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多氯联苯对小鼠肝微粒体CYP1A1酶活力及其mRNA表达的影响
多氯联苯是一种含氯有机化合物,因为具有良好的物理化学稳定性,自发明并实现工业生产以来被广泛用于各生产领域.但由于其极高的亲脂性和高生物富集性,多氯联苯对生物体诸如免疫功能、激素代谢和生殖遗传等各个方面有重要影响[1].细胞色素CYP450是机体中混合功能氧化酶系中重要的一族氧化酶,主要分布在肝脏,参与了包括药物、致癌物及其他环境化合物在内的许多外源性物质的生物转化[2-3].
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某市嘉陵江水中提取物对大鼠肝细胞AHR信号途径的诱导
目的 研究某市主城区嘉陵江水中有机污染物对大鼠肝细胞细胞色素P450 1A1(cytochrome P450 1A1,CYP1A1)基因表达和7-乙氧基-3-异吩嗯唑酮·脱乙基酶(7-ethoxyresorufin-O-dee山ylase,EROD)活力的诱导,比较不同剂量的有机提取物诱导大鼠肝细胞CYP1A1基因表达量和EROD酶活力的变化.方法 将大鼠分为2、12和72 L/(kg体重)3个染毒组及1个玉米油溶剂对照组和1个空白对照组,每组20只动物,雌雄各半,灌胃染毒13周.染毒结束,提取大鼠肝细胞总RNA进行CYP1A1基因的RT-PCR扩增,将肝组织匀浆后测定其EROD酶活力.结果 各染毒剂量组CYP1A1基因均有表达,空白对照和溶剂对照组CYP1A1基因不表达;中剂量组与高剂量组CYP1A1的相对表达量与低计量组相比,增加非常显著(P＜0.01),各染毒组大鼠肝组织均可检出EROD酶活力,EROD酶活力随染毒剂量的增加而增加.结论 嘉陵江水中有机污染物可诱导大鼠肝细胞芳烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)途径.
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三氯乙烯对3种细胞色素P450酶基因表达的影响
目的探讨三氯乙烯( Trichloroethylene, TCE )对人体淋巴细胞瘤细胞株(MCL-5)中3种细胞色素P450酶基因(CYP1A1、CYP2E1、CYP3A4)表达的影响,并研究剂量反应关系和时间反应关系.方法用常规的细胞培养方法,0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L TCE处理细胞12、24、48、72 h.利用提纯RNA和合成cDNA的药盒,合成cDNA,然后逆转录聚合酶反应(RT-PCR)表达3种CYP450基因,以β-Actin作为内对照,分析不同处理剂量和时间时基因表达的强度.结果在MCL-5细胞株中都有基本的表达,CYP1A1表达在用1.0、1.5、2.0 mmol/LTCE处理48 h后有被上调的趋势,而且上调趋势随处理时间延长而加强;CYP2E1、CYP3A4表达不受TCE处理时间长短的影响.3种CYP450酶基因的表达受TCE剂量的影响,3随0.5 mmol/L,1.0、1.5、2.0 mmol/L剂量的增加有上调的趋势.结论 TCE对CYP450酶系统中的CYP2E1、CYP1A1、CYP3A4基因有明显的诱导作用,这些基因被诱导后的结果,可能会导致相对应酶活性的增加,同时加强对TCE的代谢,使TCE的代谢产物增加.
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母亲和新生儿GSTM1、GSTT1和细胞色素P4501A1基因多态性与早产易感性关系
目的 探讨母亲和新生儿GSTM1、GSTT1基因以及细胞色素P4501A1基因多态性对早产的影响.方法 采用病例-对照调查方法,应用多重PCR和限制性内切酶PCR(RFLP-PCR)技术对早产母亲和对照母亲以及早产新生儿和对照新生儿GSTM1、GSTT1基因和CYP1A1基因MSPI位点多态性分别进行检测.结果 GSTM1、GSTT1基因和CYP1A1基因MSPI位点多态性在早产母亲和对照母亲组中没有显著性差异(P＞0.05);以上基因在早产新生儿和对照新生儿组中也没有显著性差异(P＞O.05).GSTM1与GSTT1联合基因型在母亲和新生儿的病例与对照组中也没有显著性差异(P＞0.05);GSTT1缺失型和CYP1A1变异型联合基因在早产母亲组与对照母亲组中有显著性差异(x2=4.683,P＜0.05,OR=2.440).结论 携带GSTT1缺失型基因以及CYP1A1变异型基因的母亲,其发生早产的危险性增大.
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P4501A1基因Thr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体的构建
目的 构建P4501A1基因cDNA Thr461→Asn461及Ile462→Val462突变载体,为进一步研究CYP1A1的功能和致癌机制奠定基础.方法 根据人CYP1A1基因(GeneBank NM-000499)cDNA序列设计通用引物Pm3/Pm4和突变引物Pt15/Pt16;Pt17/Pt18,内含酶切位点和突变位点,先用Pm3/Pt16,Pm3/Pt18组成两对引物,以pGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第一轮扩增,获得上游1397bp片断,再用Pt15/Pm4,Pt17/Pm4组成两对引物以10ng pGEM-T-CYP1A1质粒为模板进行第二轮扩增,得到下游177bp片断.然后用Pm3/Pm4做引物以第一、第二轮扩增产物为模板进行第三轮扩增,获得的1.5kb扩增产物用1%琼脂糖凝胶分离并回收纯化,将纯化的PCR产物与pMD-T载体连接后转化大肠埃希菌DHα5感受态细胞,挑单克隆扩增、质粒抽提后进行酶切和测序鉴定.结果 三轮PCR扩增得到的1.5kb片断,经内切酶BamHⅠ和SalⅠ消化和T7p和SP6通用引物进行双向测序,证实克隆的目的片段与GeneBank中人CYP1A1基因cDNA的序列同源性为99.9%,且包含两个设计的突变位点Asn461、Val462.结论 本实验成功地构建了含突变位点Asn461、Val462的CYP1A1基因cDNA的片断.
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胎盘组织中 CYP1 A1 表达在孕期香烟烟雾暴露致胎鼠宫内发育迟缓中的作用
目的 探讨CYP1A1在孕期暴露香烟烟雾所致宫内发育迟缓( IUGR)胎鼠胎盘组织中的表达及其意义. 方法 在自制熏烟箱中制备IUGR模型,比较模型组和正常对照组胎盘中的药物代谢酶CYP1A1及细胞凋亡相关蛋白的表达量差异. 结果 IUGR模型组胎鼠的平均体重、身长、胎盘重量均明显低于对照组(P均＜0.001).免疫组织化学结果显示,与对照组相比,模型组胎盘中CYP1A1表达量升高,Bcl2蛋白在胎盘中的表达降低(P＜0.001),BAX蛋白表达增高(P＜0.001). 结论 孕期吸烟可致金黄地鼠胎盘药物代谢酶表达升高,提示香烟烟雾中有害物质可以通过母体到达胎盘,引起胎盘细胞的死亡,影响胎盘的发育,终导致IUGR.
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细胞色素P4501A1基因多态性与食管癌易感性关系的Meta分析
目的 探讨细胞色素P4501A1(CYP1A1)MspI和Ile/Val位点基因多态性与食管癌发生的关系.方法 采用Meta分析方法,对国内外1997-2008年采用病例对照方法研究CYP1A1MspI和Ile/Val基因多态性与食管癌发生关系的16篇(MspI 8篇,Ile/Val 14篇)文献,采用显性模型(即突变基因型与野生型比较)进行综合定量分析,然后按病理分型(鳞癌/腺癌)分亚组进行分析.结果 综合分析CYP1A1 MspI突变基因型(TC+CC)与食管癌发生无统计学关联(OR=1.17,95%CI:0.82～1.66),亚组分析亦未发现CYP1A1 MspI突变基因型与食管鳞癌(OR=1.17,95%CI:0.82～1.69)和食管腺癌(OR=1.39,95%CI:0.67～2.09)的统计学关联;携带CYP1A1突变基因型(Ile/Val+Val/Val)的个体发生食管癌的危险性是野生型的1.39倍(OR=1.39,95%CI:1.07～1.80);亚组分析显示突变基因型与食管鳞癌发生的易感性相关但与食管腺癌无关联,OR值分别为1.43(95%CI:1.07～1.91)和1.20(95%CI:0.62～2.30).结论 CYP1A1 Ile/Val位点突变基因型可增加食管鳞癌发生的危险性,CYP1A1 MspI位点基因多态性与食管癌无关联.
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浅谈蛋白免疫印迹技术方法的改进
目的:探索蛋白免疫印迹技术关键步骤的改良方法.方法:以小鼠为研究对象,采用改良的蛋白免疫技术分析小鼠肝脏CYP1A1的表达水平.结果:不仅缩短实验时间,而且获得的目标条带清晰,非特异性的本底显色浅.结论:改良的蛋白免疫印迹技术一定程度上能够很好的分离目标蛋白,降低本底,获得比较满意的实验结果,有利于对蛋白质的进一步分析研究.
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CYP1A1和CYP2D6基因多态性对白血病发生的影响
目的 分析细胞色素P450 CYP1A1和CYP2D6的多态性基因型在湖南地区白血病患者和健康人群中的分布及其对白血病发生的影响.方法 采用PCR及PCR-RFLP技术分析多态性基因型频率.结果 CYP1A1和CYP2D6基因的野生型、杂合突变型及纯合突变型的分布频率在急性淋巴细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病患者组与健康对照组之间无显著性差异;携带一个突变等位基因型的个体患白血病的风险与相应野生型携带者比较均无显著性差异;急性非淋巴细胞性白血病患者组的CYP1A1杂合突变型与CYP2D6杂合突变型的联合基因型频率高于健康对照组.结论 单独的CYP1A1或CYP2D6基因的多态性变异与白血病易感性不相关;CYP1A1杂合突变与CYP2D6杂合突变的联合基因型增加患急性非淋巴细胞性白血病的风险.
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苯并(a)芘对神经细胞的毒性及细胞色素P4501A1的诱导表达
目的 探讨苯并(a)芘[B(a)P]对神经细胞毒性、细胞凋亡与细胞色素P4501Al( CYP1A1)诱导表达的关系.方法 选用新生1 ～3d的SD大鼠,分离大脑皮质,进行神经元培养,在细胞培养第5天左右,选取生长良好的同批次神经细胞,以苯并(a)芘分别对神经细胞染毒,使苯并(a)芘终浓度分别为0μmoL/L、10μmol/L、20μmol/L、40μ.mol/L.继续培养40h,应用cck8试剂盒检测神经细胞活力、Annexin V和PI双染法进行细胞凋亡的检测,应用RT-PCR法检测神经细胞CYP1A1mRNA的表达,免疫组织化学SABC法检测神经元CYP1A1蛋白的表达.结果 随着苯并[a]芘浓度的增加,神经细胞活力降低,早期凋亡率逐渐增高,细胞活力中高剂量组与对照组比较差异均有统计学意义,早期凋亡率仅高剂量组与对照组比较差异有统计学意义,趋势检验表明,细胞活力降低、凋亡率增高具有剂量依赖性.而且随B(a)P剂量的增高,CYP1A1mRNA及蛋白表达增多,有剂量-反应关系,CYP1A1基因和蛋白表达与神经细胞凋亡率的相关分析表明,神经细胞凋亡率与CYP1A1 mRNA表达呈正相关(r=0.831,P＜0.01)；与CYP1A1蛋白表达呈正相关(r=0.780,P＜0.01).结论 苯并[a]芘可致神经细胞凋亡,神经细胞CYP1A1诱导表达是神经细胞损伤的关键因素.
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TCDD和B[a]P诱导大鼠肺癌变过程CYPIA1表达变化的研究
目的:利用四氧二苯二氧杂环己二烯(TCDD,二噁英)和苯并(a)芘(B[a]P)致大鼠肺癌的动物模型,研究肺癌变过程中CYPIA1基因mRNA和蛋白水平的表达.方法:应用RT-PCR方法及荧光免疫法检测大鼠正常肺组织、癌前病变组织和肺癌组织中CYPIA1基因mRNA的表达及CYPIA1基因在肺组织蛋白水平的表达,评价CYPIA1基因在肺癌变过程的作用.结果:CYPIA1 mRNA/β-actin比值在TCDD、TCDD+ B[a]P、B[a]P致癌组及对照组分别为0.956 4±0.328 2、1.153 3±0.432 6、0.252 4±0.103 2和0.093 6±0.032 7；在大鼠正常肺组织、正常增生、癌前病变和肺癌组织中分别为0.105±0.098、0.235±0.108、1.127±0.295和1.564±0.421.结果表明,CYPIA1 mRNA在TCDD+B[a]P、TCDD致癌组有较强表达,在肺癌前病变和肺癌组织中有较强表达；CYP1A1蛋白表达灰度值在TCDD、TCDD+ B[a]P、B[a]P致癌组及对照组分别为41.76±4.82、46.28±4.32、31.02±3.16和18.75±2.27,在大鼠肺正常组织、正常增生、癌前病变和肺癌组织中分别为19.77±2.74、26.71±3.32、43.95±3.98和47.38±4.96.结果表明,CYP1A1蛋白在TCDD+ B[a]P和TCDD致癌组有较强表达,在肺癌前病变和肺癌组织中有较强表达.结论:TCDD和B[a]P对CYPIA1有较好的诱导作用,CYPIA1高表达与肺癌的发生有着密切的关系,其在肺癌前病变和肺癌组织中的高表达,可能是肺癌前病变、肺癌发生的一个标志.
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结直肠癌易感性与CYP1A1基因多态性关系的Meta分析
目的 探讨CYP1A12454A＞G多态性与结直肠癌易感性的关系.方法 通过检索PubMcd、Embase和Web of Science databases数据库,对有关CYP1A1基因多态性与结直肠癌易感性关系的英文文献,用STATA 10.0软件进行Meta分析.结果 共纳入文献15篇,包括6768例患者和7973个对照,CYP1A1 2454A＞G与结直肠癌易感性显著相关(G比A:OR=1.19,95％CI=1.03 ～ 1.37;GG比AA:OR=1.40,95％CI=1.12 ～ 1.75;GG比AG+AA:OR=1.43,95％CI=1.15～1.78).结论 CYP1A12454A＞G基因多态可能与结直肠癌易感性有关.
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水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备及评价
酶固定化过程中,固定化酶的方法及其载体的选择是酶固定化过程的关键因素,适宜的固定化法和良好的载体微环境对酶活保持率提高和稳定性增强尤其重要.在本研究中,利用96孔微分析板评价了用于高通量筛选的水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备方法及其对酶活性(保存时间,精度和重现性)的影响.胰蛋白酶(trypsin)成功地包埋在单凝胶和双网络凝胶中并且固定在磁性粒子上,然而,包埋在单凝胶和双网络凝胶,或固定在磁性粒子上的胃蛋白酶无法与底物反应.在对酶的适应性方面,与双网络凝胶比较,单凝胶和磁性粒子固定化法更加优越,适用于多种酶(如:胰蛋白酶,葡糖苷酸酶,CYP1A1)的固定.然而,我们也发现浸置后,以单凝胶包埋的固定酶有较多的损失.双网络凝胶包埋法只限于包埋胰蛋白酶,无法用于包埋其它酶,例如葡糖苷酸酶、CYP1A1和胃蛋白酶,因为双网络凝胶包埋法会由于丙烯酰胺和过硫酸胺的存在而使酶失去活性.在三种酶固定方法中,磁性粒子固定酶的方法能够好地保留酶活性.另外,磁性粒子固定酶的稳定性比其他两种方法好,存放一周后胰蛋白酶和葡糖苷酸酶的活性没有任何下降.其次,磁性粒子固定法的重复利用重现性也良好.此外,尽管双网络凝胶法包埋酶的种类有限,但是我们认为通过改变丙烯酰胺等载体的选择和设计,改进载体微环境,可以使包埋酶的效率得到提高.
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中国人细胞色素P4501A1基因外显子7的多态性分析
为探讨中国人与吸烟致癌力有关的细胞色素P4501A1(cytochme P4501A1,CYP1A1)基因催化部位(外显子7)的多态性分布情况,分析了458例中国人CYP1A1基因外显子7的多态性分布频率.结果显示这种多态性在男女之间没有显著差异,458例中国人该基因不同类型的比例分别为Ile/Ile 61.6%、Ile/Val 26.4%、Val/Val 12.0%,其中Val/Val基因型所占的比例显著高于日本人、白种人或非洲-美国人.
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代谢酶基因多态性与胃癌遗传易感性的研究进展
胃癌的发生是一个遗传和环境等多因素共同作用的过程,人体对内外源性致癌物的代谢能力影响个体对胃癌的易感性.影响胃癌遗传易感性的代谢酶基因主要有:与Ⅰ相代谢有关的CYP1A1、CYP2E1基因和与Ⅱ相代谢有关的GSTM1、GSTT1基因等.代谢酶基因多态性在胃癌发病中的重要作用已被越来越多的研究所证实.
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膀胱癌患者CYP1A1基因MSPI多态性的相关分析
目的 探讨细胞色素CYP1A1基因MSPI多态性与膀胱癌遗传易感性的关系.方法 应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,检测44例膀胱癌患者(病例组)和85例同期住院非膀胱癌患者(对照组),检测CYP1A1基因MSPI多态性位点的3种基因型及等位基因的分布频率.结果 在病例组CYP1A1基因MSPI位点基因型分布频率为:TT(54.5%)、TC(36.4%)、CC(9.1%),等位基因分布频率为T(72.7%)、C(27.3%);在对照组CYP1A1基因MSPI位点基因型的分布频率为TT(61.2%)、TC(31.2%)、CC(7.1%),等位基因分布频率为T(77.1%)、C(22.9%).各个基因型在两组中所占的比例差异无统计学意义(P＞0.05);T、C等位基因频率两组比较差异亦无统计学意义(P＞0.05).结论 CYP1A1基因MSPI位点多态性的单独存在可能与本地区膀胱癌易感性无关.
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代谢酶基因多态性与慢性浅表性胃炎易感性关系的研究
目的探讨Ⅰ相代谢酶细胞色素氧化酶基因(CYP1A1)和Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽转硫酶基因(GSTM1)多态性与慢性浅表性胃炎危险性的关系.方法用聚合酶链反应(PCR-SSP)的方法测定慢性浅表性胃炎103例和健康人62例的CYP1A1和GS TM1基因型,采用非条件Logistic回归模型分析其与慢性浅表性胃炎危险性的关系. 结果在调整年龄、性别、文化程度和职业因素后,没有发现CYP1A1、GSTM1基因与慢性浅表性胃炎有关联,但CYP1A1 G/G与幽门螺杆菌感染间有明显的协同作用.
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苯及其同系物接触对细胞色素P450酶活力的影响
目的 探讨在职业接触中,苯及其同系物对细胞色素P450(CYP1A1、CYP2E1)酶活力的影响.方法 对苯接触组和对照组中工人的血液样本进行检测,得出其细胞色素P450的酶活力并进行分析.结果 苯接触组与对照组CYP1A1酶活力分别为(0.075±0.054)和(0.660±0.437)μmol//(mg·min);CYP2E1酶活力分别为(0.361±0.267)和(0.573±0.040)μmol/(mg·min).2组酶活力差异存在统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).苯接触组男性CYP1A1野生型及变异纯合型的酶活力明显低于对照组.结论 苯接触对CYP1A1野生型及变异纯合型男性酶活力存在一定的影响,对CYP2E1杂合型也存在一定的影响.
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细胞色素p450基因多态性与肝癌遗传易感性的关系
[目的]探讨CYP1A1和CYP2E1基因多态性与肝癌发生的关系.[方法]分别以PCR和PCR-RFLP 方法分析CYP1A1和CYP2E1基因多态性.[结果]病例组Val/Val基因型比例为15.9%(10/63),高于对照组的7.0%(6/86).携带Val/Val基因型比Ile/Ile基因型患肝癌的风险性高2.68倍.而CYP2E1基因各基因型构成两组未见显著性差异.[结论]CYP1A1基因中携带Val/Val基因型的个体更易发生肝癌,而CYP2E1基因各基因型与肝癌的发生无关.
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细胞色素P450基因多态及血清硒与肺癌的关系
目的探讨细胞色素P450(A)(CYP1A1)的MSPI基因多态性、血清硒水平单独作用以及联合作用与肺癌发生危险性的关系.方法采用成组病例-对照研究方法,病例58例,对照62例.用PCR-RFLP技术测定CYP1A1的MsPI多态性,用双道原子荧光光度计(GHAFS)测定血清硒水平.结果CYP1A1的MsPI基因多态性单独作用时与肺癌危险性关系无显著性差异;病例组血清硒水平显著低于对照组(P=0.001):以血清硒水平大于等于0.109 mg/L,携带CYP1A1野生型者为参照组,则血清硒水平低于0.109 mg/L且携带CYP1A1突变型或杂合型或携带野生型者OR分别为9.00(P=0.006),3.94(P=0.195),5.40(P=0.036),而血清硒水平大于等于0.109 mg/L携带突变型或携带杂合型者OR分别为1.69(P=0.500),1.13(P=0.705).结论 CYP1A1基因多态性单独作用时与肺癌发生无显著相关,血清硒水平与肺癌发生呈负相关;CYP1A1基因多态性与血清硒水平联合作用时明显提高肺癌发生的危险性,在肺癌发生中存在协同作用.
