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佛波酯处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶C-γ2的意义
目的 探讨佛波酯(TPA)处理人胃癌MGC80-3细胞过程中磷酯酶C-γ2(PLC-γ2)的意义.方法 通过DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌MGC80-3细胞的影响;借助核浆分离手段获得胃癌细胞核浆蛋白,并通过免疫印迹(Western blotting)检测TPA对PLC-γ2蛋白表达水平影响;通过免疫荧光技术处理,激光扫描共焦显微镜观察胃癌细胞内PLC-γ2蛋白的定位和转运;用PLC-γ2的抑制剂(U73122)预处理细胞,免疫印迹和激光扫描共焦显微镜分别检测其对TPA作用胃癌细胞内PLC-γ2的影响;以及荧光显微镜下观察分析U73122是否影响TPA对胃癌细胞的作用.结果 TPA诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡;同时TPA提高PLC-γ2蛋白表达水平,并诱导其发生核浆转运;其抑制剂(U73122)可以降低TPA对PLC-γ2蛋白表达水平的作用,但并不能影响TPA诱导胃癌细胞凋亡;而TPA诱导的PLC-γ2核浆转运却没有被PLC-γ2抑制剂(U73122)阻止.结论 尽管TPA提高了胃癌MGC80-3细胞中PLC-γ2表达水平,但PLC-γ2表达水平和TPA诱导的胃癌MGC80-3凋亡没有直接关系,而其核浆转运可能与TPA诱导的胃癌细胞凋亡相关.
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鲨鱼软骨抽提物诱导人胃癌细胞凋亡并下调Bcl-2表达
目的:探讨鲨鱼软骨抽提物(SCP)诱导人胃癌MGC80-3细胞调亡的作用机制.方法:以不同浓度SCP加入体外培养的MGC80-3细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达.结果:SCP明显抑制(MGC80-3细胞生长,IC50值为1 mg/ml;荧光显微镜下可见60% 以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA 1adder);免疫细胞化学检测显示Bcl-2表达明显降低.结论:SCP诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关.
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9-顺式维甲酸对胃癌细胞周期及周期因子表达的影响
目的:探讨9-顺式维甲酸(9-cisRA)抑制胃癌细胞生长及其机制.方法:RT-PCR检测9-cisRA作用MGC80-3细胞前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4) mRNA表达的变化;流式细胞术和MTT法检测其对细胞周期和生长抑制的作用;电镜观察细胞形态学改变.结果:10 μmol/L 9-cisRA作用MGC80-3细胞96 h时 ,CyclinD1和CDK4 mRNA表达均显著下降(P＜0.01);9-cisRA对MGC80-3细胞生长抑制作用呈时间和剂量依赖性;9-cisRA诱导MGC80-3细胞阻滞于细胞周期的G1期,并呈典型的凋亡特征性的"亚G1峰"和形态学改变.结论:9-cisRA对MGC80-3细胞有显著的生长抑制和诱导凋亡作用,与抑制CyclinD1和CDK4表达将细胞周期阻滞于G1期有关.
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环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对P糖蛋白表达的影响
目的 研究环孢素A(cyclosporin A,CsA)诱导人胃癌MGC80-3细胞的凋亡作用以及对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响,探讨细胞凋亡与P-gp表达的关系.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度CsA处理24、48、72h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色和Annexin-V-FITC/PI双染分别于荧光显微镜和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析CsA处理48 h后凋亡细胞形态的改变并计算细胞凋亡率,Western blot法检测MGC803细胞P-gp的表达.结果 CsA对人胃癌MGC80-3细胞增殖有抑制作用,在0～25.0 μmol·L-1浓度范围和24～72 h时间范围内CsA对胃癌MGC80-3细胞增殖抑制作用与药物浓度和作用时间呈现明显依赖关系.AO/EB染色和Annexin V-FITC/PI双染FCM检测显示CsA 处理MGC80-3细胞48 h后通过荧光显微镜观察可见细胞出现形态不规则、核染色质固缩等细胞凋亡形态学的改变,提高CsA作用剂量,导致细胞凋亡率增加,与control组相比差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).Western blot表明CsA下调了MGC80-3细胞P-gp的表达,蛋白表达量呈现浓度依赖性降低(P<0.05或P<0.01).结论 CsA能诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡和下调P-gp的表达,其诱导细胞凋亡作用可能与P-gp的表达相关.
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环孢素A对人胃癌MGC80-3细胞周期影响以及诱导其凋亡相关机制的研究
目的 探讨环孢素A(CsA)对人胃癌MGC80-3细胞周期影响以及诱导其凋亡相关机制的研究.方法 采用流式细胞仪检测不同浓度CsA作用MGC80-3细胞后,细胞生长周期的变化以及细胞内活性氧(ROS)产生;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色于荧光显微镜观察CsA处理后细胞凋亡形态学的改变;Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达变化.结果 流式细胞仪检测结果显示CsA可浓度依耐性阻滞细胞周期在G0/G1期,与对照组比较差异有统计学意义(F=48.21,P<0.05,P<0.01);能显著增加细胞内ROS含量(F=90.24,P<0.01).AO/EB染色后细胞发生肿胀、缩小甚至碎裂等典型凋亡形态学改变.Western blot分析结果表明CsA可激活细胞内Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 CsA可能通过阻滞细胞生长周期抑制MGC80-3细胞增殖,其诱导细胞凋亡的作用机制可能与细胞内ROS大量生成以及Caspase-3蛋白高水平的表达有关.
关键词： 环孢素A MGC80-3细胞 细胞周期 细胞凋亡 Caspase-3蛋白 -
环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对NF-κB p65表达的影响
目的 研究环孢素A(CsA)诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡作用以及对NF-κB p65表达的影响.方法 倒置显微镜观察CsA高剂量(5、10、15、20 μmol/L)组与CsA低剂量(1、2、4、8 μmol/L)组处理MGC80-3细胞24 h后细胞形态变化;MTT比色法分别检测两剂量组处理24 h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,以细胞生长抑制率≤5%评价CsA的非毒性剂量;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测CsA高、低剂量组处理后的细胞凋亡率;Western blot法检测CsA高、低剂量组细胞内NF-κB p65的表达.结果 CsA低剂量组处理MGC80-3细胞24 h后显微镜下见细胞生长状况良好,CsA高剂量组见多数细胞生长贴壁不牢、皱缩变圆及坏死脱落的现象.CsA高剂量组对MGC80-3细胞增殖有抑制作用,而CsA低剂量组显示在4 μmol/L浓度范围以下对细胞增殖无明显抑制作用.FCM 检测表明CsA低剂量组诱导细胞凋亡率与空白组相比差异无显著性,随药物作用剂量增加CsA高剂量组诱导细胞凋亡作用增强.Western blot法表明CsA高剂量组作用后NF-κB p65表达逐渐降低(P<0.05,P<0.01),而CsA低剂量组NF-κB p65的表达基本不变.结论 CsA诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡作用与药物作用浓度呈剂量效应关系,CsA可能通过抑制NF-κB信号通路诱导MGC80-3细胞凋亡.
