癌细胞系 乏氧 乏氧诱导因子 反转录-聚合酶链式反应 免疫印迹法 -
脂多糖对小鼠铁代谢相关基因mRNA水平表达的影响
目的 探讨脂多糖(LPS)对小鼠肝脏和脾脏铁代谢相关基因mRNA水平表达的影响.方法 10只2月龄雄性小鼠腹腔注射LPS(0.5 μg/g), 6h后处死并取血液、肝脏和脾脏组织进行血常规测定,使用试剂盒检测血清铁和总铁结合力;使用半定量RT-PCR检测小鼠肝脏和脾脏铁代谢相关基因(HP)、膜铁转运蛋白1(Fpn1)和转铁蛋白受体1(TfR1)以及脾脏白细胞介素-6(IL-6)的mRNA变化. 结果 注射LPS 6h后可造成小鼠脾脏IL-6表达增加,肝脏HP表达增加(P＜0.05),肝脏和脾脏Fpn1表达减少,而肝脏TfR1表达亦减少,血清铁下降和适度贫血(P＜0.05). 结论 LPS可通过影响肝脏和脾脏铁相关基因HP、Fpn1和TfR1的mRNA表达而影响血清铁状态.
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尼古丁对PD大鼠黑质多巴胺能神经元变性的影响
目的 探讨尼古丁对帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺能神经元变性的影响及其机制. 方法 45只大鼠随机分为PBS对照组(CON)、生理盐水+ 脂多糖(NS)组、尼古丁+脂多糖(NIC)组,每组15只.黑质内立体定向注射脂多糖(LPS)或PBS后24h,免疫印迹法检测黑质诱导性一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达变化;黑质注射药物后14d,采用免疫组织化学法观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量及OX-42阳性细胞形态学变化,RT-PCR及免疫印迹检测黑质TH mRNA及TH蛋白的表达水平. 结果 与CON组相比,NS组大鼠黑质iNOS表达明显增多,TH阳性神经元、TH mRNA及TH蛋白明显减少,小胶质细胞大多呈胞体大突起短粗的形态;NIC组黑质iNOS表达明显少于NS组,黑质TH阳性神经元、TH mRNA及TH蛋白表达较NS组明显增多,大部分小胶质细胞呈胞体小,突起细长的形态. 结论 尼古丁可以减轻LPS介导的多巴胺能神经元变性,对多巴胺能神经元有保护作用,其保护机制与抑制小胶质细胞激活、减少iNOS的表达有关.
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Caspase-3和核转录因子-κB在APPSWE转基因小鼠海马内的表达
目的 探讨阿尔茨海默病(AD)的发生、发展与神经细胞凋亡之间的规律,以及核转录因子κB(NF-κB)在神经细胞凋亡中的调节作用,为阿尔茨海默病的发病机理和临床治疗提供依据. 方法 分别取P0、P7、P14、P30、P90、P180日龄的APPSWE转基因小鼠为模型组,各日龄同窝生野生型小鼠为对照组,应用Nissl染色观察其海马结构和锥体细胞形态,免疫组织化学方法检测小鼠海马细胞内半胱天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)表达及NF-κB激活情况,RT-PCR检测小鼠海马caspase-3 mRNA的表达. 结果 模型组及对照组小鼠海马CA3区锥体细胞中凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均随日龄的增大而逐渐下降,在P30后趋于稳定; 与对照组相比,模型组凋亡细胞密度和NF-κB阳性细胞密度均增高,自P14以后具有统计学意义 (P<0.01或P<0.05); RT-PCR检测小鼠海马caspase-3 mRNA表达结果与Caspase-3免疫组织化学检测结果基本吻合. 结论 凋亡相关基因caspase-3和NF-κB在阿尔茨海默病的发病机理中起重要作用,NF-κB的激活可能促进神经细胞凋亡.
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创伤后应激障碍大鼠海马Ca~(2+)/钙调蛋白的改变
目的 观察创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元Ca~(2+)信号及钙调蛋白(CaM)的表达变化,探讨PTSD行为异常的神经生物学机制. 方法 采用国际认定的无连续单一应激(SPS)方法刺激建立大鼠PTSD模型.成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为SPS模型的12h、1d、4d、7d组及正常对照组,采用荧光探针标记法、免疫组织化学、免疫印迹和RT-PCR法检测Ca~(2+)含量和CaM的表达变化.结果 SPS刺激后大鼠海马神经元内游离Ca~(2+)浓度(nmol/L)于12h内升高,24h增至顶峰,7d恢复正常.CaM的表达于SPS刺激后1d表达多,之后渐趋下降. 结论 海马Ca~(2+)信号调控与CaM的表达变化可能是PTSD大鼠情感行为异常的重要病理生理基础之一.
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慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化
目的 探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化. 方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(30只)和慢性强迫游泳应激组(30只).慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca~(2+)浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化. 结果 慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义(P<0.01);开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义(P<0.05);水迷宫实验逃避潜伏期分别为(20.762±3.236)s和(5.632±1.065)s,差异有统计学意义(P<0.01);海马神经元内游离Ca~(2+)浓度分别为(498.94±40.45)nmol/L和(288.91±32.42)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.01). 结论 海马Ca~(2+)及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一.
关键词： 慢性强迫游泳应激 海马 钙离子 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ 免疫电镜 免疫印迹 反转录-聚合酶链式反应 大鼠 -
rAAV2-hGAD65重组载体的构建和功能检测
目的 构建rAAV2-hGAD65重组载体,观察其体内外功能.方法 应用RT-PCR的方法克隆hGAD65基因,与AAV载体连接得到重组载体(rAAV2-hGAD65).包装重组腺相关病毒并检测病毒的滴度.体外感染成纤维细胞后,用免疫组织化学的方法检测GAD65在细胞中的表达水平,用高效液相色谱(HPLC)法检测培养上清中γ-氨基丁酸(GABA)的含量.在体实验中,向丘脑底核(STN)立体定位注射rAAV2-hGAD65后,用HPLC方法检测黑质网状部(SNr)中的GABA含量.结果 应用RT-PCR方法成功地从人胚胎端脑组织中克隆出GAD65基因的cDNA,基因测序显示与基因库中人GAD65基因序列一致,亚克隆入AAV载体并包装后所得的病毒颗粒的滴度达到4.5×10~(11)/ml.组织化学检测感染大鼠肺成纤维细胞的效率约为80%,HPLC检测培养上清中GABA的含量为(45.66±6.07)nmol/L.STN立体注射rAAV2-hGAD65后,在STN可以检测到hGAD65的表达,SNr区GABA的含量由原来的(5.66±1.07)nmol/g升高到(12.66±2.59)nmol/g.结论 成功地克隆出了人GAD65基因,并构建了AAV重组载体.AAV病毒颗粒在体外能感染成纤维细胞并具有催化谷氨酸合成GABA的功能.在体内实验中,向STN注射rAAV2-hGAD65后,可以增加黑质网状部(SNr)中的GABA含量.
关键词： 谷氨酸脱羧酶2 腺相关病毒载体 基因克隆 反转录-聚合酶链式反应 人 -
创伤后应激障碍模型大鼠内侧前额皮质磷酸化细胞外信号调节激酶1/2及c-fos的变化
目的 探讨创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠内侧前额皮质(mPFC)磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)和c-fos的表达变化.方法 将30只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(15只)和PTSD模型组(15只),采用无连续单一应激(SPS)方法 制备PTSD模型.用免疫组织化学和免疫印迹法检测mPFC pERK1/2的表达变化,RT-PCR检测c-fos mRNA表达变化. 结果 免疫组织化学分析显示,对照组和模型组pERK1/2阳性细胞数分别为10.4±2.07、48.8±10.08,阳性信号吸光度值分别为24.955±3.691、110.810±10.643,差异有统计学意义(P<0.01);免疫印迹分析显示,对照组和模型组pERK/2相对表达量分别为0.510±0.052和1.109±0.106,差异有统计学意义(P<0.01);RT-PCR分析结果 显示,对照组和模型组c-fos mRNA相对表达分别为0.267±0.067和1.049±0.131,差异有统计学意义(P<0.01). 结论 mPFC pERK1/2和c-fos表达增高,可能参与了PTSD模型大鼠的病理生理过程.
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血管内皮生长因子C及其受体3在人恶性黑色素瘤组织内的表达及意义
目的 观察人恶性黑色素瘤组织内血管内皮生长因子C(VEGF-C)及其受体3(VEGFR-3)的表达,探讨VEGF-C和VEGFR-3在恶性黑色素瘤淋巴管生成及淋巴道转移中的作用.方法 取人恶性黑色素瘤组织48例(石蜡标本30例,术后新鲜组织18例),应用免疫组织化学和RT-PCR技术,观察VEGF-C和VEGFR-3蛋白及mRNA在恶性黑色素瘤组织内的表达情况.以淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE-1)标记淋巴管,计数恶性黑色素瘤组织淋巴管数密度.结果 VEGF-C和VEGFR-3蛋白主要表达于恶性黑色素瘤细胞胞浆内,在肿瘤周围的血管和淋巴管内皮上也可见VEGFR-3蛋白表达,VEGF-C和VEGFR-3蛋白在淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的表达水平明显高于无淋巴结转移组(P<0.05).在18例新鲜恶性黑色素瘤中,淋巴结转移组VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01).LYVE-1表达于肿瘤间质内的淋巴管内皮细胞,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度(LMVD)为9.845±2.454,无淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织中的淋巴管数密度为6.534±2.193,淋巴结转移组恶性黑色素瘤组织内的淋巴管数密度明显高于无淋巴结转移组(P<0.01).结论恶性黑色素瘤组织内VEGF-C表达明显增高,并通过上调其受体VEGFR-3的表达促进恶性黑色素瘤组织内淋巴管的生成,从而促进恶性黑色素瘤的淋巴道转移.
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外周炎症性疼痛刺激诱导大鼠中脑导水管周围灰质胶质细胞激活及细胞因子的表达
目的 观察完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠中脑导水管周围灰质(PAC)中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子IL-β、TNF-α的表达变化.方法 结合行为学检测,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blotting以及免疫组织化学的方法,观察了大鼠后爪注射CFA后疼痛感觉的变化,并检测了PAG中上述标记物和细胞因子在基因水平和蛋白水平的表达变化.结果 注射CFA后,注射侧后爪出现热痛过敏和机械性触诱发痛;大鼠的热痛过敏14d基本恢复正常,但机械性触诱发痛持续到21d时仍未恢复正常;星形胶质细胞标记物GFAP在急性期和慢性期有显著增加;小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子(IL-β、TNF-α)在急性期、亚急性期和慢性期均有增加.结论 小胶质细胞的激活可能与炎性疼痛的起始相关,而星形胶质细胞可能与疼痛的维持相关,细胞因子表达的增加可能对痛觉过敏的发生起重要作用.
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低剂量米非司酮对人卵巢颗粒细胞的影响
目的 观察低剂量米非司酮对体外培养的人卵巢颗粒细胞的影响,探讨其抑制或延迟排卵的分子机制. 方法 应用细胞培养,通过倒置显微镜、电子显微镜观察米非司酮对体外培养的人卵巢颗粒细胞形态及超微结构的影响;用免疫细胞化学和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测不同浓度米非司酮处理24h后对颗粒细胞Bcl-2和Bax蛋白及其mRNA表达水平的影响. 结果 米非司酮可以诱导人卵巢颗粒细胞发生凋亡;不同浓度米非司酮(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)处理24h后,颗粒细胞Bcl-2蛋白表达水平进行组织化学评分(HSCORE),分别为2.15±0.16、1.88±0.13和1.64±0.16,与对照组的2.51±0.16比较,差异有显著性(P<0.001);Bax蛋白表达则出现相反的变化,3组的HSCORE分别为1.85±0.10、2.00±0.18和2.29±0.20,与对照组的1.50±0.16比较,差异有显著性(P<0.001);而bcl-2和bax基因mRNA表达与对照组相比无明显改变(P>0.05). 结论 米非司酮能诱导人卵巢颗粒细胞凋亡;Bcl-2和Bax蛋白表达可能参与米非司酮诱导的颗粒细胞凋亡.
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何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织细胞Rb/p53信号转导通路的影响
目的 通过检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠睾丸组织衰老的机制. 方法 选用8周龄SD雄性大鼠84只,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸剂组、自然恢复组,每组12只,采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型.采用免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR法检测磷酸化Rb蛋白(pRb)、p16、p53、p19、p21在大鼠睾丸组织的表达差异.结果 模型组大鼠睾丸组织Rb、p53、p16、p19、p21表达明显增加,pRb表达明显减少(P<0.05);何首乌饮、何首乌丸组能显著提高pRb的表达,降低Rb、p53、p16、p19、p21表达(P<0.05),何首乌饮高剂量组调节作用大于其他各组(P<0.05). 结论何首乌饮通过调节睾丸组织Rb/p53信号转导通路相关基因和蛋白表达起到延缓衰老的作用.
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小鼠胚胎心脏发育期T型钙离子通道的表达
目的 检测哺乳动物心脏中T型钙离子通道α1亚基在小鼠胚胎心脏发育过程中表达部位和时间的分布特征. 方法 对小鼠胚胎心脏发育关键时期(E9.5至胚胎E18.5共9d)的胚胎进行连续切片,用RT-PCR和免疫组织化学的方法对α1G和α1H蛋白进行阳性检测.结果 α1H从胚胎期10.5d左右开始表达并一直延续到发育晚期(E18.5),而α1G则从E11.5d延续到E18.5;免疫组织化学的结果显示,T型钙离子通道主要在心肌层以及左右传导束支稳定表达,而在心内膜垫以及心室肌小梁的心内膜内皮和间充质细胞中不表达. 结论 T型钙离子通道对于心肌细胞以及心脏传导组织的形成起到了一定的作用.
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表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制小鼠皮肤外伤愈合组织基质金属蛋白酶1的表达
目的 探讨50 mg/L表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)对小鼠皮肤外伤愈合组织基质金属蛋白酶1(MMP-1) mRNA表达及MMP-1水平的影响. 方法 将57只小鼠随机分为对照组(含无损伤组和损伤对照组)、50 mg/L EGCG处理组和辅料组,除无损伤组为3只外,其余各组均为18只,然后分别于损伤后6、12、24、72、120、168 h取损伤愈合皮肤.利用RT-PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测皮肤外伤愈合期间损伤愈合组织MMP-1 mRNA表达水平和MMP-1含量.结果 检测结果表明,50 mg/L EGCG 能在皮肤外伤愈合晚期(72 h后)抑制损伤愈合组织MMP-1 mRNA表达,降低MMP-1含量. 结论 EGCG对皮肤外伤愈合、晚期愈合组织MMP-1 mRNA表达和MMP-1生成具有抑制作用,提示50 mg/L的EGCG能促进皮肤外伤愈合.
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单克隆人胰腺干细胞的形态和蛋白表达特征
目的 研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性.方法 10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化.原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代.在传代中逐渐纯化胰腺干细胞.克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养.活力较好的细胞液氮冷冻保存.采用HE和Giemsa染色,观察单克隆人胰腺干细胞的形态特征;通过透射电镜分析其超微结构.用免疫组织化学反应和RT-PCR方法,检测其蛋白水平和mRNA水平的表达特征.结果 1例来源于4月龄男性胎儿的单克隆人胰腺干细胞建系,传50代.液氮保存细胞1×109个以上.单克隆人胰腺干细胞完全贴璧时呈多角形上皮样,单核,圆形或椭圆形,单、双或多核仁.细胞核质比大.线粒体、内质网等细胞器均不发达,胞质内无分泌颗粒,属于发育早期的胰腺上皮样细胞.共表达胰肠同源域因子1(pdx1)、胰高血糖素、巢蛋白及角蛋白19(CK19),不表达胰岛素、周期蛋白34(CD34)、CD44及CD45.转录表达pdx1、胰高血糖素及巢蛋白的mRNA,不转录表达胰岛素.结论首次证实1例共表达pdx1、胰高血糖素、巢蛋白及CK19蛋白的单克隆人胰腺干细胞系.
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淀粉样前体蛋白β位分解酶1与β-淀粉样蛋白在糖尿病大鼠脑组织中的表达及行为学相关性
目的 观察糖尿病大鼠脑组织淀粉样前体蛋白β位分解酶1(BACE1)、β-淀粉样蛋白(Aβ)的表达,探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病中的作用机制.方法 腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分为正常组(N组)、假手术组(S组)、4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组).穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测大鼠认知行为学改变,免疫组织化学法、免疫印迹法、RT-PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测BACE1;ELISA法检测Aβ在糖尿病大鼠脑组织中的表达,用图像分析仪测定吸光度值.结果 M组大鼠的电击次数、学习和记忆潜伏期时间显著延长(P<0.01),主动逃避次数显著降低(P<0.01);ELISA法检测Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)显示糖尿病模型鼠脑组织内Aβ_(1-40)水平明显增高,从正常组的(64.13±6.76)pg/mg升至模型组的(86.43±7.03)pg/mg(P<0.001);Aβ_(1-42)也明显升高,从正常组的(67.43±5.12 )pg/mg 升至(89.45±5.28) pg/mg (P<0.001);糖尿病模型鼠脑组织内BACE1水平显著增高,ELISA法从正常组的(116.46±8.10)pg/mg升至模型组的(158.73±6.24)pg/mg (P<0.001).免疫印迹法吸光度值从正常组的0.61±0.11升至模型组的1.52±0.16 (P<0.001),RT-PCR法吸光度值从正常组的1.62±0.26升至模型组的3.61±0.32 (P<0.001),免疫组织化学法吸光度值从正常组的0.81±0.21升至模型组的2.01±0.36 (P<0.001).BACE1和Aβ表达水平与学习和记忆负相关.结论 BACE1和Aβ在糖尿病大鼠脑组织表达增高,糖尿病糖代谢异常增强BACE1和Aβ表达,参与了阿尔茨海默病的发病机制.
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糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达的影响
目的 探讨外源性糖皮质激素对大鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)表达的影响. 方法 成年雄性Wistar大鼠80只,随机分为实验对照组(注射生理盐水)、皮质酮注射组、皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射组、饮用氢化可的松组.皮质酮注射[(5mg/(kg.12h)]组又分为注射持续1d、3d、5d、7d组;皮质酮+皮质酮受体拮抗剂(RU38486)注射[(10mg/(kg.12h)]组注射持续3d;饮用氢化可的松组大鼠饮用水中加氢化可的松(0.01g/L),连续1个月.应用RT-PCR、免疫印迹法观察大鼠下丘脑HAP1表达的变化. 结果 注射皮质酮1d和3d后,下丘脑HAP1表达明显减少,其mRNA的表达明显下调,5d后HAP1开始回升,7d 后恢复到正常水平,HAP1 mRNA表达5d后明显增加,并高于正常水平;长期(一个月)饮用氢化可的松的大鼠,其下丘脑中HAP1的表达明显减少;在皮质酮注射的同时注射RU38486,可以对抗由皮质酮注射所引起的下丘脑HAP1的变化. 结论 外源性过量糖皮质激素能影响下丘脑HAP1的表达,下丘脑中的HAP1可能参与下丘脑神经元或神经内分泌细胞的功能活动.
关键词： 亨廷顿蛋白相关蛋白1 糖皮质激素 下丘脑 免疫印迹 反转录-聚合酶链式反应 大鼠 -
p16~(INK4A)在动情周期和早孕期小鼠子宫内膜的表达
目的 检测肿瘤抑制基因p16~(INK4A)在小鼠动情周期和早孕期子宫内膜中的表达,初步探讨p16~(INK4A)在小鼠胚胎植入过程中的生物学作用.方法 运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测动情周期和早孕期小鼠子宫内膜p16~(INK4A)mRNA的表达水平;用免疫组织化学和Western blotting方法检测p16~(INK4A)蛋白的表达.结果 RT-PCR显示,早孕期比动情周期p16~(INK4A)mRNA的表达有显著增强.动情周期中动情期比其他3期表达明显增强;早孕期中,随妊娠天数的增加,p16~(INK4A)mRNA的表达也逐渐增强,孕5d达峰值,之后又逐渐减弱.免疫组织化学和Western blotting的结果也都显示,p16~(INK4A)蛋白在子宫内膜的表达及规律与RT-PCR的结果一致.结论 p16~(INK4A)在小鼠的胚泡植入过程中起重要作用.
关键词： p16~(INK4A) 子宫内膜 反转录-聚合酶链式反应 免疫组织化学 免疫印迹法 小鼠
