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MCM7与其结合蛋白的研究进展
MCM7属于微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance protein,MCM)家族,参与真核细胞DNA复制起始和延伸、DNA损伤、mRNA转录、细胞增殖及恶变的同时,还能与RACK1、AR、CDK等多种蛋白相互作用,共同调节细胞周期进程.MCM7作为复制执照因子(replication licensing factor,RLF),在细胞进入S期过程中起到重要作用,而其在体内的表达可作为人体恶性肿瘤和生物行为的预测因素之一.
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沉默MCM7基因后肝癌SMMC-7721细胞差异表达基因的筛选
目的:探究微小染色体维持蛋白7(minichromosome maintenance protein 7,MCM7)基因在调节肝癌细胞生长的相关机制.方法:通过siRNA干扰技术沉默人肝癌SMMC-7721细胞中的MCM7基因表达,采用人全基因组表达谱芯片,筛查MCM7沈默后差异表达基因,进行生物信息学分析,并对部分差异表达基因进行蛋白免疫印迹法(Western blot)验证.结果:芯片筛选出在人肝癌SMMC-7721细胞中沉默MCM7基因后差异表达基因1010个,其中上调基因391个,下调基因619个.这些基因主要涉及生物大分子代谢、细胞周期调控、细胞增殖、细胞凋亡等方面,参与胞吞、肿瘤相关通路、P53信号通路、mTOR信号通路等通路的改变.Western blot对部分差异基因表达验证的结果显示CCNDl、SKP2和JUP蛋白表达均下调,与芯片检测结果一致.结论:应用人基因表达谱芯片,成功筛选出沉默MCM7基因后人肝癌细胞SMMC-7721差异表达基因,为探究MCM7基因影响肝癌细胞生长提供了有效线索.
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MCM7在不同子宫内膜组织中的表达及意义
目的：探讨MCM7在不同子宫内膜组织中的表达变化及意义。方法：采用免疫组化方法检测30例正常子宫内膜、30例不典型增生内膜和60例子宫内膜癌组织中MCM7蛋白的表达情况。结果：MCM7在正常子宫内膜、不典型增生内膜和子宫内膜癌组织中的表达呈逐渐升高的趋势，且组间差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：MCM7蛋白可能在子宫内膜癌的发生发展过程中具有重要作用。
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RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究
目的 探讨微小染色体维持蛋白7 (miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响.方法 构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理.通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型.观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况.结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功.裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61) mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P＜0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P＜0.05.实验组MCM7 mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±o.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P＜0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P＜0.05.MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100％(10/10),在实验组中为30％(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,x2=18.261,P＜0.001.结论 慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点.
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大鼠肝癌形成过程MCM7基因动态变化
目的:探讨MCM7基因在黄曲霉毒素B1 (AFB1)实验诱发大鼠肝癌过程中的动态变化及意义.方法:将70只雄性4周龄Wistar大鼠随机分为AFB1组(50只)和对照组(20只),AFB1组腹腔注射AFB1,对照组则给予溶媒二甲基亚砜.在诱发肝癌过程中,分别于第13、33和53周对大鼠进行肝活检;实验至第73周处死全部大鼠取肝组织;采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和免疫组化方法检测肝组织中MCM7 mRNA和蛋白的表达情况.结果:AFB1组肝细胞癌发生率为44.1％(15/34),对照组为0(0/16),AFB1组显著高于对照组,x2=8.093,P＜0.001.随着大鼠肝癌的形成,MCM7 mRNA和蛋白的表达水平逐步升高,AFB1组第53和73周显著高于第13和33周,F值分别为55.632和207.253,P值均＜0.001;对照组各时间点的表达较低且变化不大.免疫组化结果显示,AFB1组第53周MCM7蛋白阳性表达率为26.7％且以弱阳性为主,第73周MCM7蛋白阳性表达率为100％且多为强阳性,阳性表达率和表达强度均比其他时间点的高,两者比较差异均有统计学意义,P值均＜0.001.结论:MCM7表达水平随着肝癌的形成逐渐上升,且在肝癌组织中表达高,MCM7有可能是参与肝癌形成的关键基因,但其详细机制有待进一步探讨.
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MCM7和P27在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨MCM7和P27蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与肝细胞癌发生、发展和临床病理因素的关系.方法 选取2013年1月至2015年8月间邯郸市中心医院收治的60例原发性肝癌患者的肝细胞癌组织和癌旁组织标本,另选取20例正常肝组织为对照.采用免疫组织化学 (IHC) S-P法检测3种肝组织中MCM7和P27蛋白的表达情况,结合患者病理指标进行分析.结果MCM7在肝细胞癌组织中的阳性表达率为73.3％ (44例),在癌旁硬化肝组织和正常肝组织中未见明显表达,差异均有统计学意义 (均P＜0.05).肝细胞癌中P27蛋白的阳性率为43.3％ (26例),低于癌旁组织的83.3％ (50例) 和正常肝组织的85.0％ (17例),差异均有统计学意义 (均P＜0.01).Spearman等级相关分析显示,肝细胞癌中MCM7蛋白与P27蛋白的表达呈负相关 (P＜0.01).结论MCM7蛋白高表达和P27蛋白低表达在肝细胞癌的发生中可能起到重要作用.
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子宫颈鳞状细胞癌中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7的表达及病理学分析
目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7的表达及病理学情况.方法 分析2013年2月~2015年4月浙江省湖州市德清县中医院病理科收集的手术切除宫颈新鲜标本90例的病理学情况,依据宫颈病变分级标准进行分组:正常组(20例)、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ组(20例)、CINⅡ组(15例)、CINⅢ组(15例)、宫颈鳞癌组(20例).采用免疫组化法检测Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白表达情况;观察并比较Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白在宫颈不同病变、临床分期、病理情况的宫颈组织中的表达;观察Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白与宫颈鳞癌病理分期的相关性.结果 鳞癌组Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均高于正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组,差异均有统计学意义(均P<0.05).Ⅱa~Ⅱb期宫颈鳞癌组织中Au-rora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均高于Ⅰa~Ⅰb期宫颈鳞癌组织,低分化宫颈鳞癌组织中Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均高于高分化、中分化宫颈鳞癌组织,差异均有统计学意义(均P<0.05).Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白阳性表达率均与宫颈鳞癌病理分期呈正相关(r=0.305、0.306、0.304,均P<0.05).结论 Aurora-A、MCM7和HPV16 E7蛋白在宫颈癌、癌前病变中具有重要的意义,各蛋白联合检测可以为宫颈癌诊断及预后评价提供可靠的理论依据.
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乳腺癌组织中HPV16 18E6及p53 MCM7蛋白的表达及意义
目的:探讨人乳腺癌及乳腺良性病变中高危型HPvl6、18感染和细胞周期复制调控蛋白p53、MCM7异常表达与人乳腺癌发生、发展的关系.方法:采用免疫组织化学SP法,检测30例正常乳腺、30例乳腺腺病,55例乳腺癌、5例导管原位癌及其癌旁组织中HPV16、18E6,p53和MCM7蛋白的表达.结果:55例乳腺癌组织中HPV16、18E6,p53和MCM7蛋白的阳性表达率分别为58.18%、38.18%和96.36%.均显著高于正常组和腺病组(P<0.01、P<0.001、P<0.05).浸润性导管癌HPV16、18E6阳性组中p53蛋白的阳性表达率显著低于HPV16、18E6阴性组(P<0.01).HPV16、18E6与p53蛋白的表达呈负相关(r=-0.576 9;P<0.001),而与MCM7蛋白表达呈正相关(r=0.544 2;P<0.001).MCM7蛋白的阳性表达率与浸润性导管癌组织学分级、淋巴结转移和肿块直径有关(P<0.01、P<0.03、P<0.01).结论:高危型HPV16、18E6感染后p53功能的失活和MCM7蛋白的高表达导致细胞周期复制调控异常,可能涉及了HPV感染后乳腺癌的发生、发展过程.MCM7的高表达与乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移有关.二者联合检测可作为评价HPV感染后乳腺上皮细胞的增殖状态、早期诊断和预测肿瘤生物学行为的重要指标.
关键词： 乳腺癌 人乳头瘤病毒(HPV) P53 MCM7 -
MCM7、p27在结肠腺癌中的表达及其临床意义的研究
目的：检测结肠腺癌组织细胞中MCM7、p27蛋白的表达，探讨MCM7,p27二者表达异常与人结肠腺癌发生、发展的关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测40例结直肠腺癌，30例结肠息肉等非癌病变组织中MCM7、p27蛋白的表达。结果：40例结直肠腺癌中MCM7蛋白的阳性表达率为100%，与正常对照组的表达差异有显著意义(P<0.001)。结直肠腺癌组中MCM7蛋白的阳性表达与组织学分级有关，高分化组均显著低于中、低分化组(P<0.05，P<0.05)。淋巴结转移组中MCM7蛋白的阳性表达显著高于无淋巴结转移组（(P<0.05）；癌组中P27蛋白的阳性表达为72.5%(29/40），P27蛋白表达水平高低与组织学分级有关，高、中分化组均显著高于低分化组（P<0.05)。癌组中MCM7蛋白的表达与P27呈负相关（r =-0.4920, P<0.01）。而MCM7和p27的表达均与结直肠腺癌的性别、年龄、肿瘤大小、组织学无关（P<0.05），p27的表达尚与淋巴结转移无关（P=0.9319）。结论：细胞复制准许因子M C M7蛋白的高表达和细胞周期检测点负调控因子P27蛋白的低表达可能涉及了人结直肠腺癌的发生和发展过程，M C M7蛋白的高表达与癌细胞的增殖、侵袭和转移有关，M C M7和p27蛋白的联合检测可作为评价结直肠腺癌细胞的增殖状态、预测结直肠腺癌临床预后、指导临床治疗的重要生物学指标。
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结直肠腺癌中MCM7与p27表达相关性的临床研究
目的 检测结直肠腺癌组织细胞中MCM7、p27蛋白的表达的差异性与临床表现的相关性,以探讨其对肿瘤发生发展过程中的调控意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测50例结直肠腺癌组织中MCM7、p27蛋白的表达,并对比其与临床表现的相关性.结果 MCM7和p27蛋白在结直肠腺癌的发生、发展及其临床表现中分别存在不同的调控方向,MCM7的高表达与P27的低表达与肿瘤的分期及其愈合有直接的相关性.在P27蛋白表达阴性的实验病例而MCM7阳性者共11例.P27蛋白表达阳性而MCM7表达阴性的实验病例共29例.经统计学处理,在结直肠腺癌中MCM7蛋白的阳性表达p27的表达呈负相关(r=-0.4911P ＜0.01),分化程度越高,MCM7与P27的表达负相关性越大(P＜0.05).结论 结肠腺癌细胞的不同分级往往决定其不同的生物学特性,并对其预后起关键作用.相关研究发现细胞复制准许因子MCM7蛋白、细胞周期检测点负调控因子P27蛋白的低表达可能与其癌细胞的分化、侵袭性相关,其中MCM7与P27的负相关性的越大,则其预后越差,其联合检测并行对比可能会为我们提供一种新的判断病人预后的参考指标.
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MCM7和Ki-67在乳腺癌中的表达及其与新辅助化疗关系的研究
目的 探讨乳腺癌新辅助化疗前后MCM7和Ki-67蛋白的表达状况,分析其与化疗疗效的关系.方法 采用免疫组化方法检测55例乳腺癌新辅助化疗前后标本中MCM7和Ki-67的表达.结果 新辅助化疗有效率为76.4%.化疗前MCM7和Ki-67蛋白阳性表达均显著高于化疗后(P＜0.01);化疗前MCM7蛋白阳性表达显著高于Ki-67(P＜0.01).化疗有效组(42例)MCM7蛋白阳性表达显著高于无效组(13例)(P＜0.01),而Ki-67蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).化疗前MCM7、Ki-67表达呈正相关(r＝0.58,P＜0.01).结论 ET方案新辅助化疗有较好的疗效,可能通过抑制MCM7、Ki-67蛋白的表达阻止乳腺癌细胞的增殖.MCM7蛋白高表达者化疗更敏感,MCM7可作为临床指导乳腺癌化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标之一.
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子宫颈鳞状细胞癌中Aurora-A、MCM7和HPV 16 E7的表达与临床病理特征的关系
目的：探讨子宫颈鳞状细胞癌( cervical squamous cell carcinoma, CSCC)中Aurora-A激酶、微小染色体维持蛋白7( mini-chromosome maintenance protein 7, MCM7)和人乳头瘤病毒16型E7蛋白(human papillomavirus type 16 E7 protein, HPV 16 E7)的表达及与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化PV 9001两步法检测子宫颈上皮内瘤变( cervical intraepithelial neopla-sia, CIN)( CIN1者20例、CIN2+3者30例)、40例子宫颈鳞状细胞癌( cervical squamous cell carcinoma, CSCC)及20例慢性子宫颈炎组织中Aurora-A、MCM7及HPV 16 E7的表达,并进行定位、半定量及相互关系的分析。结果(1) Aurora-A定位于细胞质和细胞核,MCM7蛋白阳性染色定位于细胞核,HPV 16 E7以细胞核和(或)细胞质出现棕黄色颗粒为阳性。(2) Aurora-A、MCM7及HPV 16 E7在CSCC组、CIN 2+3组的表达分别高于CIN1组、慢性子宫颈炎组(P<0．0083)。(3)子宫颈浸润癌中,Aurora-A与HPV 16 E7的表达呈正相关(P<0．001,rs =0．657),MCM7与HPV 16 E7的表达呈正相关(P<0．001,rs =0．616),Aurora-A与MCM7的表达呈正相关(P<0．001,rs =0．597)。(4)Aurora-A表达与肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴结转移相关(P<0．05)；MCM7表达与肿瘤分化程度、临床分期相关(P<0．05)；HPV 16 E7表达与患者年龄、肿瘤直径、肿瘤分化程度、临床分期及有无淋巴结转移无相关性(P>0．05)。结论 Aurora-A、MCM7及HPV 16 E7的表达随子宫颈病变进展逐渐增加,三者与子宫颈癌发生、发展密切相关,有望成为子宫颈癌早期诊断、早期治疗的生物学指标。
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甲状腺乳头状癌中MCM7、CDK2、p27蛋白的表达及意义
目的 探讨MCM7、CDK2及p27蛋白与人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)发生、发展的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测40例PTC、30例甲状腺腺瘤、30例结节性甲状腺肿及20例正常甲状腺组织中MCM7、CDK2、p27蛋白的表达.结果 PTC中MCM7、CDK2蛋白的阳性表达率分别为100.00%(40/40)、80.00%(32/40),两者均明显高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织(P<0.01,P<0.01).PTC中p27蛋白的阳性表达率为22.50%(9/40),明显低于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织(P<0.01).PTC中MCM7与CDK2蛋白的表达呈正相关(r=0.550,P<0.01),MCM7、CDK2及p27蛋白的表达呈负相关(r=-0.334,P<0.05;r=-0.413,P<0.01).结论 MCM7、CDK2蛋白的高表达及p27蛋白的低表达变化与PTC可能存在关联,三者联合检测或许可以作为临床早期诊断和评价甲状腺肿瘤细胞增殖活性的潜在的参考指标.
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非霍奇金淋巴瘤中McM7、p53和Ki-67的表达
目的探讨McM7、p53和Ki-67在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中表达的意义及相互关系.方法应用组织芯片和免疫组化S-P法检测McM7、p53和Ki-67在9例反应性增生淋巴结、175例NHL组织中的表达.结果 NHL各组中McM7标记指数(labelling index,LI)均高于Ki-67 LI;惰性组中McM7 LI和Ki-67 LI低于侵袭性组和高度侵袭性组, 差异有显著性(P<0.05).NHL中p53表达的阳性率为23.4% ,p53在惰性组、侵袭性组及高度侵袭性组之间的表达差异无显著性(P>0.05).Ki-67、p53和McM7三者在NHL中的表达呈平行关系(P<0.01).结论 McM7是反映细胞增殖的良好指标,作用优于Ki-67,其表达指数与NHL的组织分型、细胞增殖及恶性程度有关.p53基因突变在大多数NHL的发生、发展中可能并不是一个主要的分子事件.
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Mcm7及其相互作用的蛋白
Mcm7作为微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance protein, Mcm)家族成员之一,不仅参与调控真核生物DNA的复制起始和延伸过程,而且与Mcm1,Mcm8,Mcm10等许多蛋白质相互作用,共同调节细胞周期进程,使得每个细胞周期的DNA复制一次且仅有一次.
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P16、MCM7、cyclinD1在乳腺癌中的表达及其意义
目的 探讨P16、MCM7和cyclinD1在乳腺癌中的表达及意义.方法 选取术前未经放化疗的乳腺癌手术标本70例、15例乳腺纤维腺瘤、15例瘤旁正常乳腺组织,应用免疫组化SP法检测P16、MCM7和cyclinD1基因蛋白的表达,并将70例乳腺癌标本按临床分期和有无淋巴结转移进行分组比较,分析其与乳腺癌临床病理特征的关系.结果 乳腺癌中P16阳性表达率47.1％明显低于乳腺纤维腺瘤(86.7％)和瘤旁正常乳腺组织(93.3％)(P＜0.01)；MCM7阳性表达率85.7％明显高于乳腺纤维腺瘤(13.3％)和瘤旁正常乳腺组织(6.7％)(P＜0.01)；CyclinD1阳性表达率64.3％明显高于乳腺纤维腺瘤(33.3％)和瘤旁正常乳腺组织(26.7％)(P＜0.01).MCM7和CyclinD1的表达与P16呈负相关(P＜0.01).P16、MCM7的表达均与乳腺癌临床分期、淋巴结转移有关.CyclinD1的表达与临床分期无关,与淋巴结转移有关.结论 P16、MCM7和CyclinD1与乳腺癌的发生、发展有关,三种基因表达联合检测为乳腺癌治疗、预后评估提供依据.
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细胞周期正性调控因子的异常表达与甲状腺癌发生发展的关系
目的 探讨细胞周期正性调控因子的异常表达与人甲状腺癌发生、发展的关系,并评价其在判断甲状腺肿瘤细胞增殖活性和病人预后方面的应用价值.方法 采用免疫组织化学SP法检测50例甲状腺癌、30例甲状腺腺瘤、30例结节性甲状腺肿及20例正常甲状腺组织中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的表达.结果 癌组中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的阳性表达率均显著高于在腺瘤组、结甲组及正常组中的表达(均为P＜0.01),分别为100.00％(50/50)、80.00％(40/50)、84.00％(42/50).癌组中三者的蛋白表达两两比较,均呈正相关(均为P＜0.01).结论 甲状腺癌中MCM7、CDK2及Ki-67蛋白的高表达可能与癌的发生相关,三者联合应用或许可作为临床早期诊断和评价预后的生物学指标.在评价甲状腺肿瘤细胞增殖活性方面,MCM7优于Ki-67.
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HPV16 E7、RB 和 MCM7蛋白在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及意义
目的：探讨HPV16型感染对RB和MCM7蛋白表达调控的影响在乳腺癌发生机制中的作用及意义。方法采用免疫组化EnVision法检测30例正常乳腺组织、30例乳腺腺病、30例乳腺不典型导管上皮增生（ADH）和68例浸润性导管癌（IDC）组织中HPV16E7、RB和MCM7蛋白的表达。结果 IDC中HPV16E7蛋白阳性表达率高于正常乳腺组织、乳腺腺病和ADH，差异有统计学意义（ P＜0.05）。在乳腺腺病、ADH和IDC 中HPV16E7阳性表达与RB蛋白表达之间呈负相关（r＝-0.460，P＜0.02；r＝-0.680，P＜0.01；r＝-0.832，P＜0.000），而与MCM7蛋白表达呈正相关（r＝0.504，P＜0.01；r＝0.710，P＜0.01；r＝0.774，P＜0.000）。 HPV16E7、RB和MCM7蛋白的阳性表达与IDC组织学分级、淋巴结转移和pTNM分期相关（ P＜0.05），而与患者年龄和肿块大径无关（P＞0.05）。结论高危型HPV16感染通过其E7对RB和MCM7蛋白表达调控的影响可能在乳腺癌的发生、发展进程中起到重要的作用。
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MCM7、Ki-67、ER、PR在乳腺癌中的表达及其与新辅助化疗关系的研究
目的:探讨乳腺癌新辅助化疗前后MCM7、Ki-67、ER、PR蛋白的表达,并分析其与化疗疗效的关系.方法:采用免疫组化法检测55例乳腺癌新辅助化疗前后标本中MCM7、Ki-67、ER、PR的表达.结果:新辅助化疗有效率为76.4％.化疗前MCM7和Ki-67蛋白阳性表达均显著高于化疗后(P＜0.01),而化疗前后ER和PR蛋白阳性表达差异均无统计学意义(P＞0.05).化疗有效组MCM7蛋白阳性表达显著高于无效组(P＜0.01),而Ki-67蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);化疗有效组ER和PR蛋白阳性表达均显著低于无效组(P＜0.05).结论.ET方案新辅助化疗对乳腺癌有较好的疗效,化疗后MCM7、Ki-67蛋白表达下降.MCM7高表达,ER和(或)PR阴性者化疗更为敏感,3者可能作为指导乳腺癌化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标.
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酵母双杂交技术筛选肺癌组织中MCM7蛋白结合蛋白
背景与目的 微小染色体维持蛋白(mini-chromosome maintenance proteins,MCM)MCM7为MCM复合体成员之一,在启动DNA复制、合成中起关键作用,但对能够与其结合的蛋白所知甚少.本研究应用酵母双杂交方法筛选肺癌组织中MCM7蛋白的结合蛋白.方法构建MCM7全长cDNA-pGBKT7质粒,与含肺癌组织cDNA文库-pACT2质粒转化酵母AH109,在涂有X-a-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长,挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后测序,进行生物信息学分析.结果 筛选出11种与MCM7蛋白特异性相互作用的蛋白,其中细胞骨架蛋白5种,各种酶、激酶以及相关受体6种.结论 克隆到的基因对进一步研究MCM7蛋白的功能有一定提示作用.
