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肌基膜管移植及神经生长因子对脊髓横断性损伤的修复作用
目的:对神经生长因子(NGF)及其结合肌基膜管(MBL)修复脊髓横断性损伤进行组织学评价.方法:以雌性家犬为实验对象,手术将其脊髓横断,随机分为3组:(1)7只行MBL移植结合注射NGF(A组);(2)6只单纯注射NGF组(B组);(3)4只为对照组.6个月后用免疫组化对神经轴突和胶质细胞网格框架结构进行特异染色,并用图像分析方法对脊髓横断处的远、近端横截面神经纤维进行定量研究.结果:各组间远端神经纤维数量均有显著性差异;MBL移植物中有神经纤维通过,对照组断端为坏死空腔.电镜证实横断远端存在新生神经纤维.结论:MBL移植结合NGF修复脊髓横断性损伤,神经轴突能越过移植区到达远端;NGF具有促进神经轴突生长的作用.
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嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤的实验研究
嗅黏膜内的神经元可在出生后形成并在整个成年时期保持分化,嗅神经元的轴突之所以能从嗅黏膜长入嗅球,据认为有赖于一种特殊分化的胶质细胞--嗅鞘细胞(OECs)的帮助.
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嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤的实验研究
嗅黏膜内的神经元可在出生后形成并在整个成年时期保持分化,嗅神经元的轴突之所以能从嗅黏膜长入嗅球,据认为有赖于一种特殊分化的胶质细胞--嗅鞘细胞(OECs)的帮助.
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肌基膜管桥接神经缺损的研究现状
外伤或手术引起的神经系统损伤性疾病的临床修复一直是尚未解决的疑难问题之一.肌基膜管是通过去除肌细胞而得到的一种天然生物材料,它不仅有效的保留了完整的基膜,而且肌基膜管内部的排列结构与神经膜管类似,它们能够为再生轴突的生长提供足够空间,可根据需要做成特定的形状.肌基膜管作为一种生物支架桥接受损伤的神经纤维逐渐受到人们的重视.本文就肌基膜管的制备、本身的结构特点及在神经缺损中的应用作一综述.
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嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤
目的:观察嗅黏膜来源的嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植后对脊髓损伤的修复效果.方法:1只SD大鼠行背正中切口,顺椎旁肌纤维切除约1.5 cm×0.8 cm×0.6 cm的肌条,复温、漂洗并挤压肌条以排出肌浆,制成肌基膜管.4只SD大鼠麻醉后取出嗅黏膜,胶原酶消化法分离培养嗅鞘细胞,调整浓度至1011L-1.取SD大鼠50只,随机分成5组:嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组、肌基膜管组、模犁组、正常组,10只/组.除正常组外,其余组均建立脊髓损伤模型,于 T10横断脊髓并切除约2 mm,将培养7 d的嗅鞘细胞与肌基膜管按组别分别植入脊髓断端,模型组用浸有DMEM的凝胶海绵桥接横断的脊髓.结果:移植后第8周,嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组大鼠运动功能明显恢复,出现大关节大幅度运动,且前者运动功能BBB评分升高尤为显著(P<0.01):肌基膜管组大鼠仅见小关节轻微活动;模型组大鼠后肢挛缩重,无明显功能恢复.嗅鞘细胞+肌基膜管联合组后肢体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期显著低于其他各组(P<0.01).苏木精一伊红染色和核转录因子免疫组化染色结果显示,嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组的移植物与损伤脊髓整合较好,未见明显空洞,有大量染色呈阳性的纤维,纤维较长,由近侧端长入远侧端:肌基膜管组有空洞形成,染色阳性的纤维数量少,纤维细小且排列紊乱;模型组端断间充满瘢痕组织,未见明显染色阳性纤维.结论:嗅鞘细胞移植可促进脊髓损伤后的轴突再生,肌基膜管作为一种生物管道,两者联合应用可明显促进脊髓损伤后的轴突再生及功能恢复.
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骨髓间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架体外相容性研究
[目的]研究骨髓间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架体外相容性,进一步探讨联合二者移植修复脊髓损伤可能性.[方法]采用改良化学方法制备去细胞肌肉生物支架并复合冷灭菌方法灭菌,密度梯度离心法体外分离、贴壁法培养BMSCs,注射法接种第3代细胞于支架.[结果]H-E常规染色观察支架内部呈平行走行,Masson染色示支架内平行结构主要为胶原纤维,几乎没有肌纤维.接种BMSCs于支架并孵育14 d后,Hoechest 33342荧光标记计数显示大量存活细胞,扫描电镜可见细胞贴附于支架内表面生长.[结论]去细胞肌肉生物支架具有规则的内部结构是细胞移植理想载体.BMSCs能与去细胞肌肉生物支架体外相容并存活至少2周,为进一步体内联合移植修复脊髓损伤提供实验支持.
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携带神经干细胞的肌基膜管在大鼠脊髓损伤修复中的应用
目的 观察携神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的肌基膜管对脊髓损伤的修复作用. 方法 选择同一窝别SD大鼠36只,制备脊髓半切损伤模型,按随机数字表法分为空白对照组(脊髓断端处仅做等渗盐水冲洗)、NSCs组(脊髓断端处注射NSCs)和NSCs+肌基膜管组(脊髓断端处植入NSCs+肌基膜管复合体),每组12只.4,8周后观察移植细胞的存活、迁移、肌基膜管与宿主的组织相容性,采用BBB评分法观察术后2,4,8周各时相点大鼠后肢运动功能恢复情况. 结果 NSCs+肌基膜管组NSCs能够在断端正常生长,并向断端头尾处迁移且与周围脊髓组织融合,而NSCs组断端处NSCs存活数量较少且炎症细胞浸润明显.术后2周BBB评分各组比较差异无统计学意义,术后4,8周BBB评分NSCs+肌基膜管组分别为7.92±1.00,11.38±1.51,空白对照组分别为3.82±0.75,3.71±0.76,NSCs组分别为6.25±1.06,8.25±1.83,NSCs+肌基膜管组明显高于空白对照组和NSCs组(P＜0.05). 结论 肌基膜管能够提供NSCs沿其管腔定向生长基础,同时能够促进宿主自身细胞沿管腔内的基质成分爬行,减少局部炎症反应.
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肌基膜管移植修复脊髓缺损的实验研究
目的应用自体肌基膜管(muscle basal lamina,MBL)移植结合神经生长因子(nervegrowth factor,NGF)修复脊髓缺损.方法18只雌性家犬脊髓横断后分为三组.A组:MBL移植结合注射NGF组,7只犬;B组:单纯MBL移植组,7只犬;C组:对照组,切除脊髓0.5 cm,4只犬.6个月后用免疫组化法对神经轴突进行特异染色,并用图像分析方法对脊髓横断处的远近端横截面进行神经纤维数比较.结果A、B两组移植物中神经纤维计数比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);各组远端神经纤维数比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);近端神经纤维数比较,A组与B组差异有显著性意义(P＜0.05),A组与C组差异有非常显著性意义(P＜0.01),而B组与C组差异无显著性意义(P＞0.05).光镜下观察到MBL移植物中有神经纤维通过.电镜证实横断远端存在新生神经纤维.结论MBL作为一种生物管道,可作为神经轴突再生的通路;NGF具有促进神经轴突生长的作用.MBL移植结合NGF修复脊髓横断性损伤,神经轴突能越过移植区到达远端.
