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脑溢安对大鼠脑出血后Caspase-3表达的影响
目的:观察脑出血后Caspase-3的表达及中药制剂脑溢安的干预作用.方法:用VⅡ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型,用免疫组织化学法观测脑内Caspase-3表达的阳性神经元细胞与数目.结果:大鼠脑出血后12h Caspase-3表达增加,24h Caspase-3达到高峰,2d、4d Caspase-3逐步降低,7d仍有表达,均高于假手术组(P<0.01).脑溢安治疗组在脑出血后各时间点均较模型组明显减低(P<0.05).结论:大鼠脑出血后Caspase-3表达增加,脑溢安对Caspase-3有抑制作用.
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脑溢安对脑出血大鼠脑内碱性成纤维生长因子mRNA和肿瘤坏死因子蛋白表达的影响
目的:探讨脑溢安颗粒(简称脑溢安)对脑出血大鼠脑内碱性成纤维生长因子(bFGF)mRNA和肿瘤坏死因子(TNF)蛋白表达的影响.方法:用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型,进行行为学计分、Northern blot、Western blot及吸光度扫描测定相关指标.结果:模型组的行为学计分在术后24h开始降低,7d时明显降低(P＜0.05),脑溢安组3d即有明显的降低(P＜0.05);模型组、脑溢安组bFGF mRNA和TNF蛋白表达在3d时达到高峰,7d时逐渐减弱,而脑溢安组在各个时间点的表达均强于模型组.结论:脑溢安治疗脑出血能增强bFGF的表达,抑制TNF蛋白表达,从而使行为学得到改善,这可能是脑溢安促进神经功能修复的主要机制之一.
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脑溢安对谷氨酸致神经元损伤的保护作用
目的探讨中医平肝熄风,凉血泻火治法的抗神经损伤机理.方法建立谷氨酸致体外培养的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,并用脑溢安含药血清、细胞外调节蛋白激酶(ERK)阻滞剂PD 98059进行干预,分别检测各组神经元活化的ERK、c-jun氨基末端激酶(JNK)水平及上清液LDH活性.结果脑溢安含药血清能上调谷氨酸损伤后的大鼠海马神经元ERK水平,下调JNK水平,PD98059能阻断脑溢安对受损经元的保护作用.结论以平肝熄风、凉血泻火为主要治法的脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠海马神经元损伤后的保护作用与MAPK信号转导途径有关,脑溢安上调ERK表达,下调JNK表达,促进细胞生存.
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脑溢安对脑缺血大鼠脑组织MMP-2,9表达的影响
目的 观察脑溢安对脑缺血大鼠脑组织的基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,参考Longa5分制法在动物麻醉清醒后进行评分,免疫组化染色检测脑组织MMP-2,9蛋白的表达.结果 脑缺血组大鼠伤侧脑组织基质金属蛋白酶(MMP-2,9)的表达水平明显高于假手术组(P<0.05).治疗组基质金属蛋白酶(MMP-2,9)的表达水平明显低于脑缺血组(P<0.05).结论 脑溢安能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织中MMP-2,9蛋白表达,减轻缺血再灌注损伤.
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实验性脑出血大鼠脑内ICAM-1表达及脑溢安的保护作用
[目的]研究实验性脑出血大鼠脑内ICAM-1表达的变化及脑溢安对其的影响.[方法]Ⅶ型胶原酶立体定位法建立大鼠脑出血模型,分别观察ICAM-1原位杂交和Westem blot的变化及脑溢安对其的干预作用.[结果]模型组可见ICAM-1表达增强,脑溢安能明显降低ICAM-1的表达(P<0.01).[结论]实验性脑出血大鼠脑内ICAM-1表达增强,脑溢安对其具有保护作用.
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脑溢安对脑出血大鼠脑内bFGF表达的影响
目的探讨国家三类新药-脑溢安颗粒(NYA)对脑出血大鼠脑内碱性成纤维因子(bFGF)蛋白和mRNA表达的影响,从而为治疗脑出血, 促进神经功能的修复提供理论依据.方法用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型,并进行行为学计分、免疫组化、 Northern blot及吸光度扫描.结果模型组的行为学计分在术后24 h时开始降低, 7 d时明显降低, 脑溢安组在3 d时明显降低; 免疫组化结果显示, bFGF蛋白和mRNA的表达在3 d时达到高峰, 7 d时逐渐减弱, 脑溢安组在各个时间的表达均强于模型组.结论脑溢安治疗脑出血能增强bFGF的表达, 从而使行为学得到改善, 这可能是脑溢安促进神经功能修复的主要机制之一.
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脑溢安对大鼠舌下神经压榨伤后神经元型一氧化氮合酶nNOS表达的影响
目的:观察大鼠舌下神经压榨伤后,舌下神经核内nNOS的表达变化及中药脑溢安对其表达的影响.方法:建立大鼠舌下神经压榨伤模型,脑溢安治疗组用脑溢安药液灌胃,正常对照组和实验对照组用灭菌生理盐水灌胃.采用NADPH-d组化+中性红复染组织化学方法,分别于第1、4、7、14天检测舌下神经核内nNOS表达变化.结果:正常对照组大鼠两侧舌下神经核内均未检测到nNOS免疫阳性细胞;与生理盐水对照组相比,脑溢安治疗组损伤后第4、7、14天损伤侧舌下神经核内阳性细胞数少,细胞成活率高,有统计学差异(P<0.05).结论:脑溢安降低大鼠舌下神经压榨伤后神经元胞体nNOS的表达.
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脑溢安对脑出血大鼠脑源性神经营养因子蛋白表达的影响
目的:观察脑出血模型大鼠脑内脑源性神经营养因子(BDNF)的分布以及中药脑溢安对其影响.方法:通过微量注射器向苍白球内注入Ⅶ型胶原酶0.4 U建立脑出血模型,用免疫组织化学法观察脑出血后2 h, 6 h, 12 h, 1 d, 4 d, 7 d,6个时间点BDNF的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标.结果:脑出血后2 h,BDNF主要表达于血肿周围的小胶质细胞,6 h表达开始增高,12 h后达高峰,以后逐渐降低,到第7天模型组和脑溢安组仍有表达,其中在12 h,1 d,4 d,3个时间点上,两组阳性细胞计数比较差异有显著性(P<0.05).结论:脑溢安可促进脑出血后BDNF蛋白的表达.
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脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用
目的:研究中药复方脑溢安对培养大鼠皮层神经元谷氨酸兴奋毒损伤的保护作用,为脑溢安用于治疗中风提供实验依据.方法:建立谷氨酸致离体培养的大鼠皮层神经元兴奋毒损伤模型,用中药脑溢安浸膏粉含药血清进行干预,检测各组细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果:脑溢安浸膏粉含药血清能显著地对抗培养皮层神经元的谷氨酸兴奋毒损伤,培养液中LDH活性明显降低(P<0.01).实验过程中,含药血清加入量5%至20%均可.致神经元损伤的谷氨酸浓度以1 mmol*L-1以下为宜.结论:脑溢安含药血清对谷氨酸致培养皮层神经元损伤具有明显保护作用.
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实验性脑出血大鼠脑内皮质核因子-κB的表达及脑溢安的保护作用
目的研究实验性脑出血大鼠脑内核因子-κB(NF-κB)p65及IκBα表达的变化及脑溢安对其影响.方法 95只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和脑溢安组.Ⅶ型胶原酶立体定位法建立脑出血模型,术后3h、6h、12h、1 d、4d、7d分别观察NF-κB p65和IκBα免疫组织化学的变化.结果模型组术后3h即可见NF-κB p65和IκBα表达增强,1d后显著增多,4d达高峰,7d迅速下降.脑溢安组表达规律与模型组一致,但与模型组比较能明显降低NF-κB p65的表达和增加IκBα的表达(P<0.01).结论实验性脑出血大鼠脑内NF-κB p65和IκBα表达增强,脑溢安对其具有保护作用.
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脑溢安干预大鼠脑出血对丝氨酸/苏氨酸激酶表达影响的研究
目的观察脑出血后丝氨酸/苏氨酸(Serine/threonine Kinase Akt)的表达及中药制剂脑溢安的干预作用.方法用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型,用免疫组织化学法观测脑内有Akt表达的阳性神经元细胞与数目.结果大鼠脑出血后12?h时Akt开始表达增加,4?d时Akt达到高峰,7?d时仍有表达均高于假手术组(P<0.01).脑溢安治疗组在脑出血后24?h、2?d、4?d、7?d各时间点Akt的表达均较模型组明显增高(P<0.05).结论大鼠脑出血后Akt表达增加,脑溢安对Akt有上调作用.
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高效液相色谱法测定脑溢安浸膏在大鼠体内大黄酸的含量
目的建立大鼠血清大黄酸的高效液相分析法,测定不同次数口服给予脑溢安浸膏血清中大黄酸的含量.方法大鼠单次给2?g脑溢安浸膏和4?d?7次给药(1?g/次,2次/d),于不同时间心内取血用HPLC测定大黄酸含量;HPLC条件:C 18柱,以0.1%磷酸-甲醇(30∶70)为流动相,紫外检测波长435?nm.结果单次与多次给药均在1?h给药后达到高血药浓度,但单次给药血药浓度迅速下降,而多次给药可维持较长时间的血浓平台.大黄酸在0.032～4.8?mg@L -1范围内呈线性,r=0.999,阴性无干扰,精密度RSD为1.83%,加样回收率为96.9%.结论检测方法简便、灵敏、准确、稳定;本品以每日2次,连续给药为宜.
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脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶表达的影响
探讨脑溢安对出血性中风大鼠脑内磷酸化蛋白激酶(P-C-Jun)表达的影响和治疗机理。根据Roserberg法复制大鼠脑出血模型，采用免疫组织化学方法观察脑出血后梨状皮质内P-C-Jun的表达变化，并用组织病理学方法分析脑皮质内神经元的损伤状况。结果：脑溢安治疗组较模型组脑内P-C-Jun蛋白表达弱，神经元受损状况轻。结论：脑溢安下调脑内P-C-Jun蛋白表达，从而干预了丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号转导通路。
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脑溢安对大鼠脑出血后神经生长因子和白细胞介素-1β表达的调节作用
目的:观察脑出血后神经生长因子(NGF)和白细胞介素-1 β(IL-1 β)的表达及中药制剂脑溢安的干预作用.方法:用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型,通过Northern杂交与ELISA方法检测出血后脑内NGF与IL-1 β mRNA及其蛋白的表达与含量.结果:大鼠脑出血后第1 d NGF与IL-1 β mRNA表达增加,第2 d NGF mRNA下降至正常组水平,第4 d、7 d低于正常组水平;IL-1 β mRNA下降缓慢,至第7 d始降至正常组水平.NGF和IL-1 β蛋白含量在出血后第1 d显著增高,至第7 d仍高于正常水平.脑溢安治疗组NGF mRNA与蛋白含量变化同模型组,IL-1 β mRNA和蛋白在出血后各时间点均低于模型组.结论:大鼠脑出血损伤后NGF与IL-1 β表达水平增加.脑溢安对IL-1 β表达有抑制作用,对NGF上增性表达有维持作用.
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脑溢安对脑出血大鼠脑内GDNF蛋白及mRNA表达的影响
目的观察脑出血模型大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白和mRNA的分布及中药脑溢安对其影响.方法通过微量注射器向苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.4u建立脑出血模型,用免疫组织化学方法和原位杂交法分别观察脑出血后2 h,6 h,1 d,4 d,7 d,14d共6个时间点GDNF蛋白及mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标.结果脑出血后2hGDNF蛋白主要表达于血肿周围的星型胶质细胞,6h表达开始增高,1 d达高峰,以后逐渐降低,GDNF蛋白到第7天基本恢复到正常水平,14d后GDNF阳性细胞消失;在1 d,4d两个时间点上,两组阳性细胞计数比较差异有显著性(P＜0.05);而GDNFmRNA主要表达于神经元,1 d后达高峰,7d后两者的表达水平继续下降但仍高于正常,14d后降至基础水平,在6 h,1 d,4 d三个时间点上,两组阳性细胞计数比较差异有显著性(P＜0.01).结论脑溢安可促进脑出血后GDNF蛋白及mR-NA的表达.
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脑溢安对出血性中风大鼠脑内MAPK信号转导通路的影响
目的:探讨脑溢安对出血性中风大鼠脑内丝裂原活化的蛋白激活酶(mitorgen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路的影响.方法:根据Rosenberg法复制大鼠脑出血模型,采用免疫共沉淀、激酶方法,Western blot检测脑出血大鼠海马ERK、JNK激酶活性变化及脑溢安对ERK、JNK激酶活性的影响.结果:脑溢安下调脑出血大鼠海马活化的JNK蛋白表达,上调活化的ERK蛋白表达.结论:中药脑溢安对脑出血大鼠海马组织MAPK信号转导通路起双重调节作用,表现为促进ERK生存通路,抑制JNK凋亡通路.
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脑溢安对过氧化氢损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用
目的建立体外培养大鼠脑微血管内皮细胞过氧化氢损伤模型,并观察含脑溢安血清对其影响.方法体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,并用6个浓度的过氧化氢分别作用4个时间点,用MTT比色法根据测得的OD值选择适宜的损伤条件.用含脑溢安血清及PDTC干预培养细胞,再进行过氧化氢损伤,运用MTT法记录OD值.结果 0.125mmol/L过氧化氢作用30min即可造成培养大鼠脑微血管内皮细胞损伤,用5%含脑溢安血清及50μmol/L PDTC提前干预后其OD值明显高于模型组(P＜0.01).结论建立一种简便的大鼠脑微血管内皮细胞活性氧损伤模型,发现脑溢安可显著减轻过氧化氢造成的损伤.
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脑溢安对试验性脑出血大鼠血管内皮生长因子表达的影响
目的研究实验性脑出血大鼠脑内血管内皮生长因子(VEGF)的时空分布及中药脑溢安的影响.方法通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.4U建立脑出血模型,运用免疫组化和原位杂交法检测脑出血后3h、6h、12h、1d、4d、7d,14d七个时间点VEGF的表达变化,以阳性细胞数作为观察指标.结果脑出血3hVEGF开始表达,6h增强,12h及1d阳性细胞达到高峰,4d开始下降,到7d和14d仍有少量表达.脑溢安组在6h、12h、1d、4d高于模型组(P＜0.05).结论脑出血后脑内VEGF表达增加;脑溢安可上调脑出血后VEGF 的表达,可能是其神经保护机制之一.
