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壮骨健膝方对IL-1 β诱导后软骨细胞表达Caveolin-1、p-p38、MMP-3、MMP-13及TNF-α的影响
目的:观察壮骨健膝方对IL-1 β诱导后软骨细胞中Caveolin-1、p-p38及其培养液中MMP-3、MMP-13和TNF-α表达的影响,探讨该方保护关节软骨的机制.方法:制备兔含药血清;取新西兰大白兔膝关节第二代软骨细胞,以10ng/mL IL-1β进行诱导,48h后随机分为空白血清组、含药血清组、阻滞剂A组、阻滞剂B组,并设未诱导的细胞为正常对照组,分别用不同方法干预6h后,检测软骨细胞及其培养液中上述5个指标的表达.结果:空白血清组5个指标的表达均高于其它各组(P＜0.05),而3个干预组均能降低其表达(P＜0.05),其中含药血清与SB203580联用的阻滞剂B组效果明显.结论:壮骨健膝方对关节软骨的保护作用可能与其抑制Caveolinp38MAPK信号通路的激活,进而降低软骨细胞表达MMP-3、MMP-13及TNF-α有关.
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郁金提取物对CCI大鼠脊髓P-P38表达的影响
目的 探讨不同剂量郁金提取物对神经病理性疼痛模型慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠痛阈及脊髓早晚期因子P-P38表达的影响及调节作用,并讨论郁金提取物对神经病理性痛的影响机制.方法 选择成年健康雄性SD大鼠36只,体重250～294 g,建立CCI大鼠模型,将SD大鼠随机分为:正常组,模型组,郁金提取物低、中、高剂量组,加巴喷汀组和溶媒组,每组4只,对各组大鼠进行热缩足潜伏期测定,用蛋白免疫印迹(Westem blot)法检测大鼠L4～L6脊髓的中早晚期因子P-P38表达.结果 ①与正常组相比,造模后大鼠热缩足潜伏期(TWL)值显著下降(P＜0.05),说明神经病理性模型造模成功;与溶媒组相比,郁金提取物高剂量组能显著上调CCI模型大鼠(Thermal withdrawal latency,TWL)值(P＜0.01).②造模后大鼠L4～L6脊髓的中早晚期因子P-P38表达灰度值与内参的比值成上升趋势,均较正常组显著增加(P＜0.01);与溶媒组相比,郁金提取物高剂量组和加巴喷汀组能显著降低L4～L6脊髓的中早晚期因子P-P38的表达(P＜0.01).结论 高剂量郁金提取物可能通过降低神经病理性疼痛CCI模型大鼠脊髓的中早晚期因子P-P38的表达而发挥抑制神经病理性疼痛的产生和发展.
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P38MAPK通路参与调控iNOS活化及其介导的帕金森病小鼠多巴胺能神经元丢失
目的 研究1-甲基-4-苯基-1,2.3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(Parkinson's disease,PD)小鼠模型黑质内P38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS)的表达调控作用,以探讨PD中脑黑质多巴胺能神经元变性丢失的可能机制.方法 采用神经毒素MPTP制备PD小鼠模型,免疫组织化学法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化P38(p-P38)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性神经元数量的改变.结果 与对照组相比,模型组小鼠黑质致密带TH阳性神经元显著减少约60%(P<0.01),黑质区p-P38、iNOS阳性细胞均显著增高(P<0.01),与模型组比较,P38MAPK特异性抑制刺SB203580处理组黑质致密带TH阳性神经元细胞丢失明显减轻(28%vs.60%)(P<0.01);黑质区p-P38、iNOS阳性细胞均显著减少(P<0.01).结论 iNOS表达可能在中脑黑质DA能神经元变性丢失过程中起重要作用;P38信号通路可对中脑黑质细胞iNOS表达有重要的调控作用;P38通珞抑制剂对MPTP所致帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.
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磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶与转化生长因子β1在正常和腰椎间盘退变组织中的表达
背景:研究表明p38 丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与椎间盘退变过程中炎症反应密切相关.目的:检测腰退变椎间盘组织和正常腰椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达.方法:选取经手术切除的36例退变椎间盘组织和10例正常椎间盘组织为对象,应用免疫组织化学法检测两组中磷酸化p38 丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达,并应用真彩色病理图像分析系统进行分析.结果与结论:腰退变椎间盘组织中磷酸化p38 丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的阳性表达率均高于正常椎间盘组织(P < 0.05),证实磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1在退变椎间盘组织中呈高表达.
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p-p38和uPA在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义
目的:研究磷酸化p38(p-p38)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在乳腺浸润性导管癌中的表达及与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学S-P法检测60例乳腺浸润性导管癌组织标本中p-p38和uPA的表达并分析其相关性及与临床病理特征进行比较.结果:乳腺浸润性导管癌组织中p-p38及uPA的阳性表达率分别为56.7%和60.0%.p-p38和uPA表达均为阳性25例,表达均为阴性15例,两者表达一致的符合率为66.7%(40/60),其表达呈密切相关(P＜0.05).与肿瘤的临床分期、淋巴结转移密切相关(P＜0.05,P＜0.01),而与肿瘤大小、患者年龄无显著相关性.结论:p-p38及uPA过表达在乳腺癌的发展及浸润转移中具有重要的作用.
关键词： 磷酸化p38 尿激酶型纤溶酶原激活剂 乳腺癌 -
磷酸化P38在神经病理性疼痛大鼠背根神经节中的作用机制
目的 建立大鼠背根神经节(DRG)慢性压迫模型,探讨磷酸化P38(p-P38)在神经病理性疼痛中的作用机制.方法 将SD大鼠分为假手术组(sham组,切开皮肤与肌肉)、慢性背根神经节压迫组(CCD组,L3与L4背根神经节插入不锈钢棒)、治疗组(行CCD手术并注射SB203580).SB203580分别于术前1d,术后1,7d鞘内注射.各组大鼠分别在术后1、3、5、7、14 d检测机械痛和热痛阈值.使用Western blotting检测DRG中p-P38表达情况.结果 与假手术组比较,CCD组术后p-P38水平增加(P＜0.05);与CCD组比较,治疗组大鼠DRG中p-P38蛋白表达明显减少(P＜0.05);与sham组比较,CCD组大鼠机械缩腿阈值明显降低(P＜0.01);与CCD组比较,治疗组大鼠机械缩腿阈值明显升高(P＜0.05).与sham组比较,CCD组、治疗组大鼠对热刺激缩腿反射时间明显缩短(均P＜ 0.01).CCD组、治疗组大鼠比较热刺激缩腿反射时间没有统计学差异(P＞0.05).结论 大鼠外周神经损伤后p-P38表达升高,进而引发神经病理性疼痛.
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p-p38和uPA在胃癌组织中的表达及意义
目的 研究磷酸化p38(p-p38)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在胃癌组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测35例胃癌组织标本中p-p38和uPA的表达并分析其相关性及与临床病理特征进行比较.结果 胃癌组织中p-p38及uPA的阳性表达率分别为62.9%和60.0%.p-p38和uPA表达均为阳性17例,表达均为阴性9例,两者表达一致的符合率为74.3%(26/35),其表达呈密切相关(P＜0.05);两者与胃癌的浸润程度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别无显著相关性(P＞0.05).结论 p-p38及uPA过表达在胃癌的发展及浸润转移中具有重要的作用,p-p38和uPA的表达可辅助用于胃癌的预后评估.
关键词： 磷酸化p38 尿激酶型纤溶酶原激活剂 胃癌 -
P38MAPK对帕金森病MPTP模型小鼠NF-κB和COX-2调控的研究
目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38 MAPK)、核因子NF-κB(nuclear factor kappa B)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)之间的关系,从而研究P38MAPK和NF-κB、COX-2在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)小鼠模型的作用机制,以及人参皂甙Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对P38MAPK信号通路的影响和对多巴胺神经元的保护作用.方法 将小鼠随机分为MPTP模型组、Rg1干预剂组和对照组.观察行为学,采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化P38(p-P38)、NF-κB和COX-2的表达变化；并观察给予人参皂甙Rg1后对上述变化的影响.结果 与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和COX-2表达也明显增加；经人参皂甙Rg 1处理后,上述变化均减轻.结论 P38 MAPK可能通过激活NF-κB、COX-2而诱导帕金森病MPTP模型小鼠黑质多巴胺能神经元(DA)的损伤,P38 MAPK、NF-κB和COX-2在帕金森病的发病过程中可能起重要作用.同时人参皂甙Rg1可能影响P38 MAPK信号通路、NF-κB及COX-2表达而对小鼠多巴胺神经元起到保护作用.
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P38信号通路调控帕金森病小鼠黑质NF-κB和iNOS的表达
目的 探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)信号通路与核因子NF-κB、一氧化氮合酶(inducible nitricoxide,iNOS)之间的关系,通过给予P38MAPK特异性抑制剂SB203580,研究P38MAPK信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)小鼠模型的作用机制.方法 将小鼠随机分为模型组、干预组和对照组.观察小鼠行为学变化,采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)、磷酸化P38(p-P38)、NF-κB和iNOS的表达变化;以及给予SB203580后对上述变化的影响.结果 与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和iNOS表达也明显增加;经SB203580干预处理后,上述变化均减轻.结论 P38 MAPK信号通路可能参与激活NF-κB、iNOS而诱导PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的损伤,采用SB203580抑制P38MAPK信号通路可对PD模型小鼠多巴胺神经元起到保护作用.
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人参皂甙Rg1通过P38信号通路影响帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2的表达
目的 研究P38信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制,以及人参皂甙Rg1对P38信号通路的影响和对多巴胺神经元的保护作用.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.用免疫组织化学和免疫蛋白印记法,观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,前列腺素E2(PGE2)以及磷酸化P38(p-P38)的表达变化;并观察给予人参皂甙Rg1对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区p-P38,COX-2,PGE2阳性细胞显著增加(P＜0.01).在MPTP第5次注射后24 h,黑质区TH阳性神经元显著丢失60%(P＜0.01);经人参皂甙Rg1处理后,模型小鼠PD症状减轻,与模型组比较,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区p-P38,COX-2,PGE2阳性细胞明显减少(P＜0.01),在MPTP第5次注射后24 h,TH阳性细胞数较对照组仅下降30%.结论 P38通路在亚急性PD模型早期对黑质COX-2表达可能起重要调控作用:人参皂甙Rg1可影响P38信号通路及COX-2的表达而对小鼠多巴胺神经元起到一定保护作用.
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辛伐他汀经p38MAPK信号通路调控BMSCs中晚期成骨分化的研究
目的 探讨在成骨诱导环境下,辛伐他汀对BMSCs成骨分化中晚期的作用和对p38MAPK信号通路的影响.方法 取20只雌性SD大鼠双侧股骨和胫骨骨髓,全骨髓培养法分离培养BMSCs并传代,取第2代细胞进行实验.实验分为5组,对照组(CM组):完全培养基培养;辛伐他汀组(SIM组):含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀的完全培养基培养;成骨诱导培养基组(OM组):含10 mmol/Lβ甘油磷酸钠和50μg/mL抗坏血酸的成骨诱导培养基培养;辛伐他汀和成骨诱导培养基组(OM+SIM组):含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨诱导培养基培养;阻断剂组(OM+SIM+SB组):先用p38MAPK信号通路阻断剂SB203580干预30 min后,再采用含终浓度为1×10-7 mol/L辛伐他汀成骨诱导培养基培养.MTT法检测CM组和SIM组细胞活性;ELISA法检测OM组及OM+SIM组培养7、14 d细胞ALP含量.应用实时定量PCR和Western blot方法检测OM组和OM+SIM组第21、28天开始成骨诱导培养1、12、24 h后,骨钙素(osteocalcin,OCN)蛋白和mRNA表达水平,从而确定辛伐他汀作用佳时间点,随后检测该时间点OM组、OM+SIM组和OM+SIM+SB组p38、磷酸化p38 (phospho-p38,p-p38)蛋白表达,计算p-p38/p38.结果 MTT检测示各时间点,SIM组与CM组吸光度(A)值比较差异无统计学意义(P＞0.05),提示辛伐他汀对BMSCs活性和增殖能力无明显影响.与OM组相比,OM+SIM组7、14 d ALP含量均明显增高,且两组组内7 d ALP含量均高于14 d,差异均有统计学意义(P＜0.05).实时定量PCR及Western blot检测示,第21、28天开始成骨诱导培养后,各组OCN mRNA及蛋白在12 h时表达量高于其他时间点(P＜0.05),且OM+SIM组明显高于OM组(P＜0.05);确定辛伐他汀诱导成骨干预的佳起效时间为12 h.阻断剂干预后,12 h时OM+SIM+SB组p-p38/p38明显低于其他两组(P＜0.05),OM+SIM组高于OM组(P＜0.05).结论 辛伐他汀的佳起效时间为给药后12 h,其可以提高BMSCs成骨分化中晚期OCN蛋白、mRNA和p-p38蛋白表达量.
