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蛋白激酶C在培养神经元突起生长中的作用
为探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在神经再生中的作用,本研究在对培养神经元生长规律与PKC活性作相关分析的基础上,观察PKC活性改变对原代培养的脊髓前角神经元突起生长状态的影响.以5-氟尿嘧啶(5-Fu)抑制有丝分裂代替免疫淘汰法提高神经元的纯度进行胎鼠脊髓前角神经元的原代培养.
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脑溢安对谷氨酸致神经元损伤的保护作用
目的探讨中医平肝熄风,凉血泻火治法的抗神经损伤机理.方法建立谷氨酸致体外培养的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,并用脑溢安含药血清、细胞外调节蛋白激酶(ERK)阻滞剂PD 98059进行干预,分别检测各组神经元活化的ERK、c-jun氨基末端激酶(JNK)水平及上清液LDH活性.结果脑溢安含药血清能上调谷氨酸损伤后的大鼠海马神经元ERK水平,下调JNK水平,PD98059能阻断脑溢安对受损经元的保护作用.结论以平肝熄风、凉血泻火为主要治法的脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠海马神经元损伤后的保护作用与MAPK信号转导途径有关,脑溢安上调ERK表达,下调JNK表达,促进细胞生存.
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中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层神经元的保护作用
目的观察中药抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层神经元的保护作用.方法体外培养的大鼠大脑皮层神经元,模拟脑缺血再灌注损伤中缺血4 h及再灌3、18、24、48、72 h,观察其活性、存活率、死亡率、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率和一氧化氮合成酶(NOS)的活性变化以及中药抗呆Ⅰ号的影响.结果体外培养的大鼠大脑皮层神经元随缺血和再灌注时间的延长,细胞存活率逐渐下降、死亡率逐渐升高、培养液中LDH的漏出率逐渐升高,细胞NOS的活性在缺血4 h和再灌3 h时显著增高.抗呆Ⅰ号可影响其上述指标的变化.结论抗呆Ⅰ号可能通过防止氧化磷酸化脱偶联而保护线粒体,防止脂质过氧化及通透性增加而保护细胞膜,抑制NOS活性的反应性增强而防止NO及其衍生的毒性自由基的损伤等,而发挥对神经元的保护作用.
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牛磺酸对幼鼠脑神经保护作用和机制研究
目的观察牛磺酸(Tau)对幼鼠脑神经的保护作用,并对其可能机制进行探讨.方法用0.1 μmol/L亚硒酸钠与不同浓度的Tau共同加入到原代培养2 d的新生小鼠大脑皮质神经元中,用MTT检测和DNA片段琼脂糖凝胶电泳法分析其保护性作用;并选用健康清洁级、断乳SD雌鼠32只,按体重随机分为4组,分别饲予补充不同水平Tau的实验饲料,观察对照组及补充Tau组幼鼠脑发育及代谢的影响.结果 1.Tau可明显提高神经元的存活率;2.一定浓度的Tau可阻断或部分阻断由亚硒酸钠诱导的典型DNA梯型;3.Tau可促进脑细胞的增殖活性,增加脑重;4.补充Tau能明显提高脑Tau积累、蛋白质和AChE水平,且有一定的剂量反应关系.结论补充Tau具有较强的神经保护作用,可能是通过改变某些蛋白质即某些基因的表达而实现的.
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丹红注射液治疗UAP患者临床疗效观察及对血浆可溶性Fas及Fas配体浓度的影响
不稳定型心绞痛(UAP)是介于劳累性稳定型心绞痛与急性心肌梗死(AMI)和猝死之间的临床表现[1].细胞凋亡参与UAP的病理生理过程[2].丹红注射液为丹参、红花等提取物的中药注射剂,具有活血化瘀、通脉舒络等功能,常用于UAP的救治[3-5].近研究显示,丹红注射液具有抗凋亡作用,能抑制体外培养神经元内质网应激所致凋亡[6].本文观察丹红注射液对UAP患者的治疗效果同时揭示其对血浆可溶性Fas及Fas配体浓度的影响,从而探讨其用于UAP治疗的抗凋亡作用.
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蛋白激酶A在培养胎鼠皮层神经元缺氧凋亡中的作用
目的探讨培养神经元缺氧后蛋白激酶A(PKA)活性变化及其与神经元凋亡的关系.方法建立体外培养大鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用3种不同浓度的PKA抑制剂(Rp-cAMP)、在不同的缺氧时相点观察神经元下述指标的改变:神经元细胞膜和细胞质中PKA的活性、caspase-3(CPP32)和TUNEL表达 (细胞凋亡) 的规律.结果随着缺氧时间的延长,培养神经元细胞膜PKA的活性显著增加,同时caspase-3和TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度均显著升高,而应用Rp-cAMP后细胞凋亡情况显著减轻.结论①PKA和caspase-3均参与了缺氧诱导的神经元凋亡;②PKA抑制剂Rp-cAMP可减轻缺氧诱导的神经元凋亡;且该作用是通过caspase-3信号转导途径实现的; ③PKA的激活在缺氧诱导的神经元凋亡中起促发作用.
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5-LO过表达神经细胞对铝盐损伤的易感性观察
目的:初步观察5-LO过表达神经细胞对铝盐损伤的易感性.方法:以铝盐和原代海马-皮层神经元混合培养,通过检测LDH漏出率、MTT吸光度以及病理形态学变化来评价铝负荷对原代皮层-海马混合培养神经元的毒性作用,建立铝盐致神经细胞损伤模型.把原代皮层-海马混合培养神经元与携带5-LO重组体的腺病毒共同培养,观察5-LO过表达的神经元对铝负荷损伤的易感性.结果:皮层-海马混合神经元在与铝盐混合培养24小时后,吸光度值较正常组明显降低,其上清液LDH活性明显升高,神经细胞数目减少,细胞核固缩,细胞突起变少,咖啡酸大剂量(10-6mol/L)和中剂量(10-7mol/L)有显著的保护作用.
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Homer与缺血性脑损伤中谷氨酸、γ-氨基丁酸相关性研究
目的 探讨Homer与神经元缺血性损伤中谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)相互关系.方法 培养大鼠脑皮层原代神经元,先分为对照组、空载体组和Homeda siBNA转染组,检测Homerla变化.再将上述三组各分成正常组,缺氧缺血再灌注损伤后30 min、1 h、3 h、12 h、24 h、48 h共7小组,并进行Glu、GABA和Homerla的检测.结果 ①转染组神经元Homeda表达量明显减少;②损伤中,乳酸脱氢酶(LDH)活性增强;与其它两组比较,转染组培养液LDH活性低;③损伤中,Gh和GABA与LDH变化正相关;Glu和Homerla的变化成反比;而GABA和Homeda的变化成正比.结论 缺血性神经元损伤后,Homerla蛋白不仅调控Glu变化,还通过调控GABA变化保护神经元,在兴奋性和抑制性神经递质平衡中发挥重要作用.
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ATP对培养的胚胎小鼠脊髓神经元的影响
目的:研究ATP对神经元的活性、神经突起及神经元分泌的影响. 方法:用不同浓度ATP加入培养的胚胎小鼠脊髓神经元培养液中,用四唑盐比色法(MTT)和图像分析系统测不同浓度组神经元的活性和突起长度,100 mmol/L ATP组和1 mmol/L ATP组的培养液行毛细管电泳. 结果:不同浓度ATP对神经元的影响不同. ①高浓度ATP可抑制神经元的活性;低浓度ATP可促进神经元的活性. ②高浓度ATP抑制神经突起的生长;其它浓度ATP对神经突起的生长无影响. ③100 mmol/L ATP和1 mmol/L ATP组培养液中有不同的蛋白类物质. 结论:ATP对脊髓神经元的影响有浓度依赖性,不同浓度ATP对脊髓神经元的影响不同,高浓度ATP和低浓度ATP分别刺激神经元分泌不同的蛋白类物质.
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Rp-cAMP与缺氧神经元Bcl-2表达和细胞凋亡关系的研究
目的探讨培养神经元缺氧后蛋白激酶A(PKA)活性变化及其与神经元缺氧凋亡的关系.方法建立体外培养Wistar大鼠胎鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,用不同浓度的PKA抑制剂(Rp-cAMP),在不同的缺氧时相点观察神经元细胞膜和细胞质中PKA的活性、Bcl-2和TUNEL表达的规律.结果随着缺氧时间的延长,培养神经元细胞膜PKA的活性显著增加,Bcl-2表达降低,TUNEL荧光染色阳性率及平均荧光强度显著升高.而应用Rp-cAMP后细胞凋亡情况显著减轻.结论 PKA和Bcl-2均参与了缺氧神经元凋亡;PKA抑制剂Rp-cAMP可减轻缺氧神经元凋亡,且该作用与Bcl-2表达降低有关;PKA的激活在缺氧神经元凋亡中起促发作用.