首页 > 文献资料
-
骨髓间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架体外相容性研究
[目的]研究骨髓间充质干细胞与去细胞肌肉生物支架体外相容性,进一步探讨联合二者移植修复脊髓损伤可能性.[方法]采用改良化学方法制备去细胞肌肉生物支架并复合冷灭菌方法灭菌,密度梯度离心法体外分离、贴壁法培养BMSCs,注射法接种第3代细胞于支架.[结果]H-E常规染色观察支架内部呈平行走行,Masson染色示支架内平行结构主要为胶原纤维,几乎没有肌纤维.接种BMSCs于支架并孵育14 d后,Hoechest 33342荧光标记计数显示大量存活细胞,扫描电镜可见细胞贴附于支架内表面生长.[结论]去细胞肌肉生物支架具有规则的内部结构是细胞移植理想载体.BMSCs能与去细胞肌肉生物支架体外相容并存活至少2周,为进一步体内联合移植修复脊髓损伤提供实验支持.
-
BMSCs联合去细胞肌肉生物支架修复大鼠脊髓半切损伤的实验研究
目的 以去细胞肌肉生物支架(acellular muscle bioscaffolds,AMBS)接种BMSCs,同种异体移植修复大鼠脊髓半切损伤,观察两者联合移植对脊髓损伤的修复作用.方法 取8周龄雌性SD大鼠,采用改良化学方法制备AMBS,并进行复合冷灭菌;密度梯度离心法提取、贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞用Hoechst 33342荧光标记,采用注射法制备BMSCs-AMBS复合支架,14d后扫描电镜及荧光显微镜观察其生物相容性.取成年雌性SD大鼠48 只,制备T9-11脊髓半切损伤模型后随机分为4组(n=12),A组于缺损处移植BMSCs-AMBS复合支架,B组单独移植BMSCs,C组单独移植AMBS,D组注射PBS作为空白对照组,分别于术后1、2、3、4周行运动功能评分,术后4周行HE染色观察及免疫荧光检测.结果 Masson染色及HE染色示AMBS内部呈平行结构, 主要为胶原纤维,几乎无肌纤维.BMSCs-AMBS复合培养14d后荧光显微镜观察示Hoechst 33342标记BMSCs大量存活,扫描电镜可见BMSCs贴附于支架内表而生长.术后2～4周,大鼠BBB评分A组均高于其余3组(P＜0.05),D组明显低于其余3组(P＜0.05);术后4周B组明显高于C组(t=10.352,P=0.000).术后4周,HE染色示脊髓空洞而积A组明显小于其余3组,免疫荧光染色示A组神经丝蛋白200、巢蛋白阳性细胞表达量高于其余3组,神经胶质原酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)则明显低表达.A、B组荧光示踪的BMSCs移植到体内后主要迁移至对侧灰质前角,部分分化为神经元样细胞.A、B、C、D组 GFAP荧光半定量分析积分吸光度(LA)值分别为733.01±202.04、926.42±59.46、1069.37±33.42、1469.46±160.53,A组明显低于其余3组,D组高于其余3组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AMBS具有相对规则的内部结构,与 BMSCs有良好生物相容性,能抑制胶质瘢痕,促进BMSCs存活、迁徙、分化,是细胞移植理想的天然载体.两者联合移植修复大鼠脊髓损伤能发挥协同作用,促进运动功能恢复.
