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一种高效快速浓缩腺相关病毒载体的方法
腺相关病毒载体(adeno-associated viral vector,AAV vector)是一种具有良好应用前景的基因治疗载体.研究中往往需要高滴度的重组AAV病毒(＞105v.g./细胞),为此利用完整的腺相关病毒颗粒具有耐受有机溶剂的特点,创造性地采用了一种用乙醇沉淀重组AAV病毒的方法,达到了高效、快速浓缩AAV载体的目的.结果表明,乙醇沉淀法可以高效浓缩AAV载体,并且对病毒的结构和活性没有明显影响.用这种方法可以方便地将低滴度的AAV病毒变成高滴度,解决动物体内实验中每点注射体积受到限制的问题.
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腺相关病毒载体介导的人内皮抑素的体外表达及对内皮细胞抑制作用的研究
抗血管生成基因治疗是一有希望的抑制肿瘤生长及转移的方法.在实验中构建了含有人内皮抑素(endostatin)基因的重组腺相关病毒载体rAAV-hE.所包装纯化的重组病毒滴度达0.5×1012v.g./ml.rAAV-hE能有效感染培养细胞,EIA法检测培养液上清中内皮抑素浓度达36.42ng/ml.rAAV介导所表达的内皮抑素对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)和牛毛细血管内皮细胞(BCE)具有抗增殖抑制作用,抑制率分别为68.1%和41.6%.此结果为进一步的动物实验奠定了基础,表明重组腺相关病毒载体介导的抗血管生成有望应用于肿瘤基因治疗.
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rAAV2-hGAD65重组载体的构建和功能检测
目的 构建rAAV2-hGAD65重组载体,观察其体内外功能.方法 应用RT-PCR的方法克隆hGAD65基因,与AAV载体连接得到重组载体(rAAV2-hGAD65).包装重组腺相关病毒并检测病毒的滴度.体外感染成纤维细胞后,用免疫组织化学的方法检测GAD65在细胞中的表达水平,用高效液相色谱(HPLC)法检测培养上清中γ-氨基丁酸(GABA)的含量.在体实验中,向丘脑底核(STN)立体定位注射rAAV2-hGAD65后,用HPLC方法检测黑质网状部(SNr)中的GABA含量.结果 应用RT-PCR方法成功地从人胚胎端脑组织中克隆出GAD65基因的cDNA,基因测序显示与基因库中人GAD65基因序列一致,亚克隆入AAV载体并包装后所得的病毒颗粒的滴度达到4.5×10~(11)/ml.组织化学检测感染大鼠肺成纤维细胞的效率约为80%,HPLC检测培养上清中GABA的含量为(45.66±6.07)nmol/L.STN立体注射rAAV2-hGAD65后,在STN可以检测到hGAD65的表达,SNr区GABA的含量由原来的(5.66±1.07)nmol/g升高到(12.66±2.59)nmol/g.结论 成功地克隆出了人GAD65基因,并构建了AAV重组载体.AAV病毒颗粒在体外能感染成纤维细胞并具有催化谷氨酸合成GABA的功能.在体内实验中,向STN注射rAAV2-hGAD65后,可以增加黑质网状部(SNr)中的GABA含量.
关键词： 谷氨酸脱羧酶2 腺相关病毒载体 基因克隆 反转录-聚合酶链式反应 人 -
rAAV 2-GPⅡb/GPⅢa载体构建和体外表达、功能实验
为了研究rAAV载体介导的血小板无力症基因治疗的可行性,构建了由CMV启动子调控的rAAV2-Ⅱb、rAAV2-Ⅲa病毒载体,并采用多种方法验证了rAAV2-Ⅱb和rAAV2-Ⅲa病毒载体在真核细胞中的表达能力,其中包括用RT-RCR方法检测BHK-21细胞感染24小时(MOI=1×105 v.g/cell)后目的基因在mRNA水平的表达,用流式细胞术的方法检测不同MOI和目的基因表达之间的量效关系,采用Western blot的方法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=1×105v.g/cell)目的基因在蛋白水平的表达,用免疫荧光法检测BHK-21细胞感染48小时后(MOI=105 v.g/cell)目的基因在细胞表面的表达,以及应用PAC-Ⅰ结合试验验证所表达的GPⅡb/Ⅲa蛋白功能.结果表明,在MOI=1×105v.g/cell条件下,在BHK-21细胞感染24小时后即可在mRNA水平上检测到目的基因的表达,在48小时可在蛋白水平检测到目的基因的表达;在一定剂量范围内目的基因的表达量随着MOI的增加而增加,但MOI过高反而使表达量下降,目的基因表达产物活化之后能与PAC-I结合,并具有正常的生物学活性.结论:rAAV2载体能有效地介导GPⅡb、GPⅢa基因在真核细胞内表达,所表达的产物都具有正常的生物学活性,此结果为rAAV2载体在血小板无力症基因治疗中的应用打下了基础.
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重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达
目的采用重组腺相关病毒(AAV)载体pAGX(+),把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞,以获得正义或反义6A8 DNA长期表达的B淋巴细胞株. 方法构建含正义或反义6A8 DNA片段的重组pAGX(+)质粒.经包装后转导淋巴细胞,经G418筛选,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞.Northern杂交和RT-PCR检测转导基因的mRNA表达水平.Con A结合试验检测细胞在转导基因后6A8 α-甘露糖苷酶活性的改变. 结果 pAGX-反义6A8 DNA及pAGX-正义6A8 DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒,藉助rAAV成功地把6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB.Northern杂交结果显示,转导的正义或反义6A8 DNA获得表达.经1年余传代培养,RT-PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义6A8 DNA的mRNA表达增加,新霉素抗性基因(neoR)也获得表达,表明转导基因获得了长期表达.Con A结合强度在转导反义6A8 DNA的细胞升高,提示转导反义6A8 DNA可影响6A8 α-甘露糖苷酶的表达. 结论用AAV载体成功地把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB,转导的基因获得长期表达,并干扰6A8 α-甘露糖苷酶的表达.
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含不同启动子的重组9型腺相关病毒载体转染大鼠心肌细胞表达效率的差异
9型腺相关病毒( AAV9)作为基因治疗心脏疾病的佳载体之一而成为近年来研究的热点[1],但影响AAV9转导效率的因素很多,其中载体上的启动子和受体细胞是否合适是直接影响到目的基因的转录效率和表达水平的重要因素[2],本研究分别选用含CMV启动子和CBA启动子的rAAV9携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染心肌细胞,比较两个启动子在心肌细胞的转录活性以及对细胞生长的影响,从而为AAV9携带靶基因高效转染心肌细胞以及应用于心脏疾病的基因治疗提供实验资料.
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腺相关病毒载体pAGX(+)的构建
目的构建腺相关病毒(AAV)载体并进行鉴定,以介导真核细胞的基因传递和表达. 方法以基因重组技术构建AAV载体,用Southern杂交、狭缝杂交以及激光共聚焦显微镜等鉴定构建的AAV载体. 结果成功地获得了重组AAV表达载体pAGX(+),藉报告基因EYFP鉴定pAGX(+),见pAEYFP经包装的重组AAV储存液的感染滴度达1.39×107 TU(transmission unit)/ml、复制滴度达1.94×1011颗粒/ml.Southern杂交表明EYFP基因获得成功拯救.rAAV/EYFP颗粒成功转导COS 7细胞,EYFP获得表达,并整合入COS 7细胞基因组,而藉质粒载体pEYFPCMV介导的转移,EYFP未能整合. 结论成功地构建了一个AAV载体,并成功地介导了基因的转移、表达和整合.
关键词： 腺相关病毒载体 黄色荧光素蛋白EYFP 基因转移 基因表达 -
CTLA4-Ig重组腺相关病毒载体的构建及转染表达效果
重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体是目前基因治疗领域中倍受瞩目的载体之一.本研究通过构建CTLA4-Ig基因重组腺相关病毒载体(rAAV-CTLA4-Ig),研究其对大鼠转染的表达效果及规律.
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腺相关病毒及慢病毒载体对骨髓间充质干细胞基因转染效率的比较
目的：比较腺相关病毒(AAV)载体和慢病毒(LV)载体在间充质干细胞(MSCs)基因转染中的效率。方法密度梯度离心法分离培养MSCs， HE染色、Nestin免疫荧光染色鉴定， BrdU标记观察增殖情况。分别包装AAV与LV假病毒颗粒，并感染MSCs，通过β-gal染色和绿色荧光蛋白检测，分别计算两者的转染效率。结果 MSCs成功从骨髓分离。AAV载体介导的基因转染率为49.1%，LV载体的转染率为91.4%(P<0.01)。结论 LV载体介导的基因转染方法转染效率更高。
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重组人组织激肽释放酶基因转染人脐静脉内皮细胞
目的探讨重组人组织型激肽释放酶(HK)基因腺相关病毒载体(rAVV/HK)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作用.方法将HK基因定向克隆入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中,形成重组腺相关病毒(rAAV-HK)质粒,经聚合酶链反应(PCR)检测和DNA测序后,将rAAV-HK、pAAV-Helper和pAAV-RC 3种质粒通过脂质体共转染293细胞,包装成带有HK目的基因的重组rAVV/HK,采用β半乳糖苷酶原位染色法测定报告基因rAVV/LacZ在HT1080中的表达,间接计算病毒滴度,并观察转染基因在传代细胞中的表达.在相同的条件下体外分别培养HUVECs(对照组)和rAVV/HK转染的HUVEC(HK转染组)48 h,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测两组HUVECs HK mRAN的表达,并利用硝酸还原酶法和分光光度法分别检测两组HUVECs一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 rAVV/HK病毒滴度为6.2×107个/mL,LacZ基因能够在第一传代和第六代HT1080细胞内稳定持续表达.与对照组比,HK转染组HUVECs HK mRNA表达增加(P<0.001);而且HK转染组HUVECs细胞培养液中NO的含量和NOS活性明显增高,P值分别<0.01和<0.05.结论 HK基因通过重组腺相关病毒载体可成功转染体外培养的HUVECs,使其HK mRNA表达增加,NOS活性和NO含量升高,此结果为基因治疗人类血管内皮细胞异常提供客观依据.
关键词： 人组织型激肽释放酶基因 腺相关病毒载体 血管内皮细胞 -
腺相关病毒介导的仓鼠δ-SG基因在TO-2型仓鼠骨髓间充干细胞的表达
目的 构建含有δ-SG基因的腺相关病毒载体并检测经腺相关病毒介导基因转染的TO-2型仓鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中目的 基因的表达.方法 用EcoRI酶和XhoI酶酶切含有δ-SG基因的pUC57-SG质粒,获得δ-SG基因.片段回收后定向插入腺相关病毒载体质粒pITR-GFP中重组成pITR-GFP-SG,并同pXX680、pHelper三质粒经钙磷沉淀法共转染HEK293细胞,斑点杂交法测定重组病毒颗粒滴度,再将重组病毒颗粒转染TO-2型仓鼠的MSCs,利用RT-PCR法,免疫荧光检测目的 基因的表达,MTT检测转染细胞增殖能力.结果 成功构建了δ-SG基因的腺相关病毒载体.含δ-SG基因的腺相关病毒感染TO-2型仓鼠MSCs 48 h后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳出现884 bp-DNA片段;免疫荧光检测显示TO-2型仓鼠MSCs中呈现绿色颗粒,大小深浅不一;MTT证实转染后细胞的增殖能力未受明显影响.结论 采用腺相关病毒介导的方法,可以将δ-SG基因导入TO-2型仓鼠的MSCs并成功表达.
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病毒载体介导的帕金森病基因治疗研究进展
帕金森病(PD)是一种常见的神经系统变性疾病,其病理改变主要为中脑黑质致密区多巴胺能神经元变性和消失,以及体内多巴胺水平的下降.80年代末,随着基因治疗概念的不断深入,基因治疗技术日趋成熟,人们开始了对PD基因治疗的尝试.近年来PD动物模型基因治疗已经取得了不少进展.在基因治疗的体外及体内两种途径中,研究多的是病毒载体相关的基因导入系统.目前研究较多病毒载体有:腺病毒载体、腺相关病毒载体、单纯疱疹病毒载体、慢病毒载体、其他逆转录病毒载体.
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人p27kip1基因腺相关病毒载体的构建
目的 克隆人肿瘤转移抑制基因p27kip1,利用基因重组技术,构建其腺相关病毒载体,为进一步研究骨肉瘤的基因治疗建立一个平台.方法 从人正常胎盘组织中提取总RNA,RT-PCR获取p27kip1基因(ORF)cDNA序列,并将其克隆至腺相关病毒载体pAAV-MCS,构建人p27kip1基因腺相关病毒载体.结果 人胎盘组织抽提总RNA,并通过RT-PCR获得目的 基因ORF,经TA克隆后,将目的 基因连人pAAV-MCS中,送测序结果 无误.结论 成功构建的重组质粒pAAV-MCS-p27kip1,将为进一步研究p27kip1蛋白的生物学效应提供基础,为p27kip1基因应用于骨肉瘤的治疗提供实验依据.
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肝癌基因治疗研究进展
肝癌是世界上恶性程度极高，且预后极差的恶性肿瘤之一，每年全球约有125万人患病。在我国肝癌目前已处于恶性肿瘤死亡率的第二位，每年至少有10万名新发现病人，和11万名肝癌病人死亡〔1〕。尽管目前肝癌的治疗方法有许多种，但治疗效果都十分有限，并未显著延长病人的生存期。大部分肝癌病人对化疗及放疗等治疗均不敏感，能手术根治的病人仅占15%。随着分子生物学和免疫学理论及技术的不断发展和对肿瘤发病机制的不断认识，人们可以利用基因工程的手段进行肝癌的基因治疗，且在该领域已显示出一定的临床治疗效果。如Habib等〔2〕使用野生型p53基因治疗原发性肝细胞癌的临床治疗试验，取得了很大的成功，引起人们的普遍关注。本文就目前肝癌基因治疗的研究现状和发展趋势作一综述。 一、肝癌基因治疗中所使用的载体系统和治疗途径的选择 目前在肝癌基因治疗实验当中使用多的是病毒载体系统，包括腺病毒载体〔3〕、逆转录病毒载体〔4〕、腺相关病毒载体〔5〕等，非病毒载体系统主要是使用脂质体〔2，6〕介导，且已进入临床试验阶段。在肿瘤基因治疗中，腺病毒载体系统具有许多优点，如制备容易，能获得高纯度、高滴度的腺病毒体；无遗传毒性，以游离型状态存在，不整合进入宿主DNA中；表达时间相对短暂，一般15～20 d左右，不会造成对免疫系统的长期慢性刺激〔7〕；感染宿主范围相对较广，尤其是能感染复制、分裂期的细胞。近几年临床上使用腺病毒载体治疗恶性肿瘤的例子越来越多〔8〕。体外实验证实，数个人的肝癌细胞系HepG2、Hep3B、Hnh7、HLE、HLF、SK-HEP-1和大鼠肝癌细胞系McA-RH7777等，均对腺病毒十分易感，50MOI可使近100%的细胞被感染〔9〕。作者曾在军事医学科学院百环生物医学研究中心吴祖泽院士指导下，以腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因作为标记基因，也证实3个人的肝癌细胞系HepG2、SMMC7721、BEL-7402，一个胆管癌细胞系QBC939，一个正常肝细胞系L02，均对腺病毒易感，50MOI可使90%左右的靶细胞受感染。Castell等〔10〕利用携带LacZ基因的腺病毒体，感染体外原代培养的正常肝细胞，结果证实：肝细胞对腺病毒十分易感，15MOI感染1 h，可使80%的肝细胞受感染，20MOI感染1 h可使100%的肝细胞受感染；导入的目的基因可以在肝细胞内高效表达；感染腺病毒后，并不影响肝细胞的正常生化功能，如肝细胞的尿素合成、胞膜蛋白合成、生物转化活性等，认为使用腺病毒载体进行肝脏疾病的基因治疗，是十分有效的工具载体。但有实验表明大剂量腺病毒载体对肝功能还是有影响的〔11〕，随感染病毒量的加大，肝脏的毒性作用也加大，且感染腺病毒的靶细胞刺激机体产生免疫反应，从而使腺病毒的转化效率降低，限制了重复使用。使用逆转录病毒载体进行肝脏疾病的基因治疗，也有其有利之处：因逆转录病毒只感染处于复制、分裂期的细胞，而处于非复制期的细胞则不受感染。因肿瘤细胞多处于分裂期，而肿瘤周围的正常肝细胞多处于静止期，故逆转录病毒载体具有一定的靶细胞特异性〔4〕。Kitten等〔12〕使用逆转录病毒载体，通过门静脉注入大鼠肝内，有46%±17%的肝细胞受到感染，随病毒滴度的升高，细胞的转导效率也 增加。虽然逆转录病毒载体能将目的基因有效地导入肝癌细胞内，对肝脏这样的低分裂组织局部应用较为合适，但系统体内(in vivo)法应用，就会对骨髓、生殖细胞、肠上皮细胞等分裂增殖旺盛的组织，产生致死性杀伤作用，有产生与放、化疗相似副作用的危险。对于原发性肝细胞癌，癌细胞的增殖生长一般比较缓慢〔12〕，因此使用逆转录病毒载体可能转化效率较低，但对于肝转移癌，因为细胞增殖较为旺盛，故使用逆转录病毒载体较为合适。对于使用腺相关病毒载体进行肝癌的基因治疗，目前还研究较少，但腺相关病毒无致病性，有广泛的宿主范围，能感染不分裂的S期细胞，并能整合到宿主DNA的特异部位中，故减少了发生插入突变的危险性。Su等〔5〕使用AAV介导AFP/HSV-TK基因，证实目的基因能在肝癌细胞中高效表达，并具有杀伤肝癌细胞的作用。
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重组腺相关病毒载体在脑缺血动物模型基因治疗中的应用
脑缺血的基因治疗是颇具前景的治疗手段,以病毒为载体的基因治疗的有效性和安全性关系到终治疗的成败.
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腺病毒及腺相关病毒在神经细胞损伤及修复中的作用
近年来,由于神经科学的不断发展,中枢神经系统疾病发生机制的不断阐述,转基因疗法的深入研究,使转基因疗法在治疗中枢神经系统疾病的应用前景备受关注.腺病毒载体和腺相关病毒载体是目前在基因治疗中研究和应用为广泛的两种载体系统,本文主要就它们的特性和在治疗神经细胞损伤和功能修复中的应用进行阐述.
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腺相关病毒载体(AAV)在视网膜色素变性基因治疗中的应用
随着分子生物学的发展，应用基因转移技术治疗视网膜色素变性疾病成为可能。目前研究认为腺相关病毒载体(AAV)能使外源基因有效地导入感光细胞而且在细胞中稳定长期表达，而且对细胞无毒性，将有可能成为有效的基因转染工具。本文对AAV病毒的形态、生长和分子生物学特征、AAV介导的视网膜细胞基因转移、AAV病毒载体在视网膜色素变性基因治疗中的应用、以及作为基因治疗载体的优缺点进行了综述。
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腺病毒、腺相关病毒载体转导心肌细胞的研究
目的和方法:构建含人β2肾上腺素能受体(β2-AR)基因的重组腺病毒(rAd)和腺相关病毒(rAAV),并感染体外培养的心肌细胞,检测目的基因在心肌细胞内的表达.结果:RT-PCR检测结果显示感染的心肌细胞均表达人β2-AR mRNA;western印迹杂交显示感染的心肌细胞可表达人β2-AR蛋白;放射性配基检测表明两种重组病毒感染的心肌细胞的β-AR密度无明显差异(P＞0.05),但均高于对照组(P＜0.01).结论:腺相关病毒(AAV)载体与腺病毒载体均可有效的转染心肌细胞并使目的基因表达.
关键词： 腺病毒载体 腺相关病毒载体 人β2肾上腺素能受体基因 心肌细胞 -
重组腺相关病毒载体2型转染骨髓间充质干细胞的体外实验
背景:目前应用于基因治疗的病毒载体中,重组腺相关病毒载体2型载体与腺病毒和反转录病毒载体比较,由于其无致病性,引起学者们的关注.目的:观察体外重组腺相关病毒载体2型转染骨髓间充质干细胞,并用其作为携带基因表达的载体进行急性髓性白血病基因治疗的可能性.设计:开放性实验.单位:南方医科大学南方医院的血液科.材料:实验于2004-02/07在南方医科大学南方医院的血液科实验室完成.本实验所用的骨髓间充质干细胞来自急性髓性白血病6例初发患者和4名健康成年志愿者的第3～5代传代细胞.方法:从初发的急性髓性白血病患者和正常健康志愿者髂后上棘做骨髓穿刺抽取6～10 mL肝素抗凝的骨髓,分离培养出间充质干细胞,用包含增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型感染间充质干细胞,将获取的骨髓间充质干细胞加入含一定感染复数(感染复数=1×102,1×103,1×104,1×105,1×106,1×107)的增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型病毒载体的不完全培养液,10～14 d后在相差荧光显微镜下或用流式细胞仪观测绿色荧光蛋白的表达.在体外培养条件下观察绿色荧光蛋白在经过重组腺相关病毒载体2型转导的骨髓间充质干细胞中的表达.体外观察经增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型转导并被新霉素筛选后绿色荧光蛋白在被转导的骨髓间充质干细胞中的表达.通过相差荧光显微镜下确证绿色荧光蛋白表达后,在BD流式细胞仪上检测绿色荧光蛋白的表达.主要观察指标:①增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型对骨髓间充质干细胞的转染率分析.②在转染后的不同时间点用相差荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果:①转染率分析:增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型对来源于健康志愿者和急性髓性白血病患者的骨髓间充质干细胞的转染率均不高,转染率在0.3%～1.4%.转染后10～14 d绿色荧光蛋白开始表达,一般感染条件绿色荧光蛋白阳性骨髓间充质干细胞所占比例为(1.030±0.034)%,重复3轮感染条件下为(1.140±0.036)%,脂质体协助感染条件下为(1.380±0.054)%,改变转染条件(包括重复感染,延长感染时间,增加感染复数,脂质体协助转染)亦不能明显增加转染率(P＞0.05),而增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型却能高效的转染其包装细胞293细胞.②绿色荧光蛋白在体外长期稳定表达分析:实验观察61 d内,绿色荧光蛋白保持低水平长期稳定表达,在转染后的12～33 d,绿色荧光蛋白阳性的骨髓间充质干细胞从起始时的1.16%下降到0.5%～0.6%,33～61 d一直维持在这一水平;经过新霉素筛选30 d后,表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞达到6.6%左右,在体外继续传代培养,在体外观察的100 d中,表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞一直维持在6%的水平.结论:重组腺相关病毒载体2型介导的基因转导的优势是安全、无免疫反应,目的基因能够长期稳定表达.重组腺相关病毒载体和骨髓间充质干细胞可用于体外基因治疗,其将来可能成为全身基因治疗的良好载体.
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重组腺相关病毒载体介导血管抑素基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究
目的制备大鼠脑胶质瘤模型,注射腺相关病毒血管抑素基因重组载体(AAV-AS),观察对脑胶质瘤的治疗效果.方法皮下接种C6脑胶质瘤细胞制备大鼠胶质瘤模型,皮下注射AAV-AS,24天后取材,观察瘤重、肿瘤坏死率和血管计数,RT-PCR法检测AS转录.结果AAV-AS治疗组肿瘤体积明显缩小,坏死明显,血管计数减少,RT-PCR法检测到AS转录.结论AAV-AS在大鼠体内可以表达,通过抑制血管生成而抑制肿瘤生长,促进肿瘤坏死.
