首页 > 文献资料
-
利用logistic回归模型对艾滋病病毒抗体不确定者转归分析
目的 利用logistic回归模型,分析艾滋病病毒(HIV)抗体不确定者的初筛、免疫印迹试验(WB)条带结果和其随访阳转的关系,提高对转归的预判断.方法 收集2012-2016年HIV抗体不确定者酶标、硒标结果、WB条带结果,用受试者工作特征(ROC)曲线确定酶联伯乐试剂阈值,用logistic回归筛选WB条带的危险因素并建立预测模型.结果 79份不确定标本中,首次2种初筛结果都阳性与终随访确证阳性符合率高达96.29％.ROC曲线确定伯乐试剂的特定阈值为8,S/CO＞8提示随访转归阳性概率大.常见的带型分别为p24、gp160+p24和gp160+gp120+p24;其中p24带型随访阴性的比例高,占77.27％,gp160+p24有或无其他条带随访阳性概率较大.运用logistic回归模型筛选出gp160、p24、p17 三个有意义的因素.结论 初筛酶标、硒标检测结果双阳性,S/CO＞8,gp160+p24有或无其他条带,随访结果为阳性概率较大.联合初筛结果、带型情况可较为客观、准确地预测HIV不确定患者转归结果.
关键词： HIV抗体不确定 蛋白免疫印迹 随访 受试者工作特征曲线 Logistic回归 -
ERK1/2在唾液腺多形性腺瘤中的表达及意义
目的:研究细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)及其磷酸化状态(p-ERK1/2)在唾液腺多形性腺瘤中的表达.方法:采用蛋白免疫印迹法,检测40例多形性腺瘤、40例正常腺体组织及10例唾液腺恶性肿瘤组织中ERK1/2和p-ERK1/2的表达.结果:①ERK1/2蛋白在唾液腺正常组织(N组)、多形性腺瘤(PA组)及恶性肿瘤组(Ca组)的表达分别为0.58(s =0.66)、1.02(s=1.35)、1.17(s=0.85),N组显著低于PA组和Ca组(P＜0.05).②p-ERK1/2在N组、PA组及Ca组的表达分别为0.47(s=0.37)、0.73(s=0.66)、1.04(s=0.65),N组与PA组、Ca组之间差异显著(P＜0.05).结论:ERK1/2和p-ERK1/2在唾液腺多形性腺瘤组织及唾液腺恶性肿瘤中高表达.
-
浅谈蛋白免疫印迹技术方法的改进
目的:探索蛋白免疫印迹技术关键步骤的改良方法.方法:以小鼠为研究对象,采用改良的蛋白免疫技术分析小鼠肝脏CYP1A1的表达水平.结果:不仅缩短实验时间,而且获得的目标条带清晰,非特异性的本底显色浅.结论:改良的蛋白免疫印迹技术一定程度上能够很好的分离目标蛋白,降低本底,获得比较满意的实验结果,有利于对蛋白质的进一步分析研究.
-
结直肠癌患者血清中转甲状腺素蛋白的表达与肿瘤转移的相关性
目的 对发生远处转移结直肠癌患者血清中转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)的表达进行研究,旨在探讨TTR的表达与结直肠癌转移的关系,进一步发现TTR与结直肠肿瘤转移之间的相关性.方法 收集23例结直肠癌患者血清,标本于-80℃保存.根据是否发生远处转移进行分类,未发生远处转移样本12例,远处转移样本1 1例.采用蛋白免疫印迹的方法对TTR的表达进行半定量分析.结果 利用Image J软件计算各组光密度比值,显示在未发生远处转移的结直肠癌患者血清中,TTR的表达量高于发生远处转移的患者,TTR在两组结直肠癌患者血清中表达差异有统计学意义(P=0.017).结论 TFR在结直肠癌患者血清中的表达水平与肿瘤是否发生转移存在相关性,因此,今后对于评估结直肠癌浸润与转移的水平,TTR可以发挥肿瘤标志物的作用.
-
AG490在人膀胱癌细胞株Pumc-91中STAT3的抑制作用
目的 研究不同孵育时间以及不同浓度的STAT3特异性抑制剂AG490作用于人移形上皮膀胱癌细胞株(pumc-91)中STAT3信号通路蛋白表达的条件优化.方法 分别在0、24、36、48、60h收集细胞并提取细胞蛋白,应用Western Blot对各组中STAT3的蛋白表达水平进行半定量分析;加入100μmol/L AG490作用于pumc-91细胞,分别用0、50、100、200μmol/L的AG490处理pumc-91细胞48h后,应用Western Blot检测各组中STAT3的蛋白表达水平.结果 STAT3蛋白的表达随AG490作用时间延长而逐步降低,在作用时间为48h时,差异有统计学意义(P＜0.05).STAT3蛋白的表达明显随AG490浓度的升高而逐步下降,在浓度为200μmol/L时差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 AG490通过抑制STAT3蛋白的表达,成功抑制了STAT3信号通路的活性,而且其抑制作用具有时间和剂量的依赖性,AG490在作用浓度为200μmol/L和作用时间为48h的条件下,有效的抑制了STAT3蛋白在pumc-91细胞系中的表达.
-
SH-SY5Y细胞凋亡过程中Cpne5蛋白表达的变化
目的 探讨Cpne5蛋白在SH-SY5Y细胞凋亡中表达量的变化.方法 显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测凋亡率,鉴定A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡及血清剥夺诱导凋亡的模型;免疫印迹法检测两种凋亡过程中Cpne5蛋白表达量的变化.结果 10μmol/L A23187诱导SH-SY5Y细胞24h,细胞出现皱缩、凋亡率增加.A23187诱导0.5h,Cpne5蛋白表达量即出现明显的上升,持续至12h;在24h时Cpne5蛋白表达量回落至诱导前水平.血清剥夺72h的SH-SY5Y细胞24份,凋亡率为23.2 ±2.1％,与对照组1.1±0.1％比,差异有统计学意义(P＜0.01).免疫印迹结果表明,SH-SY5Y细胞分别经血清剥夺1h、6h、12h、24h、72h对Cpne5蛋白表达量无明显变化.结论 A23187诱导SH-SY5Y细胞凋亡早期Cpne5蛋白表达量有显著变化;提示Cpne5基因可能参与凋亡调控的钙信号通路.
-
一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡
目的 研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶(NOS)的表达与应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(SAPK/JNK)及p38MAP激酶(p38MAPK)激活的关系;探讨一氧化氮(NO)诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制.方法 采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和SAPK/JnK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达.结果 再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12 h达到高峰.1h p-SAPK/JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h.6h活化型Caspase-3开始表达,12 h达到高峰;12 h开始出现TUNEL阳性神经元,24 h达到高峰.结论 缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK/JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡.
-
冈田酸诱导大鼠海马神经元Tau 蛋白过度磷酸化
目的研究蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸(OA)对海马神经元微管相关蛋白(Tau)磷酸化的影响,建立Tau过度磷酸化的大鼠模型.方法实验随机分为正常组、二甲基亚砜(DMSO)对照组、OA模型组.模型组又分为OA 12 h、24 h、48 h和2周组.OA模型组大鼠海马CA1区背侧定向注射1.5μl溶于10%DMSO的OA,DMSO对照组注射1.5 μl 10%DMSO溶液.通过Bielschowski染色、免疫组织化学染色、蛋白免疫印迹分别观察海马神经元形态的改变和磷酸化Tau的表达水平;检测蛋白磷酸酶2A(PP2A)的活性,了解其动态变化与Tau磷酸化的关系.结果OA模型各组与正常组和DMSO对照组比较,Bielschowski染色示海马神经元胞体和突起着色较深,欠均匀,部分神经元轴丘处浓染成斑块状,但各模型组均未见到老年斑和神经元纤维缠结样改变;免疫组织化学染色示模型组海马神经元Thr231和Ser199/202磷酸化Tau蛋白表达增加,与DMSO对照组相比具有显著意义(P＜0.05);蛋白免疫印迹提示OA可引起Tau蛋白Thr231、Ser396和Ser199/202位点发生磷酸化,且不同位点磷酸化的稳定性不同,注射OA 48h后PP2A的活性明显降低,其变化与Tau蛋白Thr231和Ser396位点的磷酸化改变相一致.结论海马CA1区背侧单次注射OA可诱导建立神经元Tau蛋白过度磷酸化的大鼠模型.
-
新疆沙湾林场莱姆病血清流行病学调查
目的:调查新疆沙湾林区人群莱姆病感染情况.方法:采用间接免疫荧光抗体法(IFAT)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测沙湾林区居民血清抗莱姆病螺旋体抗体(IgG).结果:沙湾林区是莱姆病高感染区,人群血清抗莱姆病螺旋体抗体(IgG)阳性率为 16.1%(37/230),各年龄组间、哈族与汉族间的差异无显著性.结论:新疆沙湾林区人群中存在较高的莱姆病感染,可能是莱姆病的流行区之一.
-
Akt的活化对胃癌血管新生的促进作用
目的:研究Akt在胃癌及癌旁正常组织中的表达、活化状况及其与胃癌血管新生的关系.方法:收集手术切除的胃癌及相应的癌旁正常组织标本48例.采用Western blot法检测20例新鲜胃癌及癌旁组织Akt和磷酸化Akt(pAkt)蛋白的表达.以免疫组织化学法检测pAkt蛋白在48例胃癌和癌旁正常组织的表达以及血管内皮生长因子(VEGF)在48例胃癌组织中的表达水平.采用CD34抗原为血管内皮标记检测其在胃癌组织的免疫染色状况以确定肿瘤组织的微血管密度(MVD).结果:Western blot显示20例胃癌组织(20/20)和19例癌旁正常组织(19/20)中存在Akt蛋白的表达,Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平为正常组织的2.7倍(0.186±0.013 vs 0.069±0.009,P＜0.001);在20例胃癌配对组织中皆可检测到pAkt蛋白的表达,但癌组织的水平为癌旁正常组织4.1倍(0.164±0.025 vs 0.040±0.006,P＜0.01).pAkt蛋白在胃癌和癌旁正常组织中表达的阳性率分别为66.7%(32/48)和58.3%(28/48),pAkt较高表达于组织分化较差(x2=8.280,P＜0.05)和TNM分期较晚(x2=8.526,P＜0.05)的胃癌组织中.48例胃癌组织的平均MVD为40.6±15.1,在32例pAkt表达阳性胃癌组织中,MVD均值为45.5±20.3,而16例pAkt表达阴性的胃癌组织中,MVD均值为30.6±12.1,统计分析表明两组之间具有显著性差异(P＜0.01).VEGF在48例胃癌组织中的阳性表达率为52.1%(25/48),x2检验分析表明pAkt与VEGF在胃癌组织中的表达水平密切相关(x2=12.89,P=0.012).结论:Akt及pAkt蛋白特异性过表达于胃癌组织.pAkt蛋白可能促进胃癌的血管新生,上调表达VEGF可能在其中发挥重要的介导作用.
-
DMSO促进HepG2细胞感染乙型肝炎病毒后核心蛋白入核
目的:探讨DMSO诱导处理的HepG2细胞被HBV感染的作用机制.方法:将HepG2分为DMSO处理组和对照组,分别用添加或不添加2%DMSO的DMEM培养基培养4d.将HBV病毒颗粒(1000拷贝/细胞)加入培养基中于37℃感染12h.以蛋白免疫印迹,免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察HBcAg在细胞内的定位.选择性PCR检测HBV cccDNA,流式细胞分析仪检测细胞周期.结果:对照组HepG2细胞在感染HBV阳性血清后,HBcAg在细胞质内分布,核内呈阴性,至感染后2d细胞内核心蛋白消失,未检出明显的cccDNA信号.2%DMSO处理后的HepG2细胞感染后12h细胞质内HBcAg水平明显高于对照组,感染后24h HBcAg在核周浓集.在感染后24h和48h核内HBcAg明显增高,且cccDNA结果阳性.流式分析结果显示DMSO处理后处于G1/G0和G2/M期的HepG2比例升高,处于有丝分裂期的HepG2细胞内HBcAg弥散分布于全细胞.结论:HepG2细胞感染HBV后核心颗粒不能穿过核孔携带HBV DNA进入细胞核可能是其抵制HBV感染的重要原因.DMSO可促进HBV核心颗粒进入细胞核而有助于感染.
-
转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:研究转染kiss-1基因对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨其在食管癌基因治疗中的可行性和特异性.方法:在食管癌细胞系EC9706中转染kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.稳定表达该基因的细胞为转染kiss-1基因组,转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组,建立裸鼠荷瘤模型;监测肿瘤生长变化,HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、Western blot方法检测kiaa-1 mRNA和蛋白变化.结果:转染kiss-1基因组肿瘤生长受到显著抑制:HE染色显示转染kiss-1基因组及转染空质粒纽肿瘤组织内坏死均较空白对照组多;RT-PCR、Western blot结果表明转染kiss-1基因组裸鼠肿瘤组织kiss-1 mRNA和蛋白表达均显著升高,三组间比较差异具有统计学意义(F=72.685,24.807,均P<0.05).结论:转染kiss-1基因能抑制人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的形成,且能有效上调kiss-1 mRNA和蛋白的表达,可为食管癌的基因治疗提供新的靶点、开辟新的思路.
-
SHP-2在结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨SHP-2蛋白在结直肠癌中的表达情况及其与病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法和Western blot方法检测SHP-2蛋白在人结直肠癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理因素的关系.结果 结直肠癌组织中SHP-2阳性表达率为25.6％(43/168),与正常结直肠组织比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结直肠癌组织中SHP-2的蛋白水平为0.2396±0.0655,与配对正常结直肠组织比较(0.7665±0.1133),差异有统计学意义(P＜0.0001).SHP-2蛋白的低表达与分化程度和淋巴结转移有关,与性别、年龄、浸润程度、远处转移、TNM分期无关.结论 SHP-2可能在结直肠癌的发生发展过程中起抑制作用,并可能成为潜在的治疗靶点.
-
HIV抗体不确定标本的鉴别诊断研究
目的 阐明HIV抗体不确定结果的血清学特征,比较条带免疫印迹法(LIA)、HIV病毒载量(VL)和HIV-lp24抗原检测3种实验方法对HIV不确定标本的鉴别效果,明确蛋白免疫印迹法(WB)的非特异性发生率,为修订我国艾滋病检测技术规范提供依据.方法 检测56例HIV抗体不确定病例的92份标本,以随访后的HIV血清学状况为金标准,判断不同的方法在鉴别不确定结果方面的效果.结果 92份标本中有88份呈现14种不确定的条带模式,p24、gp160以及gpl60p24是常见模式,其余9种呈散在分布,31例中27例随访阴性,4例发生HIV抗体阳转,阳转率26.7%;WB的非特异反应率87.1%,LIA的非特异反应率为3.2%,病毒载量的检测未出现非特异性反应,HIV-1 P24抗原的漏检率为9.2%.结论 只有出现gp160+p24带型的病例发生HIV抗体阳转,其余带型均表现为非异性反应,LIA、VL两种方法能够有效地判断现有的HIV不确定标本的感染状况.
-
武警总医院艾滋病流行态势10年回顾性分析
目的 了解武警总医院10年艾滋病的流行状况.方法 对来自武警总医院90 289例次的人类免疫缺陷病毒抗体初筛检测数据进行回顾性分析.结果 临床就诊人群中人类免疫缺陷病毒感染率为0.039%,人类免疫缺陷病毒阳性病例以男性、14～60岁中青年、性传播为主,其中男男性传播的比例为21.1%;主要就诊原因是术前检查和自愿咨询.结论 性传播是临床就诊人群中人类免疫缺陷病毒传播的主要途径,尤其应该重视男男性传播在我国人类免疫缺陷病毒感染途径中的快速上升趋势.
关键词： 人类免疫缺陷病毒抗体 策略 蛋白免疫印迹 -
蛋白免疫印迹半定量分析在药理学研究中的影响因素
目的 探讨蛋白免疫印迹半定量分析的影响因素,为在蛋白水平上研究药物的药理作用提供指导.方法 提取丙型肝炎病毒(HCV)感染的Huh7.5细胞内总蛋白,蛋白定量后,以丙型肝炎病毒编码的核心蛋白为目的蛋白,以管家基因编码的蛋白Tubulin或Gapdh为内参对照,分析蛋白上样量、抗体浓度及孵育时间、发光液浓度等可变因素对蛋白免疫印迹半定量分析结果的影响.结果 蛋白免疫印迹半定量结果中目的蛋白相对强度与蛋白总上样量之间只在一定上样量范围内有线性关系,超出线性范围会导致相对蛋白强度变化幅度减少,甚至无变化;上样体积、内参的选择不影响实验结果;在条带质量较好的前提下,一抗浓度及其孵育时间和发光液浓度也不改变实验结果;但是半定量有一定的缺陷,实验结果有一定的误差,应在15％以内.结论 影响蛋白免疫印迹半定量结果的主要因素为目的蛋白的上样量;在能获得条带质量较好的前提下,改变上样体积和抗体孵育时间、适当稀释抗体和发光液浓度有利于实验进展而不影响实验结果.
-
载脂蛋白A1与结直肠肿瘤恶性度的相关研究
目的研究载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,APOA1)在结直肠息肉、不同分级分期及远处转移的结直肠癌患者血清中的表达,旨在探讨APOA1与结直肠肿瘤恶性度的相关性。方法收集59位结直肠肿瘤患者血清,由病理学医师根据肿瘤细胞浸润及分化程度进行分期及分级,并对是否伴随远处转移进行分类。本实验采用蛋白免疫印迹法与免疫比浊法对APOA1的表达进行分析。结果 APOA1在低分化结直肠癌患者血清与息肉、高分化及中分化血清相比表达量减少(P=0.035,P=0.028,P=0.028),APOA1在结直肠息肉血清中的表达量与不同分期及远处转移的结直肠癌血清中的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 APOA1与结直肠肿瘤的分级存在相关性,对不同恶性度的结直肠肿瘤患者可发挥肿瘤标志物的作用。
-
以保罗样激酶1为靶点的抗肿瘤药物的筛选及活性评价
目的：利用酵母模型进行保罗样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)抑制剂的高通量筛选,并初步评估活性化合物的体外抗肿瘤效果。方法采用噻唑蓝比色法(MTT 法)检测初筛阳性化合物对不同细胞系增生的影响,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析化合物对体外纯化的 PLK1激酶的作用效果,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期分布和凋亡率,免疫印迹(Western blotting)检测化合物对周期蛋白 B1(cyclin B1)和 PLK1的作用。结果利用酵母模型初筛得到3个阳性化合物,MTT 法检测显示1号和3号化合物能抑制多种肿瘤细胞的增生而对正常细胞的毒性很小,ELISA 结果显示2号和3号化合物对体外纯化的 PLK1几乎无抑制作用,FCM 检测显示1号化合物处理组 G2/ M 期细胞比例高于对照组, Western blotting 表明1号化合物不影响 PLK1的蛋白表达,能导致 cyclin B1的表达增加。结论1号化合物通过抑制 PLK1激酶的活性发挥抗肿瘤作用而不影响 PLK1的蛋白表达,有望成为靶向 PLK1的抗肿瘤先导化合物。
-
郁金提取物对CCI大鼠脊髓P-P38表达的影响
目的 探讨不同剂量郁金提取物对神经病理性疼痛模型慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠痛阈及脊髓早晚期因子P-P38表达的影响及调节作用,并讨论郁金提取物对神经病理性痛的影响机制.方法 选择成年健康雄性SD大鼠36只,体重250～294 g,建立CCI大鼠模型,将SD大鼠随机分为:正常组,模型组,郁金提取物低、中、高剂量组,加巴喷汀组和溶媒组,每组4只,对各组大鼠进行热缩足潜伏期测定,用蛋白免疫印迹(Westem blot)法检测大鼠L4～L6脊髓的中早晚期因子P-P38表达.结果 ①与正常组相比,造模后大鼠热缩足潜伏期(TWL)值显著下降(P＜0.05),说明神经病理性模型造模成功;与溶媒组相比,郁金提取物高剂量组能显著上调CCI模型大鼠(Thermal withdrawal latency,TWL)值(P＜0.01).②造模后大鼠L4～L6脊髓的中早晚期因子P-P38表达灰度值与内参的比值成上升趋势,均较正常组显著增加(P＜0.01);与溶媒组相比,郁金提取物高剂量组和加巴喷汀组能显著降低L4～L6脊髓的中早晚期因子P-P38的表达(P＜0.01).结论 高剂量郁金提取物可能通过降低神经病理性疼痛CCI模型大鼠脊髓的中早晚期因子P-P38的表达而发挥抑制神经病理性疼痛的产生和发展.
-
赖氨酰氧化酶样-4与丝氨酸蛋白酶基因在人宫颈癌细胞中的表达
目的：探讨赖氨酰氧化酶样-4（LOXL4）和丝氨酸蛋白酶（Matriptase）在三株人宫颈癌细胞中的表达情况。方法采用qRT-PCR及Western blot方法检测三株体外培养的宫颈癌细胞株Hela、ME180、HCC94中赖氨酰氧化酶样-4和Matriptase mRNA的表达及LOXL4蛋白的翻译水平。结果 LOXL4 mRNA在三株人宫颈癌细胞中存在不同程度的表达，蛋白翻译水平与mRNA基因表达一致，以Hela表达为高，ME180次之，HCC94表达低；而ME180和HCC94中MatriptasemRNA相对表达丰度分别是Hela的4.09倍和12.40倍。结论本研究成功建立了LOXL4及Matriptase在体外培养宫颈癌细胞中表达的检测平台，LOXL4、Matriptase的相对表达水平可能与宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力有关。
