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益气补肾法对自然流产模型小鼠脾脏Foxp3表达及妊娠结局的影响
目的:探讨益气补肾法对自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞上Foxp3因子的表达及妊娠结局的影响.方法:将雌性CBA/J与雄性DBA/2小鼠合笼交配,造成自然流产模型.将CBA/J孕鼠随机分成5组,中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、阳性对照组(CsA组)、阴性对照组(NS组),分别于妊娠第9天、第14天将其处死,其中孕第14天计算胚胎吸收率,并采用流式细胞术分析Foxp3因子比例.结果:①各种干预手段对自然流产模型妊娠结局的影响:孕第14天,各治疗组与阴性对照组相比,仅中药中剂量组与其相比差异存在统计学意义(P＜0.05);中药各治疗组与阳性对照组相比不存在统计学差异;中药中剂量组与中药低剂量组相比存在统计差异意义(P＜0.05).②各种干预手段对自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+细胞上Foxp3因子表达的影响:孕第9天,各治疗组与阴性对照组相比,差异均存在统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);各治疗组与阳性对照组相比,仅中药高剂量组与其相比差异存在统计学意义(P＜0.01);中药高剂量组与中药中剂量组、中药低剂量组相比差异存在统计学意义(P＜0.05).孕第14天,各组间相比,仅中药中剂量组与阴性对照组相比差异存在统计学意义(P＜0.05).结论:益气补肾法可使自然流产模型小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞上Foxp3因子高表达并有降低胚胎吸收率的趋势,为益气补肾中药在临床的应用提供了一定的理论依据.
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益气补肾实验方对自然流产模型小鼠foxp3、STAT5、NF-κB mRNA表达的影响
目的 观察益气补肾实验方对自然流产模型小鼠脾脏CD4+ CD25+ Treg细胞中foxp3 mRNA表达及蜕膜组织foxp3、STAT5、NF-κB mRNA表达的影响.方法 将雌性CBA/J与雄性DBA/2或雄性BALB/c小鼠以2:1合笼交配,制备自然流产模型.将CBA/J孕鼠分为5组:阴性对照组、阳性对照组、中药高剂量治疗组、中药中剂量治疗组、中药低剂量治疗组,每组10只;阴性对照组于妊娠第0天至处死日每天以10 mg/kg的剂量灌服生理盐水1次;阳性对照组于妊娠第4天以10 mg/kg的剂量单次灌服环孢素A溶液;中药高、中、低剂量治疗组于妊娠第0天至处死日每日分别按48、24、12 g/kg的剂量灌服益气补肾实验方1次.将孕鼠于妊娠第9、14天处死,取新鲜脾脏用于提取Treg细胞,并取孕鼠蜕膜组织-80℃冻存.采用磁珠分选的方法分离和纯化脾脏CD4+ CD25+细胞,采用流式细胞术鉴定分选前后CD4+ CD25+的纯度,运用RTPCR分析CD4+ CD25+细胞中foxp3 mRNA的表达情况;运用RT-PCR分析蜕膜组织中foxp3、STAT5A、STAT5B、NF-κB mRNA的表达情况.结果 CD4+ CD25+ Treg的纯度可达到88％以上,经台盼蓝检测其活性大于95％.纯化分离前CD4+ CD25 +/CD4+平均为13.20％;纯化分离后CD4+ CD25+/CD4+平均为91.43％.与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高剂量治疗组Treg细胞中foxp3 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);中药高剂量治疗组较中、低剂量组小鼠脾脏Treg中foxp3 mRNA表达升高(P＜0.05).与阴性对照组比较,阳性对照组、中药高、中剂量组9、14天蜕膜组织foxp3、STAT5B mRNA表达升高(P＜0.05);阳性对照组、中药高剂量组9、14天及中药中剂量组蜕膜组织STAT5A mRNA表达升高(P＜0.05,P＜0.01);阳性对照组及中药各剂量组蜕膜组织NF-κB mRNA表达降低(P＜0.01).结论 益气补肾实验方可上调自然流产模型小鼠脾脏CD4+ CD25+T细胞foxp3 mRNA及蜕膜组织中foxp3、STAT5 mRNA表达,下调母胎界面组织中NF-κB mRNA的表达,促进妊娠免疫耐受状态的维持.
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自然流产大鼠蜕膜组织ENA-78和TNF-α的表达
目的 比较正常妊娠模型大鼠,自然流产模型大鼠胎盘组织ENA-78、TNF-α表达特征的差异,探讨两者与自然流产的关系.方法 建立正常妊娠大鼠模型和自然流产大鼠模型,采用免疫组化SABC法测定2组模型孕14d胎盘组织中ENA-78、TNF-α的表达.结果 与正常妊娠模型组相比,自然流产模型组大鼠胎盘组织中ENA-78、TNF-α的表达显著升高( P<0.01).结论 胎盘组织中ENA-78、TNF-α的表达与自然流产的发生发展有关.
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乙酰肝素酶在肝素干预的自然流产模型鼠胎盘中的表达及意义
目的:比较正常妊娠模型大鼠,自然流产模型大鼠,肝素干预模型大鼠胎盘组织中乙酰肝素酶表达特征的差异,探讨其与自然流产的关系.方法:建立正常妊娠大鼠模型,自然流产模型大鼠和肝素干预大鼠模型,采用免疫组化SABC法测定三组模型孕14 d胎盘组织中乙酰肝素酶的表达.结果:与正常妊娠模型组和肝素干预模型组相比,自然流产模型组大鼠胎盘组织中乙酰肝素酶的表达显著升高,P＜0.01.结论:胎盘组织中乙酰肝素酶的表达与自然流产的发生发展有关,肝素可对自然流产起到一定的预防和治疗作用.
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益气补肾实验方对自然流产模型小鼠母-胎界面和脾脏组织IL-2、IL-4表达的研究
目的:观察益气补肾实验方对自然流产模型小鼠母-胎界面和脾脏组织IL-2、IL-4的表达情况.方法:将雌性CBA/J与雄性DBA/2以2∶1合笼交配,建立自然流产模型.将CBA孕鼠随机分为5组:阴性对照组(生理盐水组)、阳性对照组(环孢素组)、中药组(高、中、低剂量中药组).孕鼠于妊娠第14 d处死,取脾脏和蜕膜、胎盘组织,用ELISA法测母-胎界面及脾脏IL-2、IL-4蛋白含量.结果(1)在母-胎界面中,与阴性对照组相比,各治疗组IL-2的表达均降低(P＜0.05),IL-4的表达均升高(P＜0.05);各治疗组中,高剂量组与环孢素组、中剂量组与低剂量组IL-2、IL-4的表达分别比较均无明显差异(P＞0.05),高剂量组、环孢素组IL-2的表达较中剂量组、低剂量组低(P＜0.05),IL-4的表达较中剂量组、低剂量组高(P＜0.05).(2)在脾脏组织中,与阴性对照组相比,各治疗组IL-2的表达均降低(P＜0.05),IL-4的表达均升高(P＜0.05);各治疗组IL-2的表达比较均无明显差异(P＞0.05),高剂量组、环孢素组、低剂量组IL-4的表达均无明显差异(P＞0.05),三者的表达均较中剂量组高(P＜0.05).结论:益气补肾实验方可以上调自然流产模型小鼠母-胎界面与脾脏组织IL-4的表达及下调IL-2的表达,有助于妊娠时免疫耐受状态的维持.
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乙酰肝素酶、MMP-9在肝素干预的自然流产大鼠模型胎盘组织中的表达及意义
目的:比较正常妊娠模型大鼠、自然流产模型大鼠、肝素干预模型大鼠胎盘组织乙酰肝素酶、MMP-9表达特征的差异,探讨两者与自然流产的关系.方法:建立正常妊娠大鼠模型、自然流产大鼠模型和肝素干预大鼠模型,采用免疫组化SABC法测定3组模型孕14天胎盘组织中乙酰肝素酶和MMP-9的表达.结果:与正常妊娠模型组和肝素干预模型组相比,自然流产模型组大鼠胎盘组织中类肝素酶和MMP-9的表达显著升高(P<0.01).结论:胎盘组织中乙酰肝素酶和MMP-9的表达与自然流产的发生、发展有关,肝素可对自然流产起到一定的预防和治疗作用.
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孕早期干预CD80/CD86协同刺激信号对自然流产模型免疫活性细胞协同刺激分子表达的影响
目的:探讨孕早期干预协同刺激信号对自然流产模型孕鼠免疫活性细胞MHC-Ⅱ类抗原和协同刺激分子的调控作用.方法:建立自然流产模型组CBA×DBA/2和协同刺激信号干预组CBA×DB/A2(CBA小鼠在孕4天腹腔注射CD80及CD86 mAb各0.1 mg).分别于孕第14天计数两组的胚胎吸收率,于孕第9天采用流式细胞技术分析孕鼠脾细胞MHC-Ⅱ类抗原与协同刺激分子CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD28和CD152(CLA-4)的表达.结果:孕早期干预协同刺激信号后,孕第14天的胚胎吸收率显著下降(P＜0.05);孕第9天免疫活性细胞CD80、CD86和CD28的表达显著下降(P＜0.01);CTLA-4的表达则显著升高(P＜0.05);而MHC-Ⅱ类抗原的表达无显著改变(P＞0.05).结论:孕早期体内干预协同刺激信号使免疫活性细胞协同刺激分子CD80、CD86、CD28表达下调和CTLA-4表达上调,及母胎界面Th2型免疫偏离,从而诱导系统性母-胎免疫耐受.
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环孢素A诱导自然流产模型孕鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+的调节性T细胞扩增及外周母胎免疫耐受
目的:探讨环孢素A(Cyclosporin A,CsA)对小鼠自然流产模型妊娠预后及外周母胎免疫耐受的影响.方法:以正常妊娠模型CBA/J×BALB/c为对照组,自然流产模型CBA/J×DBA/2为研究组,CBA/J孕鼠于妊娠第4天分别腹腔注射5 mg/kg CsA.单向混合淋巴细胞反应分析孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,ELISA分析上清液IL-2分泌水平,流式细胞术分析脾细胞CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞扩增,并观察两种模型各组胚胎吸收率.结果:于妊娠第4天腹腔注射CsA显著降低自然流产模型孕鼠胚胎吸收率以及孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的增殖能力与IL-2分泌(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01),促进脾脏CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞亚群扩增(P＜0.01).结论:孕早期腹腔注射CsA可诱导自然流产模型孕鼠外周免疫细胞对父系抗原的特异性免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平,提示CsA可能成为治疗妊娠失败的有效药物.
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重组脂联素对自然流产模型小鼠妊娠结局的影响
目的·探讨重组脂联素对自然流产(spontaneous abortion,SA)模型小鼠妊娠结局及Th17/调节性T细胞(Treg)平衡的影响.方法·将CBA/J雌鼠与DBA/2雄鼠交配建立SA模型,CBA/J雌鼠与BALB/c雄鼠交配建立正常妊娠模型,于妊娠第5日起脂联素组连续腹腔注射重组脂联素10 μg/(kg·d)×9d,对照组注射等量PBS.于妊娠第14日处死孕鼠,计算胚胎吸收率;ELISA检测血清脂联素、白细胞介素17 (IL-17)和转化生长因子p(TGF-β);分离脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测Th 17/Treg细胞分群.结果·重组脂联素对正常妊娠模型小鼠胚胎吸收率无明显影响,但可使SA模型小鼠胚胎吸收率由32.2％降至13.3％ (P=0.039);ELISA结果显示,SA模型小鼠腹腔注射脂联素后血清脂联素水平显著升高,IL-17水平降低,TGF-β水平升高(均P＜0.01);流式细胞术结果显示,脂联素可降低SA模型小鼠Th1 7/CD4+T细胞比例,升高Treg/CD4+T细胞比例,逆转Th 17/Treg比值.结论·在孕早期腹腔注射重组脂联素可改善SA模型孕鼠的妊娠结局,可能与其对Th 17/Treg平衡的调控有关.
