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  • 被动吸烟致神经管缺陷的形态学观察

    作者:王东;于向民

    目的探讨香烟烟雾致畸的可能机理.方法利用体视显微镜和电镜技术,观察被动吸烟对金黄地鼠神经管形成的影响及神经上皮细胞超微结构的变化.结果被动吸烟对胚胎有显著的致畸作用(x2=51.28,P<0.01),香烟烟雾导致的神经管畸形主要表现为脊柱裂、露脑等.各被动吸烟组胚胎神经上皮细胞排列不规则,细胞间隙增宽,游离面微绒毛短缩,有的微绒毛末端膨大,甚至形成若干不规则的胞质突起;细胞质中出现许多空泡,线粒体膨胀,嵴减少甚至消失,有的线粒体伸长;细胞核形态不规则,核周间隙局部扩张,可见有形物质,异染色质增多,细胞核固缩或裂解现象增多;有的死亡细胞裂解形成多个凋亡小体,在其邻近的正常细胞质内可见被吞噬的凋亡小体.结论被动吸烟能引起金黄地鼠胚胎神经系统发育异常,诱导神经上皮及其周围间充质细胞变性、死亡,使细胞数量减少,从而导致了神经管的形成和分化异常,使神经管延迟闭合或不闭合.

  • 几种高脂血症动物模型的比较

    作者:高莹;李可基;唐世英;肖颖

    为建立更合理而实用的高脂血症动物模型,比较了SD大鼠、Wistar大鼠和金黄地鼠的血清和肝脏脂质对高脂饲料的反应.大鼠高脂饲料配方为1%胆固醇、10%猪油、10%蛋黄粉和79%基础饲料;金黄地鼠高脂饲料配方为0.2%胆固醇、15%猪油和85%基础饲料.结果显示,经过高脂饲料喂养5周后,SD大鼠、Wistar大鼠和金黄地鼠高脂组血清甘油三酯水平分别比对照组高194.4%、86.2%和84.3%(P<0.05),血清总胆固醇水平分别比对照组高76.8%、48.3%和134.8%(P<0.05).提示金黄地鼠是一种良好的高胆固醇血症模型,而SD大鼠可能是一种较好的高甘油三酯血症模型.

  • 胎盘组织中 CYP1 A1 表达在孕期香烟烟雾暴露致胎鼠宫内发育迟缓中的作用

    作者:蔡恒;李智文;滕佩宏;贾童童;王越;张永镇;于向民;王东

    目的 探讨CYP1A1在孕期暴露香烟烟雾所致宫内发育迟缓( IUGR)胎鼠胎盘组织中的表达及其意义. 方法 在自制熏烟箱中制备IUGR模型,比较模型组和正常对照组胎盘中的药物代谢酶CYP1A1及细胞凋亡相关蛋白的表达量差异. 结果 IUGR模型组胎鼠的平均体重、身长、胎盘重量均明显低于对照组(P均<0.001).免疫组织化学结果显示,与对照组相比,模型组胎盘中CYP1A1表达量升高,Bcl2蛋白在胎盘中的表达降低(P<0.001),BAX蛋白表达增高(P<0.001). 结论 孕期吸烟可致金黄地鼠胎盘药物代谢酶表达升高,提示香烟烟雾中有害物质可以通过母体到达胎盘,引起胎盘细胞的死亡,影响胎盘的发育,终导致IUGR.

  • 流行性出血热疫苗免疫不同敏感动物中和抗体比较

    作者:王棋;回良杰;王晓宏;韩亮;黄永成

    中和抗体是反映疫苗效果的有效重要指标之一。因此,选择合适的敏感动物作为实验动物成为疫苗免疫效果检定方法中很重要的内容。目前各个国家用于出血热试验选用动物比较混乱,世界卫生组织也没有统一规定,即没有建立动物模型[1]。研究出血热早是韩国,目前采用豚鼠作为检测中和抗体的实验动物[2]。中国药品生物制品检定所(检定所)暂规定用白色家兔作为实验动物。本实验的目的是在现有实验动物中筛选出一个对出血热敏感,个体差异小,能产生高滴度抗体的标准动物,为以后建立出血热动物模型作些先期工作。  一、材料与方法  1.疫苗:选用3批合格疫苗(批号94-6-3、94-5-1、94-7-3)。  2.动物:金黄地鼠60只,5~6周龄;小白鼠60只,15~20 g;白色家兔12只,2~3 kg;豚鼠12只,250 g。实验动物均由卫生部长春生物制品研究所动物室提供。

  • Ficoll及Percoll分离、纯化金黄地鼠肝细胞方法比较研究

    作者:韩曼;朱晓云;刘喜明

    目的 建立经济有效的原代地鼠肝细胞分离纯化方法,并比较Ficoll及Percoll两种分离液分离出的肝细胞纯度及活性的差异.方法 对传统的两步原位胶原酶灌流法进行简化,行肝脏原位灌流,离体后Ⅳ胶原酶进行消化;采用Ficoll及Percoll两种细胞分离液进行分离、纯化;纯化后于37 ℃ 5% CO2培养箱内孵育培养,0.4%台盼蓝拒染实验检测肝细胞的存活率.结果 Ficoll及Percoll分离的地鼠肝细胞总数分别为(1.46±0.91)cells·g-1肝组织、(1.79±0.89)cells·g-1肝组织,即时分离的肝细胞活力和纯度相近,都大于95%,但后期二者差异较大,Percoll分离得的肝细胞活率较高,且细胞活性下降较缓慢.结论 通过简化的门静脉原位灌流法和低浓度胶原酶离体消化,Percoll或Ficoll分离液纯化,即时分离的肝细胞可保持良好的功能和活力,二者无显著差别,但从细胞培养的要求出发,Percoll优于Ficoll分离液.

  • 基于"肾应冬"探讨下丘脑-垂体-肾上腺轴褪黑素水平的四季变化

    作者:孟依临;毕晋;蔡榕琪;刘淼;刘晓燕;郭霞珍

    目的:通过观察对比正常组与模型组(摘除松果体)金黄地鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(Hypothalamus-Pituitary-Adrenal Axis,HPA轴)中褪黑素(Melatonin,MT)含量的季节性变化,进一步探讨"肾应冬,主封藏"的生物学机制,中医肾藏象的本质内涵及松果体在季节变化过程中的作用.方法:分别于春分、夏至、秋分、冬至日取出正常组与模型组金黄地鼠下丘脑、垂体、肾上腺组织,用酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法检测各组织中MT含量.结果:金黄地鼠正常组下丘脑与垂体组织中MT含量均有季节性变化;金黄地鼠正常组的肾上腺组织的MT水平存在着明显的四季差异,而松果腺摘除时则导致肾上腺组织原有的MT季节节律消失.其中正常组下丘脑MT含量变化表达趋势为冬>夏>秋>春,模型组下丘脑MT含量变化表达趋势夏>秋>冬>春.正常组垂体中MT含量变化表现趋势为夏>春>冬>秋,模型组垂体中MT含量变化表现为夏>秋>春>冬.正常组肾上腺中MT含量变化表现趋势为冬>夏>秋>春,模型组肾上腺中MT含量变化表现为夏>春>秋>冬.结论:下丘脑-垂体-肾上腺轴各水平的褪黑素水平存在四季节律变化;松果体对于下丘脑-垂体-肾上腺轴中肾上腺水平的褪黑素季节变化规律有直接的影响;冬季肾上腺的褪黑素水平高于其他三季,表明冬季褪黑素对肾上腺的功能影响强.

  • 基于"肾应冬"理论探讨季节变化对金黄地鼠免疫系统的影响

    作者:李雨欣;许筱颖;郭霞珍;施娜

    目的:观察松果体摘除术金黄地鼠白介素-1(Interleukin-1,IL-1)、IL-2、IL-6及IgE、IgG在四季中的水平并与正常金黄地鼠进行比较,探讨松果体对免疫系统的季节性调控机制,揭示"肾应冬"的内涵.方法:选取2个月龄金黄地鼠,分为春分、夏至、秋分、冬至4个节气组,每个节气组内又分实验组(行松果体摘除术)、对照组.动物饲养至春分、夏至、秋分、冬至4个时间点当日,于晚9:00后腹主动脉取血,用酶联免疫吸附试验测定相关免疫指标.结果:IL-2、IL-6、IgE、IgG的水平变化具有明显的季节节律性;IL-1、IL-2、IL-6、IgG水平在冬季达到低;实验组和对照组间比较,显示松果体能调控IL-2、IgE、IgG的分泌,IL-2在被摘除松果体后失去了季节变化的规律性.结论:血清白介素和免疫球蛋白水平基本存在春夏高、秋冬低的季节性变化规律,这与中医"冬季封藏"的理论不谋而合,且松果体在此过程中对免疫系统发挥部分调节作用.

  • 滋阴清热方对金黄地鼠血清性激素及雄激素受体mRNA表达的影响

    作者:徐萍;陈力

    目的:探讨滋阴清热方对金黄地鼠血清性激素及雄激素受体表达的影响.方法:选用成年雄性金黄地鼠侧腹皮脂腺斑作为动物模型,随机分为4组,分别予生理盐水、滋阴清热方高剂量(18 g·kg-1)、滋阴清热方低剂量(9 g·kg-1)、安体舒通(10 mg·kg-1)灌胃给药,每天1次.4周后,采用ELISA法检测各组血清睾酮(T)、雌二醇(T2)的水平,实时荧光定量PCR法检测各组皮脂腺斑处雄激素受体(AR)mRNA的表达水平.结果:滋阴清热方高、低剂量组与空白组比较,能降低血清T水平,但无显著性差异;高剂量组血清E2水平升高,与空白组比较有显著性差异(P<0.05).4组皮脂腺斑处AR mRNA的表达水平有显著性差异(P<0.05),清热滋阴方高剂量组与空白组比较有显著性差异(P<0.05).结论:滋阴清热方可能是通过改善金黄地鼠血清雌二醇水平,并抑制局部雄激素受体mRNA的表达,而影响皮脂腺的增生.

  • 从冬夏季节下丘脑-垂体-肾上腺轴激素水平的变化探讨"肾应冬"的生理机制

    作者:韩俊阁;杨宗纯;张娜;刘晓燕;郭霞珍

    目的:通过观察冬夏季节下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)及褪黑素(MT)及其受体(MR)的变化,探讨"肾通于冬气"的生理机制.方法:分别于夏至、冬至日取出金黄地鼠血浆及下丘脑、垂体、肾上腺组织,用ELISA检测其中MT、MR、CRH、ACTH、CORT含量.结果:在血浆、下丘脑、肾上腺组织中,MT含量呈现冬高夏低的改变(P<0.01,P<0.05);在下丘脑、肾上腺组织中,MR含量冬高夏低(P<0.01)CRH/CORT无论在血浆还是下丘脑/肾上腺组织中的含量均冬高夏低;ACTH在血浆中冬高夏低(P<0.01);在垂体组织中,其MT、MR及ACTH的含量呈现明显夏高冬低的规律(P<0.01).结论:HPA轴的机能冬季显著高于夏季,从生物学角度探讨了"肾通于冬气"的可能机制.

  • 红景天苷对非酒精性脂肪性肝炎的降脂保肝作用研究

    作者:陈少东;周海虹;赵正晓;柳进;张玉梅;李国辉

    目的:探讨中药红景天的主要成分红景天苷对高脂饮食诱导的金黄地鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的干预作用.方法:18只雄性金黄地鼠随机分成正常组、模型组和红景天苷组,除正常组外,其余两组均给予高脂饮食喂养6周以复制NASH模型;造模第3周起,红景天苷组给予红景天苷药液灌胃4周.6周后处死地鼠,收集标本,检测肝组织甘油三酯(TG)含量,血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,对肝组织进行HE染色.结果:红景天苷能明显降低肝组织TG含量及血清AST活性,改善肝组织脂肪变性的病理状态.结论:红景天苷具有显著的抗NASH病理损伤的药理效应.

  • 栀子苷对非酒精性脂肪性肝病金黄地鼠脂质代谢及炎症损伤的影响

    作者:李国辉;周海虹;赵正晓;张玉梅;柳进;陈少东

    目的:观察栀子苷对高脂饮食诱导的金黄地鼠非酒精性脂肪性肝病模型脂质代谢、肝组织病理变化及炎症损伤的影响,并与栀子进行比较,以明确栀子抗脂肪肝作用的效应成分.方法:24只雄性金黄地鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、栀子组和栀子苷组.实验后观察肝组织病理学变化,并检测肝组织TG含量、血清TG、CHO含量及ALT、AST活性.结果:与模型组比较,栀子组、栀子苷组肝TG含量、血清TG、CHO含量及ALT、AST活性均显著降低,且栀子苷对ALT、AST活性的降低作用优于栀子.结论:栀子苷与栀子对高脂饮食诱导的地鼠脂肪肝均有显著干预作用,且栀子苷抗炎症损伤作用优于栀子.

  • 肺康方对肺气肿并肺动脉高压金黄地鼠右心功能的影响

    作者:张立山;李澎涛;武维屏;戴雁彦;周晓梅;严京

    目的探讨肺康方对肺气肿肺动脉高压金黄地鼠右心功能的影响.方法将40只金黄地鼠随机分为正常组、模型组、中药组和西药组,采用烟熏结合气管内注入弹性蛋白酶的方法造模,中药组和西药组于造模后分别给予肺康煎剂和心痛定,30d后测量各组的肺动脉压、IC-R和ID-R.结果中药组和西药组肺动脉压比模型组显著降低,模型组和西药组IC-R和ID-R比正常组明显降低,中药组IC-R和ID-R比模型组增高.结论肺康方可以改善右心功能,降低肺动脉高压.

  • 从金黄地鼠性腺功能的四季变化探索肾通于冬气的内涵

    作者:罗卫芳;郭树仁;张家俊;程士德

    中医学认为,“肾”在周身脏腑中处于极为重要的地位,被称为“先天之本”,现代研究表明中医学肾的功能与人体内分泌、免疫、生殖等功能关系密切(1~3),因此得到当代医学研究者的广泛重视,并开展了大量的基础实验与临床研究(4)。

  • 发热伴血小板减少综合征病毒感染Balb/C小鼠和金黄地鼠的免疫病理反应

    作者:金聪;韩颖;李川;顾雯;蒋虹;陈霆;朱华;魏强;仇佩虹

    发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome irus,SFTSV)是新发传染病发热伴血小板减少综合征的致病病原,为布尼亚病毒科白蛉病毒属的一种新型病毒.为了分析SFTSV感染Balb/C小鼠和金黄地鼠引起的免疫病理反应,本研究采用两个攻毒剂量组分为高剂量组(105 TCID50),低剂量组(103TCID50),以及溶剂对照组,并采用经静脉、肌肉、脑、和腹腔4种途径分别进行攻毒.在攻毒后不同时间点取血样,应用全自动血细胞计数仪检测血细胞亚群,Real-time PCR实验检测血液中病毒RNA拷贝数,悬浮芯片实验检测血浆中IgG和IgM抗体水平.在攻毒后第14d处死动物,收集心、肝、脾、肺、肾、小肠、肌肉和脑8种组织器官进行HE染色,观察组织病理改变.研究结果显示,SFTSV可感染Balb/C小鼠和金黄地鼠,在攻毒后第7d检测到病毒特异性IgM和IgG,其中IgM在第7d达到峰值后下降,IgG在攻毒后第14d达到峰值.组织病理学分析显示病毒感染Balb/C小鼠和金黄地鼠的肝组织和肾组织出现明显病变.本研究揭示SFTSV可以感染不同品系的啮齿类动物,引起相似的免疫抗体反应和组织病理变化.

  • 霍乱毒素或联合外周神经对再生视网膜节细胞c-Jun表达的研究

    作者:李飞;黄锦桃;李海标

    目的:观察成年金黄地鼠视神经近端微挤压断(MC)后,再生视网膜节细胞(RGCs)c-Jun的表达与再生的关系.方法:实验动物随机分为CTx组、SN+CTx组,每组5只.近端微挤压断视神经后,玻璃体内注射霍乱毒素(CTx)或联合植入小段坐骨神经分支(SN).术后4W,用荧光金(FG)逆行标记和c-Jun免疫荧光组织化学双标法观察再生的RGCs和c-Jun的表达.结果:再生RGCs胞核内有c-Jun蛋白表达,CTx组表达c-Jun的再生RGCs为(317±61)个,约占其再生总数的89.9%;SN+CTx组c-Jun阳性再生的RGCs为(418±102)个,占再生总数的96.8%,两组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:c-Jun表达可能与RGCs的再生有密切关系,霍乱毒素或联合外周神经可显著提高再生RGCs的c-Jun表达.

  • 酒精致金黄地鼠神经管和眼畸形的实验研究

    作者:李玲;王文青

    目的观察酒精致金黄地鼠胚胎神经管和眼畸形发生过程的形态学改变,并定量观察致畸过程中的细胞凋亡. 方法实验组孕金黄地鼠分别用腹腔注射酒精致畸处理后4、8、16、24、48和72?h剖腹取胚或胎,在光镜、体视显微镜和扫描电镜下观察胚胎神经管和眼的畸形发生中的形态变化;借助TUNEL法和透射电镜,定量研究神经管和眼畸形发生过程中的细胞凋亡. 结果 1.酒精可使金黄地鼠神经管和视杯的发生明显延迟.2.酒精处理后8?h,神经上皮细胞凋亡显著增加,尤以前脑和神经嵴处明显;16?h和24?h,凋亡仍大量存在,主要位于神经嵴和延迟发生的视沟部位;48?h后神经上皮细胞凋亡逐渐减少. 结论酒精可使金黄地鼠神经管和视杯的发生明显延迟,神经上皮和视泡、视杯上皮细胞过度凋亡,这可能是酒精致神经管和眼畸形的机理之一.

  • 正常和视神经损伤后Nogo(N-18)在金黄地鼠视网膜的表达

    作者:雷季良;杨磊;赵君朋;刘斯;魏泽峰;于恩华

    目的观察Nogo-A蛋白在金黄地鼠视神经受损后不同时间点视网膜各层的表达,探讨Nogo-A蛋白的分布. 方法采用眶内眼球后2mm视神经切断术,动物分别存活3d、5d、7d后,取眼球固定、冰冻后做水平切片,分别进行Nogo(N-18)抗体的免疫组织化学染色,显微镜观察Nogo-A蛋白的表达. 结果在视网膜各层均有不同程度的Nogo-A蛋白表达;存活3d、5d、7d后在节细胞层表达强烈,其中3d的反应明显;随着存活时间的延长,Nogo-A蛋白表达的节细胞层细胞数量逐渐下降. 结论 Nogo-A蛋白并非神经胶质所特有的分泌物质;视网膜Nogo-A蛋白表达的分布范围和表达程度与视神经受损后的时间相关.

  • CPT-环磷酸腺苷对视网膜节细胞再生的影响

    作者:朱永红;李海标

    目的探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射CPT-环磷酸腺苷对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响. 方法 20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经为再生对照组(attached graft,AG);ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射CPT-cAMP和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数. 结果 1.对照组(AG),视网膜再生的节细胞数为:1428±284个;2.外周神经组(AG+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为2220±415个;3.CPT-cAMP组(AG+cAMP):每个视网膜再生的节细胞平均数为2175±364个;4.外周神经和CPT-cAMP联合组(AG+cAMP+SN):每个视网膜再生的节细胞平均数为4255±820个;其中,AG+SN、AG+CPT组同AG组相比存在差异显著性(P<0.01);AG+CPT+SN组同AG、AG+CPT和AG+SN组相比均有差异显著性(P<0.01). 结论研究结果提示玻璃体内注射CPT+cAMP或联合应用外周神经和CPT-cAMP可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.

  • 信号转导子与转录激活子3蛋白在金黄地鼠视网膜生后早期发育过程中的表达

    作者:张艳;于恩华;刘猛

    目的观察信号转导子与转录激活子3(STAT3)蛋白在金黄地鼠视网膜生后早期发育过程中的表达. 方法 STAT3蛋白免疫细胞化学染色和Western免疫印迹方法结果生后发育早期整个视网膜神经层均有STAT3阳性产物分布,以视网膜节细胞层(GCL)、内网层(IPL)和成神经细胞层(NBL)的内层更明显,随着发育进程,其阳性产物逐渐局限于视网膜节细胞的胞浆和胞核;蛋白半定量结果显示,生后1周内STAT3蛋白表达水平较高,之后逐渐降低,成年后低. 结论 STAT3蛋白的表达及变化可能与视网膜生后早期发育密切相关.

  • GDNF、GFAP和NGFRp75在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的免疫组织化学研究

    作者:杨磊;周长满;买鸿宴;于恩华

    目的研究GDNF在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的表达,探索成鞘细胞在中枢神经再生中的作用. 方法用免疫组织化学ABC法,显示GDNF在成年大鼠和金黄地鼠嗅球成鞘细胞的表达和分布,同时用NGFRp75和GFAP染色作为阳性对照. 结果在成年大鼠和金黄地鼠嗅球的纤维层和小球层内均可见深棕色的GDNF免疫组织化学反应的成鞘细胞.在小球层与纤维层分界处和小球层与分子层分界处及嗅小球之间密集分布,在嗅小球之内较稀疏.同时在同一嗅球组织的另两组切片的相同部位,分别出现GFAP和NGFRp75免疫反应性细胞,间接说明GDNF免疫反应的结构是嗅球成鞘细胞. 结论嗅球成鞘细胞含有胶质细胞源性神经营养因子.

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