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非小细胞肺癌中PAX6表达及其对肿瘤细胞增殖与侵袭作用机制研究
背景与目的：转录因子PAX6主要表达于胚胎期，不同肿瘤中PAX6呈现高表达，通过不同的信号通路发挥肿瘤抑制或促进作用。检测PAX6在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)中的表达，通过RNAi下调其表达，研究PAX6对肿瘤细胞侵袭和增殖力以及cyclin E、p38表达水平的影响。方法：应用蛋白印记检测86例NSCLC肿瘤组织及癌旁配对组织以及2例细胞系中PAX6的表达情况。应用PAX6特异性siRNA序列，转染NSCLC细胞系A549，MTT法、Transwell小室、划痕实验检测转染前后细胞增殖、侵袭和迁移能力的对比。蛋白质印记法(Western blot)检测转染前后cyclin E及p38表达情况。结果：对比癌旁组织及正常人支气管上皮细胞16HBE，PAX6在NSCLC组织及A549细胞系中显著高表达。选取高效siRNA序列转染细胞系后，PAX6表达的下调抑制了肿瘤细胞的增殖及集落形成，G1期细胞比例增加，细胞侵袭及迁移力均下降。PAX6基因敲低细胞cyclin E及p38活性受到抑制，表达下调。结论：PAX6通过调控MAPK通路及cyclin E的表达加速肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移，是潜在的NSCLC诊疗靶点。
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CD174、细胞周期素D1、E在消化道肿瘤中的表达
目的 观察CD174、cyclin D1和cyclin E在消化道肿瘤组织的表达水平,以及三者之间的相关性,初步探讨CD174对消化道肿瘤诊断和预后判定的价值.方法 用流式细胞仪分别检测消化道肿瘤组织及相应的远端组织中CD174、cyclin D1和cyclin E蛋白质的表达.用免疫组化染色了解消化道组织中CD174的表达和分布状况.结果 CD174在消化道肿瘤组织的表达水平明显低于瘤旁正常组织(P＜0.05),cyclin D1和cyclin E表达水平则高于瘤旁正常组织(P＜0.05).CD174、cyclin D1和cyclin E在不同性别人群中的表达无统计学意义(P＞0.05);cyclin E的表达水平在肿瘤长径＞3 cm组明显高于肿瘤长径≤3cm组(P＜0.05);CD174在腺癌中表达水平高于鳞癌(P＜0.05);CD174和cyclin E蛋白质的表达水平在TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期肿瘤组织中低于Ⅰ～Ⅱ期肿瘤(P＜0.05),而cyclin D1表达水平则相反(P＜0.05).肿瘤组织中CD174与cyclin D1和cyclin E蛋白质呈负相关(r=-0.61、r=-0.57).免疫组化染色亦显示,肿瘤组织中CD174阳性细胞率明显低于瘤旁组织.结论 CD174在消化道肿瘤组织的表达水平明显降低,且与肿瘤的分化、浸润和转移相关.CD174与cyclin D1、cyclin E的联合检测有助于消化道肿瘤的诊断和预后的判断.
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奥曲肽对人类前列腺癌PC-3细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响
目的:研究生长抑素类似物奥曲肽对人类前列腺癌PC-3细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响.方法:用奥曲肽对体外培养的人类前列腺癌PC-3细胞进行药物处理,采用MTT比色分析法测定奥曲肽不同剂量组对前列腺癌PC-3细胞生长的调控作用:采用流式细胞术分析奥曲肽对PC-3细胞的周期分布的影响,免疫细胞化学方法观察奥曲肽对前列腺癌PC-3细胞周期调控蛋白cyclin E的影响.结果:奥曲肽可抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,诱导其凋亡,改变细胞周期分布,使G0/G1期细胞比例增高,S期比例降低,同时还可使cyclin E蛋白表达下降.上述作用具有剂量和时间依赖性.结论:奥曲肽可诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,改变细胞周期分布,影响细胞周期调控蛋白表达,从而抑制细胞增殖.
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细胞周期相关蛋白cyclin E、cdk2和p27kip1在垂体腺瘤中的表达
目的 观察细胞周期相关蛋白cyclin E、cdk2和p27kip1在垂体腺瘤中的表达情况,探讨其与垂体腺瘤临床生物学行为的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测37例非侵袭性垂体腺瘤和21例侵袭性垂体腺瘤组织中cyclin E、cdk2和p27 kip1蛋白的表达情况.结果 在侵袭性垂体腺瘤中cyclin E和cdk2的表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤(均P<0.01),p27kip1的表达明显低于非侵袭性垂体腺瘤(P<0.01);cyclin E与cdk2在垂体腺瘤中的表达呈正相关(r=1,P<0.01),两者与p27kip1的表达呈负相关(均r=-1,P<0.01);cyclin E和cdk2的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈正相关(r=0.685,r=0.667,均P<0.01),而p27kip1的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈负相关(r=0.659,P<0.01).结论 cyclin E、cdk2及p27kip1的表达情况可以作为判断垂体腺瘤的侵袭性和预后的指标.
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细胞周期素E在胆囊癌中的表达及意义
目的:探讨cyclin E与胆囊癌发生发展的关系。方法:应用S-P免疫组织化学技术，对35例原发性胆囊癌、10例胆囊腺瘤及10例慢性胆囊炎行cyclin E多克隆抗体的免疫组化标记。结果:胆囊癌cyclin E的阳性率为48.57%，与胆囊腺瘤、胆囊炎（阳性率均为10%）比较差异有显著性（P<0.05）。cyclin E阳性表达率在病理组织学分级中有显著性差异（P<0.05），伴淋巴结及远处转移者cyclin E阳性表达率明显高于无转移者，而与Nevin分期无关。cyclin E表达程度与性别、年龄无关。结论:cyclin E可反映细胞的增殖状态，是判断胆囊癌发生发展的重要生物学标志。
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NIRF蛋白和CyclinE在细胞周期调控及肿瘤发生中的作用
[目的]观察NIRF是否可与CyclinE结合,探讨NIRF在细胞周期调控和肿瘤发生中的作用.[方法]从人脑cDNA文库中PCR扩增CyclinA2及CyclinE1cDNA,先分别构建含CyclinA2和CyclinE1 cDNA的重组克隆载体,再分别构建含CyclinA2和CyclinE1 cDNA的重组真核表达载体.将FLAG标记的4种细胞周期素和Myc标记的NIRF分别或共同转染HEK293细胞,再进行免疫沉淀及Western blot.[结果]4种细胞周期素的蛋白水平在单独转染和与NIRF共同转染时并无明显不同,而在加入蛋白泛素化降解抑制剂MG-132后,4种细胞周期素的蛋白水平均有增加,其中尤以CyclinE1蛋白为明显.[结论]NIRF可能通过与CyclinE1结合参与细胞周期进程,并可能参与了CyclinE1的泛素化降解.
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Cyelin E与晚期乳腺癌患者紫杉烷敏感性和预后的关系
[目的]探讨Cyclin E表达与乳腺癌患者含紫杉烷化疗的敏感性和预后的关系.[方法]湖北省肿瘤医院2001～2004年晚期或复发转移的乳腺癌患者56例进行了含紫杉类药物的联合化疗,免疫组化检测Cyclin E表达水平.[结果]Cyclin E高表达率为34%(19/56),Cyclin E高表达与紫杉烷化疗有效率无明显联系(χ2=0.1,P=0.8).然而,低表达Cyclin E的患者中位生存时间29.1个月(95%CI:25.7～32.7).明显长于高表达患者的23.4个月(95%CI:19.7～27.2)(Log-Rank=4.1,P=0.04).[结论]在乳腺瘟患者中,Cyclin E不能准确判断紫杉类药物的近期疗效,但Cyclin E高表达可能是提示长期预后差的生物标志之一.
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大肠癌中Cyclin E、PTEN蛋白表达及其意义
[目的] 评价Cyclin E和PTEN蛋白在大肠癌及癌旁组织中的表达及临床意义.[方法] 选择60例大肠癌标本及加例距癌组织5cm处的肠黏膜组织,采用免疫组化EnVision二步法检测组织中Cyclin E、PTEN蛋白的表达情况.[结果] Cyclin E在大肠癌组织中阳性率高于癌旁组织(27.50% vs.63.35%,P=0.0000);Cyclin E在大肠癌高、中、低分化中阳性率逐渐升高,淋巴结转移者Cyclin E阳性表达率高于无淋巴转移者(P=0.036).而PTEN则相反,在大肠癌中PTEN阳性表达率低于癌旁组织.[结论] Cyclin E和PTEN蛋白表达与大肠癌的发生发展及生物学行为有关.
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人脑胶质瘤中cyclin E的表达及其与细胞凋亡的关系
目的 研究人脑胶质瘤中cyclin E蛋白的表达与肿瘤恶性程度的关系及其对细胞凋亡的影响.方法 采用免疫组化法和原位细胞凋亡检测TUNEL法分别检测47例脑胶质瘤中cyclin E的表达和凋亡细胞,计算两者阳性目标PU值,统计分析两者之间及其与胶质瘤病理分级之间的关系.结果 正常脑组织中无cyclin E表达.随着人脑胶质瘤病理分级的增高,cyclin E平均PU值明显升高.在WHO分级Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中,存在显著性差异(F=61.67,P＜0.01),其中高度恶性组cyclin E(PU)明显高于低度恶性组cyclin E(PU)(t=8.08,P＜0.01),差异有显著性意义.类似cyclin E,凋亡指标(AI)PU值随脑胶质瘤恶性程度增高而升高(F=12.20,P＜0.01).cyclin E(PU)与AI(PU)呈明显正相关(r=0.703,P＜0.01).结论 人脑胶质瘤中cyclin E的表达与细胞凋亡和病理学分级密切相关,很可能参与了人脑胶质瘤的发生和恶性转化.
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细胞周期蛋白E和p53在胆囊癌组织中的表达
目的：研究细胞周期蛋白E（Cyclin E）和p53在胆囊癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化方法，检测Cyclin E和p53在胆囊癌组织中的表达，以慢性胆囊炎组织作为对照。结果 Cyclin E在胆囊癌组织中表达阳性率比胆囊炎组高，在中-低分化胆囊癌组织中表达阳性率比高分化胆囊癌组织中高，在晚期胆囊癌（Nevin III~V期）组织中表达阳性率比早期（NevinⅠ，Ⅱ期）胆囊癌组织中高，差异均有统计学意义（χ2分别=17.76、5.11、6.13，P均＜0.05）。 Cyclin E的表达与胆囊癌有无转移无明显相关性（χ2=0.04，P＞0.05）。 p53在胆囊癌组织中表达阳性率比胆囊炎组高，在中-低分化胆囊癌组织中表达阳性率比高分化胆囊癌组织中高，差异均有统计学意义（χ2分别=43.46、12.77，P均＜0.05）。 p53的表达与胆囊癌Nevin分期及有无转移无明显相关性（χ2分别=0.09、0.18，P均＞0.05）。Cyclin E表达阳性的胆囊癌患者1年生存率比表达阴性者低，差异有统计学意义（χ2=16.63，P＜0.05）。p53的表达与胆囊癌患者1年生存率无明显相关性（χ2=0.11，P＞0.05）。结论结合分析Cyclin E和p53在胆囊组织中的表达，有助于对胆囊癌进行早期诊断和判断预后。
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人脑胶质瘤中细胞周期素E的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系
目的 研究人脑胶质瘤中细胞周期素E(cyclin E)的表达及其与细胞增殖及凋亡的关系.方法 采用免疫组化法和末端脱氧核昔酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法分别检测47例脑胶质瘤中cyclin E、增殖细胞核抗原的表达和凋亡细胞,计算三者阳性单位(PU)值,统计分析三者之间及其与胶质瘤病理分级之间的关系.结果 随着人脑胶质瘤病理分级的增高,cyclin E的PU值(cyclin E PU)明显升高(t=8.08,P＜0.01).增殖指数(PI)及凋亡指数(Al)亦随着脑胶质瘤恶性程度增高而升高.cyclin E PU与PI和AI呈明显正相关(r=0.895、0.703,均P＜0.01).并且,随着cyclin E的表达水平及胶质瘤病理级别的增高,PI比AI有更大的增高趋势(F=33.72,P＜0.01).结论 人脑胶质瘤中cyclin E的表达与细胞增殖和凋亡、肿瘤病理学分级密切相关.很可能参与了人脑胶质瘤的发生和恶性转化.
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雌激素对人子宫内膜癌JEC细胞中p57kip2和Cyclin E表达的影响
目的 探讨雌激素对体外培养的人子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)JEC细胞中p57 kip2和Cyclin E表达的影响.方法 体外培养的JEC细胞分别用高、中、低三种浓度(10-6、10-6、10-0 mol/L)的雌二醇(β-Estradiol,E2)治疗处理,于作用24、48、72 h后,分别用倒置显微镜和透射电镜观察JEC细胞的形态变化,用MTT、流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞的生长情况和细胞周期分布的变化,用Western blot法检测p57kip2、Cyclin E蛋白的表达.结果 形态观察、MTT、FCM检测显示,在中、低浓度的E2对JEC细胞的生长有促进作用(P＜0.05);E2作用72 h后,处于G0/G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P＜0.05).Western blot结果显示,E2作用于JEC细胞:(1)24 h时,p57kip2蛋白在中浓度组表达低,高浓度组表达高(P＜0.05),Cyclin E蛋白在高浓度组表达低,中浓度组表达高(P＜0.05),然而,在48 h时,随着浓度的升高,p57kip2、Cyclin E蛋白的表达均逐渐增加(P＜0.05),72 h亦然.(2)p57kip2蛋白在中浓度组随着作用时间的延长,表达增高(P＜0.05),高浓度组亦然;Cyclin E蛋白在中浓度组随着时间的延长,表达降低(P＜0.05),低浓度组亦然.p57kip2、Cyclin E蛋白表达之间无相关性(P＞0.05).结论 p57kip2、Cyclin E蛋白在EC发生、发展中的作用均受到E2的影响.随着E2作用浓度增加、作用时间延长,JEC细胞由增殖促进状态变成增殖抑制状态,中、高浓度组p57kip2蛋白表达逐渐增高;中、低浓度组则随着E2作用时间的延长,Cyclin E蛋白表达逐渐降低.
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Livin阳性乳腺癌中细胞周期调控相关蛋白的变化
目的 探讨Livin阳性乳腺癌中细胞周期调控相关蛋白的变化,以初步明确Livin对细胞周期调控相关蛋白的影响.方法 采用免疫组化SP法检测Livin在45例乳腺癌中的表达,利用Western blot法检测45例乳腺癌中Cyclin D、Cyclin A、CyclinE的表达.结果 45例乳腺癌中Livin阳性率为75.56％ (34/45).Livin阳性乳腺癌中,Cyclin A的阳性率为88.23％(30/34),而在Livin阴性乳腺癌中,Cyclin A的阳性率为54.55％ (6/11),差异有统计学意义(P＜0.05);Livin阳性乳腺癌中,CyclinD的阳性率为61.76％ (21/34),而Livin阴性乳腺癌中,Cyclin D的阳性率为81.82％ (9/11),差异无统计学意义(P＞0.05);在Livin阳性乳腺癌中,Cyclin E的阳性率为82.35％ (28/34),而在Livin阴性乳腺癌中,Cyclin E的阳性率为45.46％ (5/11),差异有统计学意义(P＜0.05).乳腺癌组织中Livin与Cyclin A、Cyclin E蛋白表达显著相关(P＜0.05).结论 Livin蛋白在乳腺癌中表达上调,提示其可能在促进乳腺癌发生、发展中起重要作用.Livin表达可导致Cyclin A和Cyclin E表达上调,而对Cyclin D表达作用不明显,提示Livin除了抗细胞凋亡作用外,还可能通过引起细胞周期调控紊乱促进乳腺癌的发生、发展.
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细胞周期素E和p53在乳腺癌中表达及意义
目的 探讨细胞周期素E(cyclin E)和p53在乳腺癌中表达的意义和相瓦关系.方法 采用免疫组化方法 (SP法)观察82例乳腺癌、15例乳腺良性肿瘤与15例正常乳腺组织的eyclin E和p53的表达.结果 正常乳腺组织和良性肿瘤中cyclin E和p53无表达,乳腺癌组织中cyclin E和p53的阳性表达率分别为56.10%和60.98%(P<0.05),cyclin E和p53的阳性表达与乳腺癌的临床分期密切相关(P<0.05);cyclin E和p53在乳腺癌的阳性表达具有相关(P<0.05),共同阳性表达的患者5年生存率明显低于阴性者(P<0.05).结论 cyclin E在乳腺癌中的表达与p53的表达呈明显的一致性,并在肿瘤的进展中起一定的作用,cyclin E和p53在乳腺癌中的共同阳性表达可作为乳腺癌预后的有效指标.
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子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中PTEN、cyclin E蛋白的表达
肿瘤的本质在于细胞周期调节机制失控,导致细胞异常增殖所致.我们采用免疫组化技术检测子宫内膜样腺癌及癌前病变组织中的PTEN和cyclin E蛋白,探讨其在子宫内膜样腺癌发生、发展中的作用及与临床病理特征之间的关系.
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子宫颈癌及上皮内瘤变中cyclin E与Rb蛋白表达的意义
子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤.宫颈鳞状细胞周期调节失控及癌基因突变与CSCC密切相关.cyclin E和Rb基因均与细胞周期调节有关,其异常表达在许多人类肿瘤中存在,但在CSCC癌变过程中的作用及其意义研究较少.我们利用免疫组化方法探讨CSCC癌变过程中cyclin E和Rb蛋白的表达,以期寻找CSCC癌变机制及其对CSCC的诊断等方面的意义.
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cyclinE、P27、Ki-67蛋白在大肠癌中的表达及意义
目的 探讨细胞周期调控因子蛋白表达在大肠癌发生、发展中的作用及对预后的影响.方法 采用免疫组化染色对64例大肠癌和12例正常大肠黏膜cyclinE、P27、Ki-67进行检测.结果 大肠癌与正常大肠黏膜相比cyclinE、Ki-67阳性表达率明显增高,P27阳性表达率明显降低(均P<0.05).Duke's A期cyclinE阳性表达率明显高于Duke's B、C、D期(P<0.05),无淋巴结转移明显高于有淋巴结转移者(P<0.05);cyclinE的表达与大肠癌患者的预后无关.P27表达下降或缺乏,与大肠癌的Duke's分期、淋巴结转移有关(P<0.05),且其5年生存率显著降低(P＜0.05).Ki-67表达与大肠癌部位,Duke's分期及患者预后无关. 结论 cyclinE过表达及P27蛋白表达下降或缺失可能会加速细胞周期的转化,并参与大肠癌的发生;cycinE过表达可能是大肠癌形成过程中较早的分子事件.P27蛋白表达下降或缺失可能促进了大肠癌的发展及转移,且提示为患者预后不良的危险因素.
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Cyclin E 干扰 RNA 对人卵巢癌HO-8910细胞蛋白质组表达的影响
目的：使用 RNA 干扰技术阻断人卵巢癌 HO-8910细胞中 Cyclin E 的表达，分析 Cyclin E 表达受抑制后产生的一些效应，采用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质，探讨 Cyclin E 在人卵巢癌细胞增殖中的作用，以期为人卵巢癌发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法构建质粒表达载体pU6-Cyclin E-siRNA，同时设立阴性对照组和空白对照组。采用脂质体转染法稳定转染卵巢癌 HO-8910细 胞， G418筛选阳性克隆细胞；噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长曲线的改变；RT-PCR 法比较转染前后 Cyclin E mRNA的表达量的变化；双向凝胶电泳-图像分析-质谱技术-数据库搜索，比较转染前后蛋白质组表达的变化，鉴定差异显著的蛋白点。结果1）成功构建了 Cyclin E 干扰 RNA 的重组质粒并获得稳定转染组细胞 HO-8910-Cyclin E siR-NA。2）稳定转染组 HO-8910-Cyclin E siRNA 细胞与阴性对照组 HO-8910-neo 细胞和空白对照组相比，细胞生长速度减慢，Cyclin E mRNA 表达水平降低。3）通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到稳定转染组低表达蛋白5个，经数据库搜索分别是锌指蛋白 ZFP-36、波形蛋白、肿瘤拒绝抗原 gp96、未知蛋白、DNA 校正蛋白酶Ⅱ。结论Cyclin E 干扰RNA 干扰后卵巢癌 HO-8910细胞 Cyclin E 基因的表达明显降低，细胞增殖能力减弱。差异表达的蛋白质参与细胞的增殖、细胞信号转导调节，并与肿瘤的发生、发展、诊断密切相关。
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肺积1号方对Lewis肺癌小鼠移植瘤细胞周期及CyclinD1表达的影响
目的:观察肺积1号方对Lewis肺癌小鼠移植瘤细胞周期及Cyclin D1表达的影响.方法:建立Lewis肺癌细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型,随机分为五组各8只:模型组、肺积1号方小剂量组(肺小组)、肺积1号方中剂量组(肺中组)、肺积1号方大剂量组(肺大组)、顺铂(DDP)组.模型组给予生理盐水灌胃,作为阴性对照;肺小组、肺中组、肺大组按照不同剂量灌服肺积1号方中药混悬液;DDP组给予腹腔注射DDP稀释液,作为阳性对照.连续用药14 d,停药1 d,接种后第21天用颈部脱臼法处死各组小鼠.流式细胞技术分析肺积1号方对Lewis肺癌细胞周期及凋亡率的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E的表达.结果:肺中组、肺大组肿瘤细胞G0/G1期比例与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),同时S期、G2/M期细胞比例下降(P<0.05),作用呈剂量依赖性(P<0.05);肺小组、肺中组、肺大组凋亡细胞比例与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);肺小组、肺中组、肺大组Cyclin D1表达均较模型组降低(P<0.05).结论:肺积1号方可使Lewis肺癌细胞受阻于G0/G1期,其机制可能与下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达有关.
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组织芯片与普通切片免疫组化表达平行性的研究
目的 探讨应用组织芯片进行免疫组化研究的可靠性.方法 收集90例乳腺癌病例,制成直径2mm的组织芯片.行cyclin E和nm23免疫组织化学染色,与普通切片的免疫组化染色结果进行统计学处理比较.结果 组织芯片与普通切片cyclin E和nm23的表达显著相关,其一致性(阳性/阴性)分别是96.67%和97.77%.两者之间的差异没有统计学意义(P>0.05).通过组织芯片得到的cyclin E和nm23与乳腺癌淋巴结转移的关系也与已报道的普通切片之结果一致.结论 组织芯片免疫组化技术可以作为一种可靠、有效的高通量分析工具.
