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青蒿素对人白血病U937细胞凋亡及分化的影响
目的:通过青蒿素对经典人白血病细胞系U937的作用研究,探索青蒿素治疗白血病的可能.方法:采用细胞培养、四唑盐比色试验(MTT)、细胞形态学、DNA电泳及NBT还原试验等方法观察不同浓度青蒿素促进U937细胞凋亡及诱导分化作用.结果:青蒿素在浓度>6 μmol/L时可显著抑制U937细胞的增殖,促进其凋亡,并表现出剂量和时间依赖效应(P<0.01);在诱导分化浓度下,青蒿素可促进U937细胞向成熟粒细胞分化(P<0.01).结论:青蒿素对白血病细胞U937的选择性促凋亡作用以及诱导分化效应表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物,有望进入临床应用.
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oxLDL对U937细胞SR-AⅠ及ABCA1mRNA表达的影响
目的 以人单核细胞株U937为研究对象,观察在氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下U937细胞清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)和ATP结合盒转运体A1(ABCAl)mRNA的表达情况.方法 以不同质量浓度的oxLDL(0、25、50、75、100、125 mg/L)与U937细胞共同培养48 h,然后进行油红O染色以了解其胞内脂质含量,同时用实时荧光定量PCR方法检测其ABCA1和SR-AⅠ mRNA的表达量.结果 单核细胞ABCA1和SR-AⅠ mRNA在无oxLDL干预下其表达低;oxLDL可诱导ABCA1和SR-A Ⅰ mRNA的表达,与无oxLDL干预组比较差异有统计学意义(P均＜0.01);ABCA1 mRNA在50 mg/L oxLDL干预下表达强,其后随着oxLDL培养浓度的增加其表达反而下降;SR-AⅠ mRNA表达为逐渐增高,50 mg/L oxLDL干预时表达强.结论 U937细胞随着oxLDL干预浓度的提高其ABCAl mRNA和SR-AⅠ mRNA表达呈先增高后降低的趋势,在50 mg/LoxLDL时表达高;二者在泡沫细胞形成过程中起着非常重要的作用.
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丹红注射液对U937细胞SR-AⅠ及ABCA1 mRNA表达的影响
目的 以人单核细胞株U937细胞为研究对象,观察不同浓度丹红注射液对U937细胞清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)和ATP结合盒转运体A1( ABCA1)mRNA表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的机制.方法 以100 nmol/L佛波酯诱导U937细胞48 h使其分化为巨噬细胞,再以50 mg/Lox-L DL(氧化低密度脂蛋白)孵育细胞的同时加入不同浓度丹红注射液或其他干预因素处理24 h,用实时荧光定量PCR方法检测其SR-A Ⅰ和ABCA1 mRNA的表达量.结果 与50 mg/L ox-LDL组比较,LXR-a(肝X受体激动剂)(T-090137)干预组U937细胞SR-A ⅠmRNA表达下降、ABCAl mRNA表达升高,但SR-A Ⅰ mRNA的表达无统计学意义(P＞0.05),而ABCAl mRNA的表达有统计学意义(P＜0.01);3.0 mL/L丹红注射液干预组U937细胞SR-A Ⅰ mRNA的表达升高,10.0、30.0、60.0 mL/L丹红注射液于预组U937细胞SR-A Ⅰ mRNA的表达逐渐下降,但各浓度组均无统计学意义(P＞0.05);丹红注射液干预组ABCAl mRNA的表达则呈浓度依赖性升高,但于60.0mL/L浓度时出现表达下降,3.0、10.0、30.0 mL/L干预组有统计学意义(P＜0.05).与LXR-a(肝X受体激动剂)(T-090137)干预组比较,丹红注射液各浓度干预组ABCAl mRNA表达降低,10.0、30.0 mL/L丹红注射液干预组ABCA1 mRNA的表达无统计学意义(P＞0.05).结论 丹红注射液各浓度组对50 mg/Lox-LDL干预的U937细胞SR-A Ⅰ mRNA的表达无影响,而明显增加U937细胞ABCA1 mRNA表达,尤其在浓度10.0、30.0 mL/L时增加ABCA1 mRNA表达明显.增加U937细胞ABCA1 mRNA表达可能是其抗动脉粥样硬化的重要机制.
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嵌合腺病毒体外对人白血病细胞 U937的感染及生长抑制作用
目的研究嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP对人白血病细胞U937的感染及生长抑制作用。方法以空载体腺病毒Ad5GFP作为对照，将嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP感染人白血病细胞株U937，通过荧光倒置显微镜、流式细胞术和透射电镜分析病毒对U937细胞的感染性和复制活性；应用细胞计数试剂盒（CCK-8）分析细胞的增殖反映该病毒对细胞的杀伤作用；通过AnnexinV-APC/7-AAD双染流式细胞术分析早期细胞凋亡率，并采用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP ）的裂解。结果嵌合腺病毒Ad5f11pT PEGFP能感染人白血病细胞株U937，并能在其中复制产生大量子代病毒；该嵌合腺病毒对 U937细胞株的感染效率、生长抑制率均高于空载体腺病毒 Ad5GFP ，差异有统计学意义（P ＜0．05）；嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP诱导U937细胞发生凋亡的细胞比例较空载体腺病毒 Ad5GFP高，差异有统计学意义（P ＜0．05），并且检测到随时间逐渐增加的PARP裂解蛋白。结论嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP可有效感染人白血病细胞株U 937，并能在其中复制，能显著抑制人白血病细胞株U 937生长并诱导其凋亡。
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巨噬细胞对内皮细胞系同源盒B2基因和血管内皮生长因子受体mRNA及整合素ανβ3表达的影响
目的体外观察巨噬细胞(M)对血管内皮细胞同源盒(HOX)B2基因mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR mRNA及整合素ανβ3表达的影响. 方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞系ECV304,分为(1)ECV304组;(2)ECV304+伴刀豆球蛋白A(conA,终浓度25 mg/L)组;(3)ECV304+人M系U937组:ECV304细胞中加入1×105/ml U937细胞;(4)ECV304+U937+conA组:ECV304中加入1×105/ml U937细胞及终浓度25 mg/L的conA.反应48 h后,用免疫荧光技术检测各组ECV304细胞整合素ανβ3的表达情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞KDR mRNA和HOXB2基因mRNA的表达水平. 结果 ECV304组细胞的整合素ανβ3、KDR mRNA及HOXB2基因mRNA的表达水平分别为6.7±1.5、0.633±0.012、0.674±0.004.ECV304+U937+conA组细胞上述指标较ECV304组均明显上调(P<0.01),分别为10.2±1.7、0.879±0.003、0.947±0.003.其余两组细胞上述指标与ECV304组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论被conA活化的M通过影响内皮细胞的KDR mRNA、HOXB2 mRNA基因及整合素ανβ3的表达,来促进内皮细胞增殖、迁移及与基质黏附,从而调节血管生成.
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白藜芦醇对U937细胞基质金属蛋白酶-9转录的抑制作用
目的:观察白藜芦醇对佛波酯诱导的U937细胞中基质金属蛋白酶-9活性的影响,并从蛋白、mRNA及核转录因子激活蛋白-1(AP-1)水平对其影响进行分析.方法:酶谱法测定U937细胞培养上清中MMP-9的活性;Western blot法考察MMP-9蛋白的生成;RT-PCR法检测MMP-9 mRNA的表达;电泳迁移率变动分析法(EMSA)研究核转录因子AP-1的活性.结果:PMA 10 nmol/L可显著诱导无血清培养的U937细胞中MMP-9活性(P＜0.01);白藜芦醇在1和10 μmol/L浓度下可抑制PMA 10 nmol/L诱导的MMP-9活性(P＜0.05和P＜0.01);PMA 10 nmol/L可显著诱导U937细胞中MMP-9蛋白生成(P＜0.01)和MMP-9 mRNA的表达(P＜0.01),白藜芦醇在l、10 μmol/L浓度下可抑制PMA l0 nmol/L诱导的MMP-9蛋白生成和MMP-9 mRNA的表达(P＜0.05);白藜芦醇在10、1和0.1 μmol/L浓度下可抑制PMA诱导的U937细胞中AP-1的活化.结论:白藜芦醇可有效地抑制PMA诱导的U937细胞中MMP-9的活性,其作用可能是通过抑制PMA诱导的U937细胞核转录因子AP-1活化,进而降低MMP-9 mRNA表达,减少MMP-9蛋白生成而实现的.
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靶向miRNA-214反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用
目的 探讨以miRNA-214为靶点的反义核酸对白血病U937细胞的生长抑制作用及可能的作用机制.方法 人工合成miRNA-214的反义核酸序列,硫代修饰,以Lipofectamine 2000为介导转入U937细胞.MTT细胞毒性检测U937细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡水平,荧光定量PCR 检测miRNA-214的表达水平.结果 MTT检测结果显示,转染反义核酸后24、48、72 h,U937细胞的增殖活性显著下降(0.812±0.001、0.770±0.002、0.541±0.001),与随机对照组(1.011±0.002、1.112±0.003、1.111 ±0.003)、空白对照组(1.112±0.001、1.023±0.001、1.101±0.001)相比较差异均有统计学意义( F=2.782、3.659、2.735,P=0.021、0.018、0.036).流式细胞术检测结果表明,在转染反义核酸48 h后细胞的凋亡水平随时间延长而提高(48、72 h分别为15.12±0.02、19.14±0.01),与随机对照组(2.04±0.02、2.45±0.03)、空白对照组(1.19±0.02、2.02±0.01)相比较差异均有统计学意义(F=3.683、3.762,P=0.013、0.015).荧光定量PCR结果证实,在反义核酸作用后,U937细胞内miRNA-214的相对表达水平明显下降(31.1±0.2),与随机对照组、空白对照组的25.8±0.1、25.6±0.2相比较,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 以miRNA-214为靶点的反义核酸可抑制U937细胞的增殖活性,并明显促进细胞的凋亡.
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三磷酸腺苷诱导U937细胞凋亡机制的探讨
目的：探讨三磷酸腺苷(ATP)诱导U937细胞凋亡过程中p73 mRNA的表达变化，以进一步研究p73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法：用ATP诱导U937细胞凋亡，凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量及细胞周期的变化等方法；采用半定量反转录PCR(RT-PCR)检测p73 mRNA的表达变化。结果：ATP可诱导U937细胞凋亡。0.25 g／L的ATP作用于U937细胞24 h，光镜下见细胞出现较明显的聚集现象，胞膜皱缩，细胞体积缩小，Wright's+Giemsa．染色见胞核浓缩、核碎裂等现象，DNA片断电泳见清晰的梯形条带；流式细胞仪检测：0.25 g／L ATP作用于U937细胞24 h、36 h、48 h，细胞的凋亡率分别为2.33％、11.90％、35.49％，并使细胞阻滞在G2～M+S期，而对照组细胞凋亡率仅为1.09％；半定量RT-PCR结果：与对照组相比，仅48 h组p73 mRNA的表达下调。结论：ATP可诱导U937细胞凋亡。在U937细胞凋亡早期，p73 mRNA表达差异无显著性。
