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复方倍他米松增加流感病毒感染小鼠受损嗅黏膜嗅觉标记蛋白表达
目的 探讨复方倍他米松对流感病毒感染小鼠受损的嗅黏膜嗅觉标记蛋白(OMP)表达的影响.方法 模拟建立流感病毒性嗅觉障碍小鼠模型,分别于第2天和第4天给予复方倍他米松干预,腹腔内注射复方倍他米松,采用免疫组化和Western blot的方法检测嗅黏膜OMP蛋白的表达水平.结果 流感病毒感染1组和2组嗅黏膜OMP的表达水平下调,流感病毒感染后复方倍他米松干预1组和2组嗅黏膜OMP的表达水平明显上调.结论 复方倍他米松能够增加流感病毒损伤的嗅黏膜OMP的表达.
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大鼠自体嗅成鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究
目的探讨自体外周嗅成鞘细胞对脊髓损伤修复的可能作用和促进受损轴突再生的能力,为临床应用自体OECs修复脊髓损伤进行可行性研究.方法以改良的Allen法建立脊髓(T9～10节段)损伤模型后,将动物分为自体OECs悬液组和Hanks液对照组,分别移植含自体OECs的细胞悬液和Hanks液,以神经丝蛋白(NF)和神经生长因子受体蛋白(NGFR p75)免疫荧光双标染色,激光共聚焦显微镜检测移植效果;通过BBB行为学评分记录两组动物后肢恢复功能.结果镜下观察可见自体OECs悬液组动物脊髓损伤处的空洞较对照组明显缩小.而自体OECs悬液组免疫荧光标记纤维中夹有NGFRp75标记的OECs,且随标记的NF纤维走行方向排列.行为学观察可见自体OECs悬液组的大鼠后肢运动功能较对照组有显著恢复.结论自体OECs悬液多点注射有助于脊髓损伤部位神经纤维的再生.
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自体嗅黏膜移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究
目的观察自体嗅黏膜植入大鼠脊髓后的变化及其对轴突再生的修复作用.探索临床自体嗅黏膜移植修复脊髓损伤的可能性. 方法成年雄性Wistar大鼠随机分为嗅黏膜移植组和对照组各20只.嗅黏膜移植组取鼻中隔后部的嗅黏膜组织(1mm2)植入自体大鼠脊髓颈1节段后索内的皮质脊髓束缺损处(2mm×1.5mm);对照组取鼻腔呼吸区黏膜植入脊髓同样的损伤处.4～6周处死动物,移植区冰冻水平切面,免疫荧光双标神经丝蛋白(NF)和神经生长因子受体蛋白(NGFRp75),Confocal显微镜下观察,另行免疫组织化学染色观察移植嗅黏膜与周围组织的生长情况. 结果对照组大鼠的损伤处有明显空洞,呼吸区黏膜内未见p75染色;嗅黏膜移植组可见p75标记的植入的嗅黏膜与周围组织愈合良好,空洞明显减少,被标记的嗅成鞘细胞向神经组织浸润生长,在移植物内有大量被标记的纤细的不分叉的NF纤维穿过. 结论自体嗅黏膜有可能成为临床嗅成鞘细胞修复脊髓损伤的供体.
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成人、成年狗鼻腔嗅黏膜成鞘细胞的纯化、培养与鉴定
目的研究成人和成年狗嗅黏膜成鞘细胞(OECs)的分离与培养的方法,为探索在人体和大型动物模型的自体嗅黏膜OECs移植修复脊髓损伤奠定基础.方法采用差速贴壁方法分别从成人和成年比格狗的嗅黏膜分离出OECs,分别培养25 d,在第6 d、10 d和25 d进行形态学观察,后进行OECs特异标记物NGFRp75的免疫细胞化学染色,鉴定成鞘细胞.结果原代培养的成人和成年狗嗅黏膜OECs在培养10 d后明显增多,25 d的OECs成熟,具有很长的突起,其形态多为双极和三极,NGFRp75的免疫组织化学染色呈阳性.本实验条件下,狗嗅黏膜OECs的生长状态比成人的好.而未进行差速贴壁的培养细胞则几乎均呈成纤维样细胞.结论差速贴壁的方法可以分离出较为纯化的成人、成年狗鼻腔嗅黏膜OECs.
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嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床应用前景
嗅鞘细胞是一种特殊神经胶质细胞,具有神经膜细胞和星形胶质细胞二者的特性,主要存在于中枢神经的嗅球及外围神经的嗅黏膜中.嗅鞘细胞起源于嗅黏膜的固有层,它包绕嗅神经,通过筛状板终到达嗅球的嗅神经层和嗅小球层.
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鼻嗅黏膜固有层移植及神经节苷脂治疗脊髓损伤的实验研究
目的 将从大鼠嗅黏膜中获取的鼻嗅黏膜固有层(OLP)组织薄片移植到大鼠脊髓横断区,同时应用神经节苷脂(GM1)治疗,观察其对损伤脊髓的修复作用.方法 采用SD大鼠胸脊髓半切损伤模型,随机分为5组:OLP+GM1组、GM1组、OLP组,单纯损伤组、空白对照组.术后应用电生理学及病理学检查,观察大鼠神经功能恢复情况.结果 OLP+GM1组部分大鼠出现刺激右后肢的逃避反应,其余各组运动功能无明显改善.组织学检查显示,OLP+GM1组嗅组织在移植区成活,并沿着一定路线辐射,核转录因子阳性纤维穿行于移植区.与GM1、OLP,单纯损伤组比较,术后4周OLP+GM1组N1波潜伏期(4.71±0.72)ms(P<0.01);术后8周OLP+GM1组核转录因子(NF)密度(7.31±0.26)×104个/mm2(P<0.05).结论 鼻嗅组织移植及GM1联合治疗脊髓损伤,具有明显的协同作用.
关键词： 嗅黏膜 G(M1)神经节苷脂 组织移植 脊髓损伤 -
同种异体移植嗅黏膜胶质细胞修复鼠神经缺损
)浓度及神经丝蛋白(NF)浓度评估神经缺损的修复效果.结果 B组神经缺损完全再生,而A组较差;荧光红在神经中运行距离,B组长于A组(P<0.01);NGF及GFAP浓度,B组浓于A组;MBP浓度及NF浓度,B组高于A组(P<0.01);伤肢功能评分,B组高于A组(P<0.01).有髓神经纤维数和神经纤维总数,B组高于A组(P<0.01).结论 嗅黏膜胶质细胞移植能促进Wistar鼠坐骨神经长段缺损再生.
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干细胞标志蛋白在成人鼻黏膜嗅鞘细胞的表达
目的 建立成人鼻黏膜嗅鞘细胞的体外培养方法,探讨干细胞标志蛋白在人嗅鞘细胞的表达及其意义,为嗅鞘细胞自体移植治疗中枢神经系统损伤提供可行性研究资料.方法 用鼻内镜自成人(鼻中隔偏曲伴黏膜肥厚者)鼻腔活体钳取部分嗅区黏膜,经胰酶消化制成细胞悬液.细胞接种于玻璃培养瓶,用含10％胎牛血清的F12培养基培养、传代、扩增.用免疫细胞化学或免疫荧光染色和免疫印迹方法检测SOX-2、SOX-10、Nestin、NCAM、NGFRp75和S100-β在第7代嗅鞘细胞的表达.结果 成人嗅黏膜细胞经过多次传代培养后,嗅鞘细胞逐渐成为优势细胞,该细胞高表达干细胞标志蛋白和嗅鞘细胞标志蛋白.结论 成人嗅黏膜细胞体外培养可获得高产量的许旺细胞(Schwann cells,Scs)样嗅鞘细胞,该细胞具有干细胞特性(stemness)和很强的增殖能力,可作为自体细胞移植治疗中枢神经系统损伤的种子细胞.
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嗅神经离断后大鼠嗅黏膜气味受体的表达变化
明显减少,差异具有统计学意义(t=63.960,P=0.000).随着术后恢复时间的延长,嗅神经离断侧再生嗅黏膜表达Olr1493基因受体的细胞逐渐增多,至第6周时基本和对照侧一致,分别为(417.8±32.4)个和(445.3±10.0)个,差异无统计学意义(t=2.600,P=0.060).结论 大鼠嗅神经离断后再生嗅感觉神经元及其受体数量可以恢复至正常水平,表达位置亦未发生变化.
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大鼠急性鼻-鼻窦炎致嗅觉障碍模型嗅黏膜微结构的变化
目的 观察大鼠急性鼻-鼻窦炎致嗅觉障碍模型中嗅黏膜微结构的变化情况,为进一步探索鼻-鼻窦炎对嗅觉功能影响的可能机制提供实验基础.方法 健康SD大鼠100只采用随机数字表法分为实验组(80只)和对照组(20只).实验组使用肺炎链球菌建立大鼠急性鼻-鼻窦炎动物模型,运用嗅觉功能行为学(食物小球埋藏法)检测实验模型的嗅觉功能,采用SPSS 13.0统计软件对该数据进行DunnettT3检验.分别于接种细菌后第1(A组)、2(B组)、3(C组)、4周(D组)各处死20只实验组大鼠;对照组(E组)大鼠未接种细菌且均于第1周处死.取包含鼻顶部嗅黏膜的鼻腔鼻窦黏膜组织,制作冰冻切片、采用免疫荧光技术观察嗅黏膜中成熟嗅感觉神经元和嗅鞘细胞的形态变化.结果 嗅觉功能行为学检测实验结果显示,A、B、C、D组大鼠找到食物小球的时间[分别为(402.9±9.3)、(453.7±7.3)、(351.9±8.9)、(278.7±8.1)s]均较对照组[(178.3±6.6)s]长,差异有统计学意义(P值均＜0.01).实验组嗅黏膜较对照组均有不同程度的成熟嗅感觉神经元数量减少及黏膜上皮层变薄倾向,尤以造模后第2周为严重,至第4周时轻.实验组大鼠嗅黏膜固有层嗅鞘细胞在出现短时间的减少后,自第2周起先于嗅感觉神经元出现数量增加.至第4周,固有层的嗅鞘细胞基本恢复正常.所有实验组动物嗅上皮均有少量嗅鞘细胞生长.结论 发生急性鼻-鼻窦炎时,嗅黏膜中成熟嗅感觉神经元和嗅鞘细胞均出现数量减少.但嗅鞘细胞先于嗅感觉神经元增多,并且嗅上皮亦出现少量嗅鞘细胞生长.
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上呼吸道感染后嗅觉障碍患者嗅上皮超微结构观察
目的 通过对上呼吸道感染后嗅觉障碍的患者鼻腔大体及嗅上皮超微结构的研究,从形态学上观察嗅觉减退或丧失的超微结构改变.方法 选择上呼吸道感染后嗅觉减退或丧失患者10例,用T&T嗅觉测试法测试患者的嗅觉功能.常规前鼻镜、鼻内镜下对鼻腔大体结构进行观察,鼻内镜下钳取嗅区黏膜行透射电镜超微结构观察.结果 上呼吸道感染后嗅觉障碍患者嗅黏膜超微结构有以下变化:①嗅上皮结构层次仍能保持,但细胞间隙增宽;②上皮表面嗅泡明显减少,即使嗅泡存在,其末端的纤毛也明显减少,部分嗅泡呈空泡状改变;③微绒毛细胞和支持细胞表面的微绒毛减少或缺失;④支持细胞的细胞核变形或固缩,嗅细胞的树突水肿变形,细胞器减少.结论 上呼吸道感染后嗅觉功能障碍与嗅黏膜上皮超微结构的改变密切相关.患者嗅泡及嗅泡内纤毛缺失,微绒毛细胞及支持细胞的微绒毛减少是引起嗅觉减退的主要原因,支持细胞胞核的变形及嗅细胞树突的形态学改变与嗅觉改变相关.
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人嗅黏膜细胞色素P4502A表达的免疫印迹和免疫组化分析
目的研究人类细胞色素P450(cytochrome P-450,CYP-450)2A(CYP2A)在鼻黏膜中的表达特点和意义.方法应用免疫印迹方法分别检测36例鼻腔鼻窦疾病患者和孕96、119、160、182、185 d的5例胎儿不同部位鼻组织中CYP2A的表达水平,并用免疫组化方法检测CYP2A在嗅区黏膜中分布特点.结果成人标本中10块嗅区黏膜标本中8例免疫印迹阳性,而37块呼吸区黏膜标本均为阴性.胎儿嗅区黏膜标本免疫印迹均为阳性, 其表达水平随胎龄有增加的趋势,仅1例呼吸区黏膜检测到CYP2A.免疫印迹定量分析显示,成人嗅区鼻黏膜微粒体CYP2A蛋白质水平在0.1～1.1 pmol/mg之间, 胎儿的鼻微粒体蛋白质含量在0.8～5.3 pmol/mg之间,胎儿一般高于成人.免疫组化结果显示,CYP2A免疫活性存在于嗅黏膜的支持细胞和Bowman腺. 结论 CYP2A存在于嗅黏膜提示:嗅黏膜是吸入性外源性物质生物转化的靶位,CYP2A还与嗅觉感受有关,胎儿期CYP2A嗅区鼻黏膜的表达也可能使母体衍生毒素对胎儿成长发育有潜在威胁.
关键词： 细胞色素P450 细胞色素P4502A 人类 嗅黏膜 -
嗅上皮干细胞分化、发育中转录因子功能的研究现状
嗅上皮既是嗅觉系统的感受器,又是哺乳动物体内唯一能够终生保持自我更新能力的神经性上皮,对神经组织的再生与修复、神经干细胞的移植与治疗、嗅觉障碍的发病与干预的研究都具有十分重要的意义.本文将阐述嗅上皮干细胞的特点,并针对各转录因子在嗅上皮干细胞发育和分化过程中发挥的功能和意义展开综述,以期为嗅上皮干细胞的研究提供新思路.
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分鼻侧评估嗅觉功能及单侧嗅觉减退的临床分析
目的 了解嗅觉减退患者左右两侧嗅觉功能损伤程度是否相同.方法 对104例以嗅觉减退为主诉的患者,通过病史采集了解嗅觉减退的相关病史及其现况,耳鼻咽喉科常规检查及鼻窦CT检查排除鼻腔结构异常或仅发生于单侧鼻腔-鼻窦的病变,并分别对左、右鼻侧进行T&T嗅觉计嗅觉识别阈测试,评估患者每侧嗅觉功能.结果 本组104例嗅觉减退患者,90例(86.5％)患者双侧嗅觉功能水平相同,14例(13.5％)患者双侧嗅觉功能水平不同,其中6例患者表现为单侧(左侧或右侧)嗅觉功能正常,而另一侧嗅觉功能减退.14例左右鼻侧嗅觉功能不同的患者,其常规查体及影像学检查均未见明显鼻腔结构异常或发生于单侧鼻腔鼻窦的病变.结论 人类的左、右两个鼻腔分别拥有一个完整的嗅觉传导系统,尽管双侧受损概率相同,但受损程度可不同.单侧嗅觉减退作为嗅觉障碍的一种特殊表现形式,只有通过分鼻侧进行嗅觉功能评估,才能更全面地了解患者的嗅觉功能.
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神经特异性烯醇化酶及嗅标记蛋白在不同胎龄胎儿嗅黏膜中的表达
目的探讨神经特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)及嗅标记蛋白(olfactory marker protein,OMP)在不同胎龄胎儿嗅黏膜中的表达.方法以免疫组化方法检测NSE及OMP在12、16、20、24、28和34周6例不同胎龄胎儿嗅黏膜中的表达.结果 NSE免疫阳性反应在孕12 ～34周的胎儿嗅黏膜中均有表达,各胎龄胎儿嗅黏膜切片中均可见大量阳性着色的双极嗅神经细胞.孕12周时,阳性细胞数量很多,排列紧密,胞体多位于嗅上皮中下部且阳性嗅神经上皮占据胎儿鼻腔上2/3的黏膜,随着孕龄的增大,阳性细胞逐渐成多层次排列,所占鼻腔黏膜面积却逐渐减小,至孕34周时,仅局限于鼻腔上1/3黏膜.OMP免疫反应在孕12周胎儿鼻腔上2/3黏膜切片中仅发现少量阳性着色的双极神经细胞,明显少于同龄胎儿NSE阳性反应细胞.随着胎龄的增加,OMP阳性细胞逐渐增多,且胞体多位于嗅上皮中上部,但其数量仍相对少于同龄NSE阳性细胞.结论人胚胎12周时嗅黏膜中已有大量的嗅神经细胞,其中少数嗅神经细胞已开始发育成熟.随着胎龄的增大,嗅上皮面积逐渐缩小,但成熟的嗅神经细胞逐渐增多,胚胎发育后期的胎儿嗅化学感受器发育已趋于成熟.
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损伤性嗅觉诱发电位的实验研究
目的建立损伤性嗅觉功能障碍动物模型,了解电刺激嗅觉诱发电位的特性及变化规律.方法通过立体定位和电解损毁技术,对动物一侧或双侧嗅球造成损伤,动态观察损伤后不同时间点(24 h、48 h和1周)嗅觉诱发电位的变化,并观察嗅球与嗅黏膜病理和超微结构改变.结果一侧嗅球损伤后,诱发电位N2波消失,N1和P1波潜伏期延长,波幅减小;双侧嗅球损伤后,表现为N1、N2波消失,仅记录到P1波,其潜伏期明显延长,波幅变化较大,以上改变均以24～48 h变化显著.组织病理学和超微结构显示,24～48 h嗅球周围大量炎性细胞浸润,神经元变性样改变.结论嗅球损伤程度不同,对嗅觉诱发电位的影响也不相同,这种改变是以其组织病理和超微结构变化为基础的.
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嗅黏膜与嗅球神经层胶质细胞修复神经缺损能力的比较
目的 比较嗅黏膜胶质细胞与嗅球神经层胶质细胞修复周围神经缺损的能力.方法 体外培养异体嗅黏膜胶质细胞及嗅球神经层胶质细胞2周后纯化浓缩待用.将60只成年Wistar鼠随机分为对照组(A组,n=20)、嗅球神经层胶质细胞组(B组,n=20)及嗅黏膜胶质细胞组(C组,n=20).左侧坐骨神经切除25mm长轴突,保留神经外膜吻合于近端,将细胞培养液、嗅球神经层胶质细胞、嗅黏膜胶质细胞分别注入A、B、C各组神经外膜腔内.术后3个月,通过大体形态、光学显微镜及透射电镜观察、逆行标记荧光金运输距离、免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibre acid protein,GFAP)浓度及神经生长因子(nerve growth factors,NGF)浓度,酶联免疫方法检测髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)浓度及神经丝蛋白(neurofilament,NF)浓度,伤肢功能评分评估神经缺损的修复效果.结果 大体观察、光学显微镜及透射电镜观察,神经缺损再生C组完全,A组差;荧光金在神经中的运行距离,C组长,A组短;NGF、GFAP、MBP及NF浓度、伤肢功能评分均为C组高,A组低.结论 嗅黏膜胶质细胞及嗅球神经层胶质细胞均能促进坐骨神经缺损再生,嗅黏膜胶质细胞促进神经再生效果优于嗅球神经层胶质细胞.
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嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤的实验研究
嗅黏膜内的神经元可在出生后形成并在整个成年时期保持分化,嗅神经元的轴突之所以能从嗅黏膜长入嗅球,据认为有赖于一种特殊分化的胶质细胞--嗅鞘细胞(OECs)的帮助.
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嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤的实验研究
嗅黏膜内的神经元可在出生后形成并在整个成年时期保持分化,嗅神经元的轴突之所以能从嗅黏膜长入嗅球,据认为有赖于一种特殊分化的胶质细胞--嗅鞘细胞(OECs)的帮助.
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预损伤嗅黏膜对自体嗅鞘细胞体外培养的作用
目的:比较预损伤嗅黏膜与正常嗅黏膜来源的嗅鞘细胞生长特性和生物学活性的差异.方法:雄性成年SD大鼠10只,随机分为嗅黏膜损伤组、正常组.5只,组.嗅黏膜损伤组大鼠麻醉后采用自制弯头针,深入鼻腔内直至鼻中隔后1/3处,针尖抵住鼻中隔后切割数下至出血,填塞酒精棉条压迫止血.正常组大鼠不做任何处理.伤后7 d取两组大鼠鼻中隔,将双侧鼻黏膜后1/3从鼻中隔刮下,胰酶消化后体外分离培养嗅黏膜嗅鞘细胞,调整浓度至1×109 L-1,采用改良NASH差速贴壁法进行纯化.结果:嗅鞘细胞纯度达70%时.正常组需14 d,嗅黏膜损伤组需12 d.正常组培养7 d后细胞进入对数期,嗅黏膜损伤组培养5 d后细胞进入对数期,两组嗅鞘细胞进入平台期后生长趋于缓慢,数量维持在106左右.在细胞生长周期的相同时间点.嗅黏膜损伤组嗅鞘细胞活性大于正常组(t=19.001 3,P<0.001),两组嗅鞘细胞分泌的神经营养因子3质量浓度基本相似(P>0.05).结论:预损伤处理嗅黏膜能够加快嗅黏膜嗅鞘细胞的增殖分化,且活性较高.
