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9-顺式维甲酸对甲状腺鳞癌SW579细胞周期及CYCLIND1、CDK4表达的影响
目的 探讨9-顺式维甲酸(9-cisRA)对甲状腺鳞癌细胞系SW579细胞周期及周期因子表达的影响.方法 分别以不同浓度的9 -cisRA处理SW579细胞系,采用MTT比色法测定细胞增殖活性；用流式细胞仪检测细胞周期；用RT-PCR方法检测SW579细胞CDK4、CYCLIND1 mRNA的表达水平；用Western blot法检测SW579细胞CDK4、CYCLIND1的蛋白表达.结果 9-cisRA作用后,各组细胞均出现显著的生长抑制作用,生长抑制率明显升高,并呈剂量依赖性.流式细胞仪分析,各组细胞均随着药物浓度的升高,S期细胞在细胞周期中所占比例逐渐减少,G1期细胞则明显增加(P＜0.01),细胞滞留在G1期.经不同浓度9-cisRA处理的细胞CDK4 mRNA和蛋白表达水平没有明显变化；CYCLIND1的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P＜0.01).结论 9-cisRA显著抑制SW579细胞生长,可能与抑制CYCLIND1的表达并将细胞阻滞于G1期有关.
关键词： 9-顺式维甲酸 SW579 细胞周期 CDK4:CYCLIND1 -
联合应用9-顺式维甲酸和化疗药物对人胆管癌细胞系QBC939的作用
目的观察联合应用分化诱导剂9-cis RA和化疗药物对人胆管癌细胞QBC939细胞的作用,为临床诱导分化治疗胆管癌提供实验基础.方法以10-6mol/L的9-cis RA作用于培养的人胆管癌细胞系QBC939细胞1、2、3、5 d后检测几种常用化疗药物对细胞的杀伤作用.并观察同时加入10-6mol/L的9-cis RA和化疗药物对QBC939细胞的杀伤作用.结果同时应用9-cis RA和化疗药物时,对QBC939细胞的杀伤作用与单用化疗药物时无明显差异.9-cis RA作用2 d和3 d时,化疗药物对QBC939细胞的杀伤作用强于9-cis RA作用前;9-cis RA作用5 d时,化疗药物对QBC939细胞的作用较9-cis RA作用前强,但比3 d时下降.结论先用9-cis RA作用后可增强QBC939细胞对化疗药物的敏感性,此作用与9-cis RA作用时间有关.不同联合用药方法的效果不同.
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土槿乙酸联合9-顺式维甲酸促进白血病细胞凋亡的机制研究
目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cis RA)促进白血病细胞凋亡的作用,探讨其作用机制.方法 应用透射电子显微镜、琼脂精凝胶电泳分析HL-60细胞凋亡,RT-PCR检测HL-60细胞Cyclin D1和CDK4 mRNA表达.结果 HL-60细胞经配体联合作用后,电镜下可见明显细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳出现DNA Ladder,Cyc-lin D1及CDK4 mRNA的表达均降低,且联合用药组下降程度明显较单独作用组大(P<0.05).结论 PLAB联合9-cis RA抑制HL-60细胞生长,其机制与凋亡诱导效应相关.
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9-顺维甲酸联合细胞毒性药物对SH-SY5Y神经母细胞系增殖及诱导凋亡的影响
目的:探讨9-顺维甲酸联合细胞毒性药物对SH-SY5Y神经母细胞系增殖及诱导凋亡方面的作用,为9-顺式维甲酸治疗神经母细胞瘤可能有效方案的设计提供实验依据.方法:1)采用MTT比色法测定不同单药组和双药组在不同时间及不同浓度下SH-SY5Y细胞的抑制率;2)采用流式细胞仪测定不同单药组和双药组在不同时间及不同浓度下SH-SY5Y细胞的凋亡指数.结果:1)DDP+RA双药组中,低剂量组在24和48h以及高剂量组在48h细胞抑制率较相应DDP单药组高(P＜0.01);UP-16+RA双药组中,低、高剂量组在24h细胞抑制率较相应UP-16单药组高(P＜0.01);DDP+RA和UP-16+RA双药组(除了低剂量DDP+RA组在24h)细胞抑制率均高于RA组(500ng/孔)(P＜0.01).2)单药组和双药组细胞凋亡指数均高于对照组(P＜0.01);双药组细胞凋亡指数均高于相应单药组(P＜0.01).结论:细胞毒性药物与RA组合用药细胞抑制率和早期细胞凋亡指数较单药高,提示细胞毒性药物与RA在抑制细胞生长和诱导凋亡方面表现很好的协同作用.
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9-顺式维甲酸抑制甲状腺鳞癌细胞SW579增殖的作用机制
目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis-retinoic acid,9-cisRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1表达的影响,进而探讨9-cisRA的抗癌作用机制.方法:分别以终浓度为1×10-7、1×10-6、5×10-6、1×10-5 mol/L 9-cisRA作用SW579细胞,各组细胞均在培养24 h后加药,继续培养48 h.用RT-PCR方法检测SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1的mRNA表达;用Western Blot检测SW579细胞RARβ、p21、CDK4、CyclinD1的蛋白表达.结果:9-cisRA作用后,RT-PCR检测结果表明,经不同浓度9-cisRA处理的细胞RARβ、p21的mRNA表达水平均显著上调;CDK4的mRNA表达水平无明显变化;CyclinD1的表达水平明显下调;Western Blot检测结果表明经不同浓度9-cisRA处理的细胞RARβ、p21蛋白表达水平均显著上调;CDK4蛋白表达水平无明显变化;CyclinD1蛋白表达水平明显下调.结论:9-cisRA在一定浓度范围内可能通过上调RARβ、p21的表达进而下调细胞周期蛋白CyclinD1的表达,从而抑制细胞增殖.
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9-顺式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化的研究
目的:为设计维甲酸治疗神经母细胞瘤可能的有效方案,本文对9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,9-cis RA)体外诱导分化神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)作用进行了研究.方法:SK-N-SH细胞经9-cisRA处理后,采用相差显微镜、神经纤维银染法、透射电镜观察等手段,观察9-cisRA对细胞生长的影响.结果:9-cis RA作用SK-N-SH细胞7d后,细胞形态发生变化;12d时出现神经原性表型,多个细胞形成"神经节",节间形成粗而长的类神经纤维;尼氏小体和银染法亦证明细胞产生显著分化.透射电镜观察结果表明,9-cis RA对该细胞有分化作用,却无明显凋亡诱导作用.结论:9-cis RA对神经母细胞瘤细胞体外能产生明显诱导分化作用.
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9-顺式维甲酸对胃癌细胞周期及周期因子表达的影响
目的:探讨9-顺式维甲酸(9-cisRA)抑制胃癌细胞生长及其机制.方法:RT-PCR检测9-cisRA作用MGC80-3细胞前后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4) mRNA表达的变化;流式细胞术和MTT法检测其对细胞周期和生长抑制的作用;电镜观察细胞形态学改变.结果:10 μmol/L 9-cisRA作用MGC80-3细胞96 h时 ,CyclinD1和CDK4 mRNA表达均显著下降(P＜0.01);9-cisRA对MGC80-3细胞生长抑制作用呈时间和剂量依赖性;9-cisRA诱导MGC80-3细胞阻滞于细胞周期的G1期,并呈典型的凋亡特征性的"亚G1峰"和形态学改变.结论:9-cisRA对MGC80-3细胞有显著的生长抑制和诱导凋亡作用,与抑制CyclinD1和CDK4表达将细胞周期阻滞于G1期有关.
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土槿乙酸增强9顺式维甲酸对白血病细胞生长的抑制作用
目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cis RA)对白血病细胞生长的影响.方法 应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术和Hoechst33342/PI染色分析HL-60细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR检测PPARγ和RXRα mRNA表达.结果 HL-60细胞系上有PPARγ和RXRα的表达,经配体联合作用后能明显抑制细胞生长,呈剂量依赖关系;细胞出现明显凋亡形态学改变和亚G1峰;PPARγ和RXRαmRNA表达明显增强.结论 PLAB能显著增强9-cis RA对HL-60细胞的生长抑制作用,其机制与凋亡诱导效应有关.
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9-顺式维甲酸诱导胃癌MGC803细胞周期阻滞和凋亡的作用机制
背景与目的:9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,9-cis RA)对胃癌的抗癌活性及机制尚不清楚,本研究以MGC803为靶细胞观察9-cis RA对胃癌的作用.方法:采用RT-PCR法检测维甲类X受体α(recinoid X receptor α,RXRα)、细胞周期蛋白Cyclin D1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4 mRNA表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT实验检测9-cis RA作用MGC803细胞后生长抑制情况,Hoechst33342/PI双荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达.结果:0.1～10 μmol/L 9-cis RA作用MGC803细胞96 h,能显著抑制细胞增殖.10 μmol/L 9-cis RA分别作用48、72和96 h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞.作用72 h后,细胞出现核染色质凝集、DNA片段化等凋亡特征;从作用48 h开始,Bcl-2表达即显著下降.在MGC803细胞中RXRα表达较弱,经10 μmol/L 9-cis RA作用48 h其表达水平显著增加(P＜0.01);作用96 h,细胞中Cyclin D1和CDK4表达显著降低(P＜0.01).结论:9-cis RA能明显诱导MGC803细胞周期G1期阻滞和凋亡,该作用可能与其下调细胞周期因子Cyclin D1和CDK4表达有关.
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9-顺式维甲酸联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤细胞毒性及MYCN、MDR1表达的影响
目的:观察9-顺式维甲酸(9-cis retinoic acid,RA)联合细胞毒药物对MYCN扩增型神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的毒性及MYCN、MDR1表达的影响,为临床合理用药提供依据.方法:RA分别与长春新碱(VCR)、顺铂(CDDP)、足叶乙甙(VP16)、阿霉素(ADR)双药联合或单独作用IMR32细胞株24 h后:(1) CCK-8法测定细胞生长抑制率;(2)流式细胞仪检测细胞凋亡率;(3)实时荧光定量PCR法检测MYCN、MDR1的mRNA表达.结果:(1)细胞生长抑制率:各双药组高于相应单药组(P＜0.01).(2)细胞凋亡率:双药组高于相应单药组(P＜0.01),RA +CDDP高于其他双药组(P＜ 0.05). (3)MYCN表达:各双药组均低于相应单药组(P＜0.05),RA+VCR低于其他双药组(P＜ 0.05);MDR1表达:双药组高于相应单药组(P＜0.05),RA+ADR高于其他双药组(P＜0.01).结论:RA联合细胞毒药物对NB生长抑制、凋亡及下调MYCN表达有协同作用,可上调MDR1表达,综合分析RA与VCR或CDDP的组合可能为临床联合用药提供较合理的选择.
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9-顺式维甲酸抑制PMA诱导人单核细胞系THP-1表达MMP-9
目的 探讨视黄醛X受体(retinoid X receptors ,RXRs)特异性激动剂9-顺式维甲酸(9-cisRA)对佛波酯(PMA)诱导人单核细胞系THP-1基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及活性的影响.方法 体外培养THP-1细胞,PMA诱导分化为巨噬细胞,采用9-cisRA对不同浓度PMA组进行干预,应用Realtime-PCR、Westerblotting测定THP-1细胞MMP-9的基因和蛋白水平表达水平,通过Gelatin Zymography法检测MMP-9的酶活性.结果 9-cisRA(100 nmol/L)对不同浓度PMA组(10、20和40 nmol/L)干预24 h,9-cisRA 可明显抑制THP-1细胞MMP-9转录水平, MMP-9 的mRNA抑制率分别28%、60%、88%(P＜0.01).MMP-9蛋白水平及酶活性也呈显著下降. 结论 RXRs 特异性激动剂9-cisRA可显著抑制PMA诱导THP-1的MMP-9转录和蛋白水平表达及其酶活性.
