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胃癌组织中HMGB1和VEGF-D的表达及其相关性研究
目的 探讨胃癌组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、血管内皮生长因子D(VEGF-D)的表达及其相关性,为临床诊断和治疗提供科学依据.方法 选择2015年1月至2015年12月手术切除的87例胃癌组织及其配对的癌旁组织标本为研究对象,另选取20例正常胃组织标本为对照组.采用免疫组织化学染色检测HMGB1和VEGF-D的表达水平,并分析两者的相关性.用HMGB1重组的质粒转染人胃癌细胞BGC-823,用逆转录PCR的方法分析VEGF-D mRNA的表达水平变化.结果 正常胃黏膜中未发现染色阳性细胞,87例胃癌组织共检出VEGF-D阳性标本48例,阳性率为55.17%,检出HMGB1阳性标本63例,阳性率72.41%;87例癌旁组织共检出VEGF-D阳性标本22例,阳性率为25.29%,检出HMGB1阳性标本15例,阳性率为17.24%;胃癌组织中VEGF-D和HMGB1阳性率均显著高于癌旁组织(P<0.05)和正常胃组织(均P<0.05),HMGB1阳性与VEGF-D阳性呈正相关(r=0.482,P=0.001);转染后BGC-823细胞中HMGB1和VEGF-D mRNA表达水平显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 胃癌组织中HMGB1和VEGF-D蛋白表达水平均显著增加,并且两者呈正相关,体外研究证实HMGB1具有促进VEGF-D基因转录的作用,两者在胃癌发展中的机制还有待进一步研究确认.
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SN-38载药纳米微球对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用
目的:检测喜树碱活性代谢产物SN-38载药纳米微球(SN-38-np)的各项特征,比较该栽药纳米微球与裸药抗人胃癌肿瘤细胞BGC-823的效果.方法:用溶剂分散法制备SN-38/PCL-PEG纳米微球.原子力显微镜和透射电子显微镜观察纳米微球形态,采用高效液相色谱法(HPLC)测定SN-38浓度并计算该栽药微球载药量、包封率及描绘其体外释放曲线.采用MTT法观察该微球对人胃癌细胞株BGC-823的生长抑制效果,荧光显微镜检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果:微球为不规则的圆形,平均粒径小于100nm.载药量11%左右,包封率80%左右;SN-38纳米微球可稳定溶解于水中且具有良好的缓释特性:MTT结果显示,较低浓度的SN-38载药纳米微球在72 h抑制肿瘤效果明显优于SN-38裸药,同时计算IC50发现SN-38载药纳米微球在24 h和72 h的IC50明显低于SN-38裸药(P<0.05),两者48 h时间点的IC50相当;细胞内活性氧(ROS)检测结果显示:裸药和载药微球均可明显诱导ROS产生,在较低作用浓度时,SN-38载药纳米微球可比裸药诱导产生更多的细胞内ROS产物.结论:SN-38载药纳米微球可使细胞内达到并维持有效药物浓度,即使在较低作用浓度下亦可持续有效的抑制肿瘤细胞生长,效果明显优于相同浓度下SN-38裸药.
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大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期的阻滞调节机制
目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72 h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响.应用免疫组化染色检测大蒜素作用前后SGC-7901和BGC-823细胞CDC2和CyclinB蛋白表达.结果:不同浓度的大蒜素可以抑制人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的增殖,且随着大蒜素浓度的增大,抑制率逐渐增高.大蒜素抑制SGC-7901细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72 h为23 mg/L;大蒜素抑制BGC-823细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72 h为35 mg/L大蒜素作用于两种细胞,其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(SGC-7901细胞24,48 h vs对照:26.47±2.54%,28.88±2.75% vs 24.30±2.74%,P＜0.01;BGC-823细胞24,48 h vs对照:22.78±1.45%,24.87±1.61% vs 20.32±1.34%,P＜0.01),S期细胞无明显变化.未经大蒜素处理的两种细胞,CDC2和CyclinB蛋白表达均为阳性,大蒜素处理后,CDC2和CyclinB蛋白表达下降.SGC-7901细胞经23 mg/L大蒜素处理后,CDC2蛋白相对阳性表达率为87.2%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为59.3%.BGC-823细胞CDC2蛋白在35 mg/L大蒜素作用后,相对阳性表达率为84.4%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为62.8%,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:大蒜素使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823停滞于G2/M期,其机制是通过CDC2和CyclinB蛋白表达下降实现的.
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去甲斑蝥素降低人胃癌细胞程序性细胞死亡因子4的表达
目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制.方法 MTT法测定NCTD 5～640 μmol·L-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0,6,30和60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD60 μmol· L-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L-1作用4h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRTPCR)测定NCTD 60 μmol· L-1作用BGC-823细胞6,12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达.Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响.结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24,48和72 h IC50分别为74.5,35.0和10.3 μmol·L-1.NCTD 6,30和60 μmol· L-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9％,47％和62％.NCTD对PDCD4mRNA表达无影响.与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响.NCTD 60 μmol-L-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P＜0.01).细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用.结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达.
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白芍总苷脂质体诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的实验研究
目的 探讨白芍总苷脂质体对人胃癌BGC-823细胞凋亡的诱导作用.方法 CCK-8试剂盒检测白芍总苷脂质体对BGC-823细胞增殖的影响,HE染色、Hoehest 33342/PI双染和透射电子显微镜观察BGC-823细胞凋亡的形态学变化,Westernblotting检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果 白芍总苷脂质体能明显抑制BGC-823细胞的增殖,呈现一定的剂量依赖关系(P＜0.05).白芍总苷脂质体干预BGC-823细胞48 h后,凋亡形态学观察均可见细胞核固缩、碎裂和凋亡小体等凋亡特征改变,Western blotting检测Bel-2蛋白表达减少,Bax表达增多,Bcl-2/Bax比值降低.结论 白芍总苷脂质体明显诱导胃癌BGC-823细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bel-2蛋白、上调Bax蛋白及降低Bcl-2/Bax比值有关.
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羟基红花黄色素A对裸鼠人胃腺癌BGC-823移植瘤抑制作用的研究
目的 从整体水平研究羟基红花黄色素A(HSYA)对抗人胃腺癌细胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤的作用机制.方法 培养人胃腺癌细胞株BGC-823,细胞活力和数量符合接种要求时,接种至30只裸鼠右前肢腋部皮下,建立裸鼠人癌移植瘤模型.随机分为模型组,环磷酰胺对照组,HSYA大、中、小剂量组(1.40、0.70、0.35 mg/kg).给药20 d剥离肿瘤,光镜及透射电镜观察瘤组织的病理及超微结构改变,流式细胞术检测瘤细胞的凋亡及细胞周期.结果 模型组移植瘤生长明显较HSYA 小剂量组、环磷酰胺对照组快;模型组瘤重亦明显高于此2组(P<0.05);HSYA 小剂量组可导致瘤细胞凋亡,其凋亡率与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01),但对细胞周期无明显影响;HSYA小剂量组光镜下可见瘤组织病理恶化程度低于模型组,电镜下可观察到瘤细胞出现凋亡小体.结论 适当浓度的HSYA对肿瘤有一定的抑制作用,诱导肿瘤细胞的凋亡可能是其抗肿瘤作用的机制之一.
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全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究
目的 探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对体外培养的胃癌BGC-823细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法 不同浓度全反式维甲酸处理培养的胃癌BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用RT-PCR检测细胞Survivin基因mRNA的变化.结果 全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05).TUNEL检测显示:以5 μmol/L的全反式维甲酸对BGC-823细胞处理0、24、48、72 h后细胞凋亡率逐渐增加(P<0.05),呈时间依赖性.RT-PCR检测显示BGC-823细胞Survivin基因的mRNA表达呈时间依赖性下调.结论 全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞株具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Survivin基因表达有关.
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通关藤提取物诱导BGC-823细胞凋亡及对MTDH基因表达的作用研究
目的:通过观察不同浓度通关藤提取物对人胃腺癌BGC-823细胞增殖、凋亡及MTDH基因表达的影响,为胃癌的临床治疗提供实验基础及潜在治疗靶点.方法:①MTT法检测通关藤提取物对BGC-823细胞增殖影响.②Annexin V/PI双染法检测通关藤提取物对BGC-823细胞凋亡影响.③反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测通关藤提取物对BGC-823细胞MTDH mRNA表达影响.④Western Blot法检测通关藤提取物对BGC-823细胞凋亡相关蛋白表达影响.结果:①通关藤提取物作用于BGC-823细胞,细胞生长抑制率随药物浓度增大而升高,加药各组与对照组相比,差异有统计学意义.②通关藤提取物0 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2mmol/L诱导BGC-823细胞凋亡率为(2.98±1.01)％、(6.79±0.68)、(12.512±1.27)％、(16.97±1.09),与对照组相比差异有统计学意义.③通关藤提取物可下调BGC-823细胞MTDH mRNA表达,这种作用具有浓度依赖性.④通关藤提取物能够下调Bcl-2家族中的抑凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl的表达尤其是Bcl-xl的表达,上调凋亡执行者Caspase-3的表达.结论:通关藤提取物可下调BGC-823细胞MTDH mRNA表达,并通过下调Bcl-2、Bcl-xl,上调Caspase-3的表达而诱导BGC-823细胞凋亡,从而抑制了BGC-823细胞的生长增殖.
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姜黄素诱导人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的光动力学研究
目的:研究光照时间和波长与光敏化姜黄素诱导细胞凋亡效应之间的关系.方法:体外培养的胃腺癌BGC-823细胞加姜黄素后光照0、4、8、12、24h,4、8、12h组部分样品光照结束立即流式细胞术检测凋亡率,其余样品继续避光处理至24h检测凋亡率;BGC-823细胞加姜黄素后进行全波长及400、470、530、660nm的波长光照处理,24h后流式细胞术检测凋亡率.结果:光照对姜黄素诱导BGC-823细胞凋亡的增效作用与光照时间有关.低浓度姜黄素避光处理24h不能诱发细胞凋亡,光照4、8、12h立即检测组的凋亡率显著低于光照结束后避光处理到24h组,而光照后继续避光处理组中,4、8h组效果显著低于12h以上组.姜黄素要获得显著的凋亡增敏效果需要400nm左右波长的光照,可见光全波长的对姜黄素诱导细胞凋亡效果佳.结论:低浓度姜黄素诱导BGC-823细胞凋亡需要一定的光照时间及药物作用时间,12h以上的光照时间是引发大凋亡必需的,光照波长越接近大激发波长凋亡诱导作用越强.
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舒尼替尼对胃癌细胞BGC-823增殖的影响及机制
目的:探索舒尼替尼对胃癌细胞BGC-823增殖的影响及机制.方法:不同浓度舒尼替尼处理BGC-823细胞24、48、72、96 h后,MTT法检测细胞增殖,得出药物的半数抑制浓度为0.592 8 μmol/L.筛选出比较接近半数致死量的3个药物浓度0.25、0.50、1.00 μmol/L作用细胞48 h后,细胞核染色检测细胞凋亡;免疫荧光染色法检测Notch-1的表达及细胞凋亡水平;蛋白质免疫印迹检测Notch-1、caspase-3、caspase-9蛋白表达水平.结果:MTT检测结果显示,舒尼替尼在浓度0.156 25～10μmol/L时可显著抑制BGC-823细胞增殖,且具有时间和剂量依赖性.细胞核染色结果显示,不同浓度的舒尼替尼处理BGC-823细胞48 h后随浓度的增加,细胞凋亡数量显著增多.蛋白质免疫印迹结果显示,不同浓度舒尼替尼作用48 h后,Notch-1蛋白的表达水平随浓度的增加而降低,caspase-3、caspase-9表达水平随浓度的增加而升高.结论:舒尼替尼通过抑制Notch-1的信号通路活性,进而抑制BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡.
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表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制
目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响及其可能的机制.方法:不同浓度EGCG单独或联合c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制剂SP600125作用BGC-823细胞后,应用MTT法检测BGC-823细胞的增殖抑制率,显微镜下观察细胞的形态学改变,FCM检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞中p-JNK和p-c-iun蛋白的表达情况,免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3的表达.结果:EGCG可抑制BGC-823细胞的增殖(P<0.05),呈时间和剂量依赖效应;EGCG可诱导BGC-823细胞凋亡,细胞凋亡率呈剂量依赖效应(P<0.05);EGCG可上调BGC-823细胞中p-JNK、P-c-jun和caspase-3的表达(P<0.05).EGCG引起的BGC-823细胞增殖抑制和caspase-3表达水平的上调可被SP600125部分抑制.结论:EGCG可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,其作用机制可能与激活JNK信号转导途径并上调caspase-3的表达有关.
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培美曲塞联合奥沙利铂对人胃癌BGC-823细胞生长的影响
目的:探讨培美曲塞与奥沙利铂对人胃癌细胞BGC-823的生长抑制作用以及可能的作用机制.方法:采用不同浓度培美曲塞和奥沙利铂单独或联合作用于BGC-823细胞.应用MTT法检测BGC-823细胞生长抑制率,FCM检测细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期蛋白D1 (cell cycle D1,cyclin D1)的表达水平.结果:培美曲塞和奥沙利铂均可抑制BGC-823细胞的生长(P＜0.05),且呈时间和剂量依赖性.这两种药物均可明显增加G1期细胞比例,降低S期细胞比例.蛋白质印迹法检测结果显示,cyclin D1和PCNA表达量均明显降低,其中培美曲塞和奥沙利铂联合处理具有协同效应,培美曲塞(80 μg/mL)处理24 h后序贯奥沙利铂(40 μg/mL)处理24 h组BGC-823细胞的生长抑制率明显高于双药联合处理组以及奥沙利铂(40 μg/mL)处理24 h后序贯培美曲塞(80 μg/mL)处理24 h组(P＜0.05).结论:培美曲塞和奥沙利铂均可抑制胃癌细胞BGC-823的生长,细胞被阻滞于G1期.在双药联合处理中,以培美曲塞序贯奥沙利铂对胃癌细胞的生长抑制强.
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奥沙利铂联合替尼泊苷抑制胃癌BGC-823细胞生长和诱导凋亡的作用
目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)联合替尼泊苷(teniposide, VM-26)抑制胃癌BGC-823细胞的体外生长及诱导细胞凋亡的作用.方法:应用MTT法检测不同浓度OXA和VM-26单药以及联合用药对胃癌BGC-823细胞生长的抑制作用,应用FCM检测细胞凋亡率,同时应用免疫细胞化学法检测OXA单药以及OXA联合VM-26用药对胃癌BGC-823细胞caspase-9和livin蛋白表达的影响.结果:OXA和VM-26单药均可抑制胃癌BGC-823细胞的生长,且在一定浓度范围内呈剂量依赖效应;联合用药组的细胞生长抑制率明显高于OXA和VM-26单药组,差异有统计学意义(P<0.05),联合指数(combination index, CI)为0.46.OXA(1.250 μg/mL)单药作用于胃癌BGC-823细胞12、24和48 h后,细胞凋亡率分别为6.13%、13.86%和21.48%;VM-26(0.625 μg/mL)单药组的细胞凋亡率分别为4.60%、10.72%和17.07%;联合用药组的细胞凋亡率分别为11.73%、24.14%和44.75%.联合用药组的细胞凋亡率明显高于OXA和VM-26单药组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫细胞化学结果显示,OXA(1.250 μg/mL)单用以及联合VM-26(0.750 μg/mL)作用于胃癌BGC-823细胞48 h后,凋亡相关基因caspase-9蛋白的阳性表达率均增加,而livin蛋白的阳性表达率均下降;各用药组之间以及用药组与对照组(未用药)之间的差异均有统计学意义(P<0.05).结论:OXA联合VM-26用药在抑制胃癌BGC-823细胞的生长和诱导细胞凋亡方面具有协同作用.
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AP-2α抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导凋亡的作用机制研究
目的 研究核转录因子AP-2α抑制胃癌细胞株BGC-823增殖活性及诱导凋亡的作用和机制.方法 收集临床胃癌及其癌旁组织标本30对,免疫印迹及荧光定量法检测AP-2α及Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因mRNA含量;生物软件预测AP-2α蛋白与KLF4基因启动子上的转录因子结合位点并进行验证.分别转染pcDH1-AP-2α及pshRNA-KLF4到BGC-823细胞,转染后48 h,确定细胞转染效率,免疫印迹法检测胞内AP-2α、KLF4、P53及BCL-2蛋白表达;噻唑蓝(4,5-dimethyl-2-thiazolyl-2,5-diphenyl-2-Htetrazolium bromide,MTT)检测基因干预后各组细胞增殖活性;流式法检测各组细胞凋亡情况.结果 所有检测的30对组织标本中,肿瘤中AP-2α表达和KLF4基因mRNA含量均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01,vs癌旁);生物软件预测显示,AP-2α在KLF4基因启动子上存在9个碱基"5′-GCCGCCGGC-3′"的理论结合位点,位点位于转录起始位点前52碱基处,荧光素酶活性检测证实AP-2α可以结合于预测位点并对下游基因的转录进行正调控;细胞转染后48 h,GFP计数显示,细胞瞬时转染效率约为85％,免疫印迹检测数据表明,AP-2α过表达导致KLF4和P53蛋白表达上调,BCL-2蛋白表达下调,而KLF4基因沉默则能够明显减弱AP-2α对KLF4或者P53蛋白表达的影响;细胞转染后24～72 h,pcDH1-AP-2α转染能够明显抑制BGC-823细胞对数期增殖活性,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α基因过表达对细胞增殖活性的抑制作用;pcDH1-AP-2α转染细胞后48 h,能够明显导致BGC-823细胞产生凋亡,pshRNA-KLF4转染则能够明显减弱AP-2α过表达产生的诱导细胞凋亡的能力.结论 核转录因子AP-2α通过KLF4基因的转录调控对BGC-823细胞的增殖和凋亡产生影响.
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应用Cell-IQ筛选榄香烯诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的初步研究
目的 应用全自动活细胞观测分析系统(Cell-IQ)及流式细胞仪观察榄香烯诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡的影响.方法 应用不同浓度的榄香烯作用于人胃癌BGC-823细胞,使用Cell-IQ筛选抑制增殖的佳浓度,并根据佳作用浓度,应用流式细胞仪观察分析榄香烯对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响.结果 榄香烯对人胃癌BGC-823细胞的抑制作用随其浓度增加而逐渐增强,以150 μg/mL为佳,之后榄香烯浓度再增高,其抑制肿瘤细胞增殖作用不再增强; 150 μg/mL的榄香烯作用于胃癌BGC-823细胞24 h后,主要表现为诱导早期凋亡为主,细胞凋亡率为(36.9±3.23)%,较对照组有明显差异(P<0.01).结论 Cell-IQ能够进行细胞毒性、活性和增殖的检测和筛选;榄香烯对于人胃癌BGC-823细胞有明确抑制作用,佳浓度为150 μg/mL; 榄香烯抑制人胃癌BGC-823细胞增殖作用的主要机制可能为诱导细胞凋亡,而非细胞毒作用.
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顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究
目的研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7 901和BGC-823细胞体外增殖的影响.方法使用MTT法测定细胞增殖,确定顺铂的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24 h和48 h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24 h或48 h的作用效果;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况.结果以24 h时IC40～IC50的药物浓度作为试验的工作浓度,确定CDDP对SGC-7 901和BGC-823细胞的工作浓度分别为5 μg/mL和1 μg/mL.单纯的43 ℃热疗60 min在24 h时对2个细胞系均有抑制作用(P＜0.05), 在48 h时没有显著抑制作用.CDDP 5 μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时对SGC-7 901细胞均有显著的抑制作用(P＜0.01), CDDP 5 μg/mL与热疗联合作用24 h时呈明显的协同作用,在48 h时呈次加作用.CDDP 1 μg/mL化疗或与热疗联合在24 h和48 h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用(P＜0.01), CDDP 1 μg/mL与热疗联合作用24 h和48 h均呈明显的协同作用;24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况发现, CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P＜0.01).结论 CDDP 5 μg/mL与43 ℃热疗60 min联合在24 h时对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用,在48 h时呈次加作用;CDDP 1 μg/mL与43 ℃热疗60 min联合对BGC-823细胞的增殖抑制在24 h和48 h时均呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关.
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羟基喜树碱与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究
目的研究羟基喜树碱与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823细胞体外增殖的影响.方法使用MTT法测定细胞增殖,确定羟基喜树碱的工作浓度,并以该浓度进行化疗或与热疗联合,计算24 h和48 h时的细胞生存率,根据Veleriote法判断热化疗联合24 h或48 h的作用效果; 24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况.结果以24 h时IC20～IC30的药物浓度作为试验的工作浓度,确定HCPT对2株细胞系的工作浓度均为3 μg/mL.单纯43 ℃热疗60 min在24 h对2株细胞系均有抑制作用(P＜0.05), 在48 h时没有显著的抑制作用.HCPT在24 h时对SGC-7901细胞有显著的抑制作用(P＜0.01), 与43 ℃热疗60 min联合后在24 h和48 h时均有显著的抑制作用(P＜0.01), HCPT 3 μg/mL与热疗联合作用24 h或48 h对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用.HCPT化疗或与热疗联合在24 h和48 h时均对BGC-823细胞有显著的抑制作用(P＜0.01), HCPT 3 μg/mL与热疗联合作用24 h时对BGC-823细胞的增殖抑制具有次加作用,在48 h时呈明显的协同作用; 24 h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的凋亡情况发现,热疗组、 HCPT化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高(P＜0.05).结论 HCPT 3 μg/mL与43 ℃热疗60 min联合在24 h和48 h时对SGC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用;对BGC-823细胞的增殖抑制在24 h时呈次加作用,在48 h时呈明显的协同作用,这可能与细胞凋亡的增多有关.
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CD44在胃癌患者及胃癌细胞系中的表达及意义
目的 探讨CD44在胃癌患者组织及其胃癌细胞系中的表达水平,并分析其与临床病理参数的关系.方法 收集60例胃癌患者手术切除的癌组织及癌旁组织,常规培养胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901,用免疫组织化学染色及免疫荧光染色检测其CD44的表达水平,并分析其与临床病理参数的关系,体外划痕实验检测不同CD44表达水平的胃癌细胞系的迁移能力.结果 60例胃癌患者癌组织中CD44阳性表达率为81.6％ (49/60),与癌旁组织26.7％(16/60)比较,差异有统计学意义(x2=36.55,P＜0.05),且CD44表达水平与患者的临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均＜0.05);荧光免疫染色结果表明,CD44蛋白在BGC-823细胞中的荧光强度高于SGC-7901细胞;体外划痕实验结果证实,CD44表达水平较高的BGC-823细胞的迁移能力明显高于SGC-7901细胞.结论 CD44在胃癌患者癌组织及胃癌细胞系中的表达水平较高,可作为胃癌迁移能力判断及临床预后分析指标.
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二氢青蒿素抑制ATF2磷酸化提高胃癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性
目的 探讨二氢青蒿素与5-氟尿嘧啶协同抗胃癌效应的机制.方法 MTT实验检测胃癌细胞系BGC-823的细胞活力;流式细胞术检测BGC-823细胞的凋亡;Western blot实验检测BGC-823细胞中ATF2、磷酸化ATF2、Bcl-xl的表达水平及细胞色素c的释放水平和Caspase-3活化水平.结果 5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素对BGC-823的细胞活力抑制率[(67.1±5.5)％]和凋亡诱导率[(37.3±2.9)％]均显著高于5-氟尿嘧啶单治疗组[细胞活力抑制率:(18.9±1.5)％,P＜0.05];凋亡诱导率[(9.5±0.9)％,P＜0.05].5-氟尿嘧啶+二氢青蒿素+ATF2质粒组BGC-823的细胞活力抑制率[(26.5±2.1)％]和凋亡诱导率[(14.9±1.1)％]显著低于5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组(P＜0.05).5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素组的ATF2磷酸化水平和Bcl-xl表达水平均显著低于5-氟尿嘧啶单治疗组,同时5-氟尿嘧啶联合二氢青蒿素治疗组的细胞色素c释放水平及Caspase-3活化水平均显著高于5-氟尿嘧啶单治疗组.结论 二氢青蒿素通过抑制ATF2的磷酸化增强5-氟尿嘧啶对胃癌细胞的杀伤活性.
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鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞BGC-823增殖影响的实验研究
目的 探讨鳕鱼皮寡肽(cod skin of oligopeptide,CSO)对人胃癌细胞(BGC-823)增殖的影响.方法 用不同浓度(20、40、60、80mg/ml)CSO处理体外培养的BGC-823,72h后显微镜下观察细胞生长情况;分别于24、48、72h,应用CCK-8法检测细胞增殖情况并计算50％细胞抑制率(IC50);处理后24h采用流式细胞术测定细胞凋亡及细胞周期的改变情况.结果 与对照组相比,经CSO处理后,镜下BGC-823数目减少.CCK-8检测结果显示,BGC-823数目减少呈剂量、时间依懒性(均P＜0.05),并且CSO对BGC-823作用24、48和72h的IC50分别是87.34、68.14、44.55mg/ml.对照组BGC-823存活率为(86.62±10.32)％,60mg/ml组BGC-823存活率为(24.18±6.59)％,差异有统计学意义(P＜0 05);对照组BGC-823晚期凋亡率为(1.81±0.35)％,60mg/ml组BGC-823晚期凋亡率为(55.84±5.89)％,差异有统计学意义(P＜0.05).在G1期,对照组BGC-823细胞分布为(61.13±10.32)％,60mg/ml组BGC-823细胞分布为(79.74±10.21)％,差异有统计学意义(P＜0.05);在S期,对照组BGC-823细胞分布为(23.04±8 64)％,60mg/ml组BGC-823细胞分布为(10.42±5.36)％,差异有统计学意义(P＜0.05);在G2期,20mg/ml组BGC-823细胞分布为(9.96±268)％,40mg/ml组BGC-823细胞分布为(6 93±1 25)％,60mg/ml组BGC-823细胞分布为(9.84±3.79)％,与对照组BGC-823细胞分布(15.83±5 89)％相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 CSO可阻滞BGC-823生长周期,促进BGC-823凋亡,抑制增殖,从而抑制肿瘤细胞的生长.
