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小鼠胚胎心脏发育期T型钙离子通道的表达
目的 检测哺乳动物心脏中T型钙离子通道α1亚基在小鼠胚胎心脏发育过程中表达部位和时间的分布特征. 方法 对小鼠胚胎心脏发育关键时期(E9.5至胚胎E18.5共9d)的胚胎进行连续切片,用RT-PCR和免疫组织化学的方法对α1G和α1H蛋白进行阳性检测.结果 α1H从胚胎期10.5d左右开始表达并一直延续到发育晚期(E18.5),而α1G则从E11.5d延续到E18.5;免疫组织化学的结果显示,T型钙离子通道主要在心肌层以及左右传导束支稳定表达,而在心内膜垫以及心室肌小梁的心内膜内皮和间充质细胞中不表达. 结论 T型钙离子通道对于心肌细胞以及心脏传导组织的形成起到了一定的作用.
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T型钙离子通道阻滞剂对成年C57BL/6J小鼠螺旋神经元的保护
目的 探讨T型钙离子通道受体在C57BL/6J小鼠螺旋神经元上的分布和表达,探讨T型钙离子通道阻滞剂对成年C57BL/6J小鼠螺旋神经元的保护.方法 单纯随机选取30只健康6～8周C57BL/6J小鼠,使用原位杂交和RT-PCR来分析三种T型钙离子通道受体α1G,α1H,o1I在螺旋神经元上的分布和表达.另选取30只健康24 ～ 26周C57BL/6J小鼠按照不同的给药方法分为生理盐水组、唑尼沙胺组、贝尼地平组,每组10只,使用免疫组化检测使用药物后螺旋神经元上钙离子调节蛋白(钙调蛋白和钙结合蛋白)的表达变化.结果 三种受体在螺旋神经元上均有分布,但是各个受体的表达量不同,表达量从多到少依次为α1H(24.21 ±0.10)、α1I(14.88±0.04)、α1G(10.42±0.02).唑尼沙胺治疗组螺旋神经元上钙调蛋白(0.336±0.041)的表达比生理盐水治疗组(0.504-0.020)的明显减少(P＜0.05).唑尼沙胺治疗组(0.482±0.045)和贝尼地平治疗组(0.511±0.032)螺旋神经元上钙结合蛋白的表达比生理盐水组(0.611±0.035)的明显减少(P＜0.05).结论 成年C57BL/6J小鼠在连续使用4周T型钙离子通道阻滞剂后螺旋神经元钙离子调节蛋白表达减少,表明钙超载得到缓解.我们推断T型钙离子通道阻滞剂可能对24 ～ 26周C57BL/6J小鼠的螺旋神经元起一定的保护作用.
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溶血磷脂酰胆碱对心室肌细胞T型钙离子通道电流的影响及机制探讨
目的 研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对心肌细胞T型钙通道电流(ICa,T)的影响并探讨其机制.方法 新生大鼠心室肌细胞由酶法消化分离获得后,使用全细胞膜片钳技术记录LPC(10 μmol/L)处理前后的搏动频率及ICa,T.表达人类心脏T型钙通道CaV3.1和Cav3.2亚基的人胚肾(HEK) 293细胞通过传代培养获得.各种蛋白激酶抑制剂或蛋白激酶C(PKC)亚型特异抑制剂预处理1h后,用全细胞膜片钳测定分别记录LPC处理前后的CaV3.1和Cav3.2T型钙离子通道电流.结果 LPC显著提高了新生大鼠心室肌细胞的自律性(61±7次/分vs 40±6次/分,n=6)和ICa,T(4.4 ±0.5 pA/pF,n =12 vs 3.7 ±0.4 pA/pF,n=15).在HEK293细胞中,LPC对ICaV3.1无显著影响；但显著增加了ICav3.2[LPC处理前:36.7 ±2.2 pA/pF(n =20)；10 μmol/L时:42.3±3.0 pA/pF(n=12)；50 μmol/L:47.5±3.8 pA/pF(n=8)].只有PKC抑制剂(白屈菜红碱,5μmol/L)显著减弱了LPC的作用[LPC组:增大58.5％±14.2％;PKC预处理+LPC组:增大20.4％±10.4％(P＜0.05)]；PKCα特异性抑制剂Ro-32-0432(30 nmol/L)模拟了白屈菜红碱对ICav3.2的作用[白屈菜红碱:12.7 ±2.6 pA/pF(n=8)；Ro-32-0432:12.9 ±2.3pA/pF(n=9)],而PKCβⅠ、PKCβⅡ特异性抑制剂并没有影响LPC对ICav3.2的作用.结论 LPC可能通过激活PKCα途径增强ICa,T,从而增加心室肌细胞的自律性.
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T型钙离子通道受体在不同年龄C57BL/6J小鼠内耳中的表达
目的:探讨3种T型钙离子通道受体(α1G、α1H、α1Ⅰ)在不同年龄段C57BL/6J小鼠螺旋神经元及耳蜗中的表达变化.方法:随机选取30只健康C57BL/6J小鼠(6～8周10只,24～26周10只,42～44周10只),首先使用ABR检测其听力,随后使用RT-PCR来分析3种T型钙离子通道受体(α1G、α1H、α1Ⅰ)在耳蜗及螺旋神经元上的定量表达.结果:3种受体在6～8周小鼠的耳蜗和螺旋神经元上均有分布,但表达量不一致,在螺旋神经元上表达量多的是α1H,在耳蜗上表达量多的是α1I.随着年龄增加尤其是到了42～44周龄时,3种受体的表达呈现出明显的减少.结论:3种T型钙离子通道受体在C57BL/6J小鼠耳蜗与螺旋神经元上均有表达,随着年龄的增加受体的表达减少.
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T型钙离子通道在癫痫发生中的作用研究进展
T型钙离子通道为一种低电压依赖性钙通道,通过改变细胞内外钙离子浓度及神经元的兴奋性发挥其独特的生物学特性.T型钙离子通道结构及功能的异常与特发性癫痫,特别是失神癫痫密切相关.本文对特发性癫痫动物模型及不同人群中T型钙离子通道的基因变异及其所导致的电生理变化进行综述,希望对癫痫发病机制的研究提供思路,并为特发性癫痫的治疗提供依据.
