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乳腺肿瘤组织中bcl-2和PCNA表达的临床意义
乳腺癌的发病率在逐年快速上升[1],但对其交界性病变(不易鉴别良恶性的乳腺肿瘤[2])和有些腺瘤的鉴别认识不足.本文对三者进行bcl-2、PCNA免疫组化检测,结合临床病理资料,探索这两项指标与术后患者生存时间的关系.
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与判断肿瘤预后有关的免疫组化标志物
肿瘤标志物是病理学研究的热点之一,当前所涉及的肿瘤标志物种类繁杂,方法多样,结果不一.本文力争从实用性出发,对目前多数医院已能常规开展的免疫组化检测中与判断肿瘤预后有关的标志物进行综述.
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p16过表达可识别HPV阳性的外阴鳞状细胞癌(英)
根据与人乳头状病毒(HPV)的关系,外阴鳞状细胞癌可分为两类:HPV相关的基底细胞样癌或疣状癌和非HPV相关的分化性角化型癌.近来提出用p16和p53的免疫组化染色来区分这两类外阴鳞癌.为评价免疫组化在外阴鳞癌分类中的作用、阐明这两类外阴鳞癌的临床病理特征,本课题对92例外阴鳞癌进行了p16、p53的免疫组化染色,并用2组不同引物PCR对HPV进行检测和分型.92例中16例检测出HPV(17.4%),其中HPV16占阳性病例的75%.组织学与HPV检测结果之间存在较大差异,HPV阳性病例的37.5%表现为角化型,而HPV阴性病例的9.2%显示基底细胞样或疣状型.p16和p53阳性表达率在HPV阳性肿瘤中分别为100%和6.2%,而在HPV阴性肿瘤中分别为2.3%和64.5%.p16免疫组化检测HPV相关性癌的敏感性和特异性(分别为100%和98.7%)优于组织学标准(分别为93.8%和35.5%)和p53阴性染色(分别为62.5%和93.4%).基底样/疣状型3级外阴上皮内肿瘤见于53.8%的HPV阳性肿瘤,其中包括3例角化型肿瘤.所有这些病例均为p16阳性和p53阴性.分化型3级外阴上皮内肿瘤见于45.6%的HPV阴性肿瘤,其中90.8%为p53阳性,而所有病例p16阴性.HPV阳性与阴性肿瘤在年龄、分期和复发上无差异.总之,目前的HPV阳性和阴性外阴鳞癌的形态学标准有很大的重叠.p16免疫组化染色是一个检测HPV阳性外阴鳞癌的可靠方法,对组织学分类判定有帮助.
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肺癌右髂骨转移超声表现1例
患者女,56岁.以咳嗽、咳痰、胸闷、气短15d入院.既往有肺结核病史,15岁患肺结核,抗结核治疗6个月.体征:左肺下闻及湿啰音,右髂前上棘轻度压痛,PET-CT右肺下叶不规则高密度影,右髂骨破坏,周围软组织密度影,代谢增高.血CEA:168.72 ng/ml.超声检查:右髂前上棘内侧可见6.8cm×6.2cm的不均匀囊实混合性回声,其内见液化及钙化样强回声,后方回声增强,周边细线样强回声包绕(图1),CDFI:血流较丰富,可检出动静脉血流.超声提示:右髂部囊实混合性病变:(1)恶性骨肿瘤;(2)骨结核.局麻下行超声引导穿刺活检:肉眼可见:细条状组织大小约0.3 cm×0.1 cm,3小条,光镜下:组织碎小,小块变性骨及横纹肌肌间可见散在排列成片的癌细胞,病理诊断:有髂部转移癌,结合免疫组化检测结果考虑肺转移癌(图2).
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叶酸对胚胎大鼠心脏细胞凋亡及 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响
目的::观察叶酸对妊娠大鼠心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,在细胞水平探讨叶酸预防先天性心脏畸形的作用及机制,为临床应用叶酸预防出生缺陷性疾病提供理论和实验依据。方法:成年雌性SD大鼠40只,随机分为对照组、大、中、小剂量叶酸组。叶酸组受孕后灌胃给予2、1、0.5 mg/kg/d等不同剂量叶酸,自受孕日开始持续10天。 ED13.5天处死大鼠并取胎鼠心脏,常规制备组织切片,免疫组化检测Bax、Bcl-2的表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,叶酸干预组的细胞凋亡率、Bax表达均明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达显著增高(P<0.05);叶酸不同剂量组间比较,Bax和Bcl-2蛋白表达、细胞凋亡率在大、中剂量组与小剂量组差异显著(P<0.05),大剂量组与中剂量组比较差异无统计学意义( P>0.05)。结论:叶酸干预可降低胎鼠心肌细胞的凋亡率和Bax的表达,提高Bcl-2的表达。一定范围内,叶酸对Bax、Bcl-2表达及细胞凋亡率的影响与剂量有关联。叶酸抑制心脏细胞凋亡的作用可能与预防畸形的作用机制有关。
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罕见全身泛发神经纤维瘤病一例
患者男,54岁,因全身多发肿物50余年伴腰骶部肿物局部溃疡半月余,于2012-10-8入院,患者自幼出现全身多发肿物,随年龄增长渐增多增大,既往患者曾到多家医院就诊,诊断为神经纤维瘤,未行特殊处理。此次为解决腰骶部一肿物局部皮肤溃疡不愈合故来院住院,目的是仅行该溃疡肿物切除术。家族史:父亲、弟弟均患有神经纤维瘤病。查体:体温37.2℃,精神差,营养差,全身皮肤多发肿物,大小不等,于背部、胸腹部较密集,大者直径约10 cm,色红润,蒂部较细,触之柔软,站立位时下垂明显。另于腰骶部一肿物局部皮肤溃疡(图1),可见炎性渗
出,实验室检查结果无明显异常,腰骶部MRI检查示:(1)腰骶部皮下多发占位,考虑神经纤维瘤病伴液化、坏死;(2) L4~5、L5~S1椎间盘膨出。经神经外科医师会诊后考虑全身多发神经纤维瘤病(图2),建议腰骶部占位病变局部切除并送病检。完善术前准备后于2012-10-10行“腰骶部肿物摘除术”,术中见:肿物蒂部未见异常管道与脊柱相通,界限清,蒂部可见滋养肿物之血管,术后剖开肿物,可见均质似鱼肉样组织,但质韧。术后病理诊断为:神经纤维瘤病Ⅰ型(图3)。本例患者因经济条件限制,未行免疫组化检测,于术后1周伤口愈合良好后出院。 -
EB病毒与人类肿瘤的相关性研究
EB病毒(EBV)是从非洲儿童的恶性淋巴瘤细胞培养中发现的一种嗜人B淋巴细胞的疱疹病毒.该病毒在正常人群中的感染非常普遍,绝大部分感染者为健康携带状况[1-2].但国内外大量研究表明,EBV与Burkitt淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌等多种肿瘤发生有关.然而,新文献证实,初用于霍奇金淋巴瘤免疫组化检测EBV核抗原(EBNA)抗体2B4与MAGE-4存在交叉反应,因而对基于该抗体免疫组化检出的EBV与某些肿瘤相关的结论产生质疑,提出EBV不是乳腺癌病因的观点.此外,EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)治疗同种异体造血干细胞移植后发生淋巴组织增生性疾病效果明显,而在其他EBV相关肿瘤治疗方法和效果还有待研究.现对EBV的生物学特性、作用机制,EBV与各种肿瘤发生与治疗等方面的研究状况阐述如下.
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诱导HSP70减轻肠上皮细胞缺氧/再给氧的损伤
目的:观察热休克预处理诱导热休克蛋白70(HSP70)对肠上皮细胞(IEC-6)缺氧/再给氧损伤的影响,并探讨HSP70的细胞保护作用.方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为正常对照(C)、单纯缺氧/再给氧(H/R)及热休克预处理组(HS+H/R),免疫组化检测缺氧/再给氧后各组细胞HSP70表达程度,MTT法分析细胞活力,并检测细胞LDH漏出,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:与C组及H/R组比较,热休克预处理可明显诱导HSP70的产生(0.93±0.07 vs 0.20±0.04,0.39±0.08,P<0.01),热休克预处理可显著增加IEC-6细胞缺氧/再给氧处理后细胞活力(0.27±0.04 vs 0.24±0.02,P<0.05),LDH漏出减少(1021.29±207.06 vs 1419.90±393.07,P<0.05),细胞凋亡率也明显降低(7.8±1.6% vs 12.3±2.9%,P<0.05).结论:通过热休克预处理诱导HSP70表达,可明显减轻肠上皮细胞缺氧/再给氧损伤.防止肠上皮细胞缺氧/再给氧后细胞凋亡可能是其保护作用机制之一.
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胃癌与癌前病变CdX2基因蛋白表达的意义
目的:研究胃癌、胃黏膜异性增生组织中肠道特异性分化基因CdX2蛋白的表达及意义,探讨胃黏膜癌前病变癌变的分子机制.方法:应用多克隆抗体ABC免疫组化检测胃黏膜异性型增生36例、慢性浅表性胃炎35例、肠型胃癌30例及未分化型胃癌28例CdX2基因蛋白的表达.结果:CdX2基因蛋白在慢性胃炎中表达均为阴性;重度异型增生(68%)及肠型胃癌组(71%)CdX2蛋白表达阳性率较轻、中度异型增生组(13%,22%)、及未分化型胃癌组(35%)增高,差异有显著意义(P<0.01);但是,CdX2基因表达与胃癌的分期及淋巴结转移无关(P<.05).结论:CdX2基因过度表达与胃黏膜上皮细胞异型增生的形成及癌变有关,可能是胃癌发生的早期事件,特别是与肠型胃癌的形成关系密切.
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肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的体内研究
目的:研究干扰素-α(IFN-d)对肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响,观察IFN-α治疗后肝纤维化程度的变化.方法:用四氯化碳(CCl4)复制肝纤维化模型大鼠32只.造模8wk后处死6只作为模型对照组(E组),另外26只分为B、C两组,B组14只,给予IFN-α0.1MU/100g皮下注射8wk,C组12只,用等量的生理盐水注射8wk.治疗结束时用TUNEL法检测各组肝星状细胞凋亡情况,测定血清Ⅲ型前胶原水平、免疫组化检测Desmin、α-SMA、Ⅰ型胶原、TGF-β1等指标.结果:B组较其他组肝组织学改善明显,肝纤维化程度减轻,Ⅰ型胶原、TGF-β1的显色指数降低,肝星状细胞明显减少,Desmin与TUNEL双染色均阳性的细胞增多,凋亡指数增加,与C组相比,有显著差异.结论:IFN-d诱导HSC发生凋亡可能是其抗肝纤维化的机制之一.
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FK506对大鼠小肠移植排斥反应bcl-2/bax表达及预后的影响
目的:观察FK506对大鼠小肠移植排斥反应bcl-2/bax表达及预后的影响方法:选用近交系F344/N(RT Ⅰ1)和Wistar大鼠进行全小肠异位移植,随机分为对照组、同基因移植组(F344/N-F344/N)、异基因移植组(F344/N-Wistar)、FK506治疗组(F344/N-Wistar+FK506).观察大鼠的一般状况及存活时间,并于术后第3、5、7 d取移植,应用免疫组化检测术后移植肠组织中bcl-2及bax在的表达.结果:异基因移植组术后第3 d,bcl-2的表达显著低于对照组(P<0.05),并随着移植天数的增加,差异更加显著(P<0.01);bax的表达与对照组比较差异无显著性(P>0.05),但bcl-2/bax呈下降趋势,大鼠在术后第3、5、7 d病理学检查移植肠出现排斥反应,大鼠存活时间与其他3组有显著差异;FK506治疗组bcl-2及bax表达与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05).同基因移植组、FK506治疗组无明显排斥,可长期存话.结论:FK506能明显抑制小肠移植急性排斥反应的产生,显著地延长移植物存活时间.bcl-2表达水平可作为早期诊断急性排斥反应的一个有意义参考指标.
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三氧化二砷对鸡胚移植胆管癌生长的抑制作用
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鸡胚移植胆管癌生长的抑制作用及其机制.方法:建立胆管癌QBC939细胞株鸡胚移植模型,接种癌细胞后9d切取标本,比较As2O3作用组和对照组中瘤生长、血管生成情况,原位末端标记法检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组化检测核增生抗原(PCNA)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果:AS2O3作用组肿瘤生长和血管生成受到抑制,细胞凋亡增多、PCNA和VEGF表达减弱.结论:As2O3有抗胆管癌的作用.其机制与诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增生、癌组织VEGF表达以及肿瘤血管生成有关.
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大鼠肝细胞癌形成过程中Smad2/3的表达
目的:了解肝细胞癌(HCC)形成过程中smad2/3蛋白表达的变化.方法:免疫组化检测3'-甲基4-二甲基偶氮苯(DAB)诱发的HCC中smad2/3蛋白的表达,探讨smad2/3在HCC形成过程中的作用.结果:HCC形成过程中smad2在增生、不典型增生的胆管细胞、肝细胞内均有表达阳性率l00%(19/19),而smad3仅个别例中有局灶性表达,阳性率15.8%(3/19),二者有显著差异(P<0.01).8mad3主要在星状细胞中表达.癌细胞中smad2、3的阳性率分别为l00%(11/11),9.1%(1/11)(P<0.01).结论:增生、不典型增生的细胞产生的TGF-β可激活其下游的smad信号转导蛋白使其在细胞质中的表达增加,并可形成DNA结合复合物进入胞核调节基因的表达,从而实现TGF-β的增生调控作用.smad2的表达强弱与HCC发展呈正相关.smad3在间质形成和纤维化中发挥作用.
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胃癌细胞系幽门螺杆菌感染对金属蛋白酶表达的影响
目的:建立胃癌细胞系H.pylori感染动物转移体外模型,初步探讨H.pylori感染在胃癌转移过程中的可能作用及其机制.方法:将H.pylori活菌与胃癌细胞系BGC-823低转移细胞株C8细胞共培养后,行裸鼠接种,观察H.pylori感染组与未感染组移植瘤生长情况及裸鼠肝、肺转移情况,免疫组化检测两组移植瘤中MMP-2,MMP-3,TIMP-2及TIMP-3蛋白的表达.结果:H.pylori感染组移植瘤重量与未感染组比较有差异(P<0.05),病理检查示感染组2个肺转移,而未感染组无转移.免疫组化结果示感染组MMP-2,MMP-3,TIMP-2,TIMP-3蛋白的表达阳性率分别为:77.8±9.6%,64.5±6.9%,57.6±12.2%,40.0±9.2%;而未感染组分别为61.2±9.7%,53.1±5.8%,54.3±10.9%,53.0±6.6%,二者比较除TIMP-3蛋白的表达无显著性差异外,MMP-2、MMP-3、TIMP-2蛋白的表达均有显著性差异(P<0.05).结论:H.pylori感染能促使裸鼠移植瘤的生长及肺转移,建立了H.pylori感染与胃癌的动物转移体外模型;H.pylori感染可能通过促使转移正相关因子MMP-2、MMP-3表达增高,转移负相关因子TIMP-2蛋白表达降低,而在胃癌转移过程中发挥重要作用.
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幽门螺杆菌CagA蛋白与胃癌组织中Bcl-2、p53蛋白表达的关系
目的:CagA+H.pylori感染与胃癌的相关性在我国报道不一,且致癌机制不祥.本研究应用ELISA法检测H.pylori相关胃癌和慢性胃病血清中抗CagA抗体和免疫组化方法检测全部组织标本中Bcl-2、p53蛋白的表达,研究H.pylori CagA阳性株感染与胃癌、慢性胃病的相关性及与胃黏膜组织中Bcl-2、p53蛋白表达的相互关系,探讨H.pylori的致癌机制.方法:79例患者(胃癌50例、萎缩性胃炎17例、胃溃疡伴不典型增生5例、浅表性胃炎7例)胃镜诊断明确后取胃窦或病变部位活检,用于H.pylori的诊断、病理诊断及免疫组化检测Bcl-2、p53蛋白的表达.H.pylori的诊断采用快速尿素酶试验和ELISA法血清H.pylori抗体或病理Warthin-Starry银染色,两项阳性诊断为H.pylori阳性.用ELISA法检测患者血清CagA-H.pylori抗体,用免疫组化方法检测全部组织标本中Bcl-2、p53蛋白的表达.结果:胃癌组CagA+H.pylori感染阳性率86%(43/50)高于慢性胃病组45%(13/29)(P<0.01),有显著性差异.Bcl-2蛋白表达:胃癌组高于慢性胃病组(62% vs41%;P>0.05),胃癌CagA+组高于CagA-组(65% vs 43%;P>0.05),慢性胃病CagA+组显著高于Cagn-组(77%vs12%;P<0.01).p53蛋白表达:胃癌组显著高于慢性胃病组(54% vs 28%;P<0.05),胃癌CagA+组显著高于CagA-组(60% vs 14%;P<0.05),慢性胃病CagA+组显著高于CagA-组(46% vs12%;P<0.05).结论:胃癌患者CagA+H.pylori感染明显高于慢性胃病者,CagA+H.pylori感染与胃癌发生明显相关,而H.pylori的CagA可使癌前疾病组织中出现Bcl-2蛋白表达,且随着Bcl-2蛋白表达增加疾病的严重程度也增加,即在细胞恶性转化的早期阶段就发挥作用,并逐渐增强,导致胃上皮细胞增生增加,凋亡减少.增生的过程中继而出现p53基因的突变,即突变型p53蛋白表达增强,诱导凋亡作用减弱.
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msCs移植对扩张型心肌病TGF-β1、AT1、CYP11B2及心肌胶原表达影响的研究
目的:探讨经外周静脉途径移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, msCs)治疗扩张型心肌病心衰的可行性及对TGF-β1、AT1、CYP11B2及心肌胶原表达的影响。
方法:1.扩张型心肌病心衰动物模型的构建与鉴定SPF级近雄性SD大鼠采用腹腔注射ADR的方法构建DCM心衰模型。给药第10周对两组大鼠行心脏超声检查,心肌组织HE、Masson病理染色、心肌胶原分析及免疫组化检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,鉴定模型。2.骨髓间充质干细胞移植治疗扩张型心肌病将DCM大鼠经尾静脉注射含msCs的细胞悬液。于细胞移植第20周进行心脏超声检查,观察LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS。于末次移植后第20周末行心肌组织HE、Masson病理染色、心肌胶原分析及免疫组化检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,RT-PCR扩增Ⅰ、Ⅲ胶原、TGF-β1、AT1、CYP11B2基因片段,检测其mRNA的表达。数据进行统计学分析。 -
JAK2/STAT3通路对糖尿病心肌病的调节作用
目的:选取不同时期的2型糖尿病心肌病大鼠和同时期普通大鼠作对比,观察JAK2/STAT3通路在2型糖尿病心肌病中的动态演变。
方法:选取5周龄SD雄性大鼠70只,行腹腔胰岛素耐量试验(IPITT),适应喂养1W后,随机分为普通饮食组(对照组)30只和糖尿病组(DM组)40只,后者给予高脂饮食喂养,各组按照不同的处死时间点分别继续分为1、4、9、14、21周组。按照高脂饮食4 W联合一次小剂量STZ腹腔注射的方式建立2型糖尿病模型。各组大鼠处死前行超声心动图检查,检测观察左室舒张末内径(LVEDd)、左室射血分数(LVEF)、室间隔厚度(IVSd)、舒张期末左室后壁厚度(LVPWd)二尖瓣E/A及E’/A’等指标;行心导管检测,评估左室舒张末压(LVEDP)。经腹主动脉取血检测血糖、血脂、BNP。提取心肌组织蛋白行蛋白免疫印迹检测STAT3(Tyr705)和JAK2磷酸化程度,活化caspase3、Bcl-2、Bax的表达情况。进行H&E、Masson及天狼星红染色,以及免疫组化检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TUNEL法检测细胞凋亡等形态学实验。 -
血管内皮细胞生长因子表达质粒的构建及其促进烫伤愈合的研究
构建血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达质粒,并观察其表达产物对小型猪深度烫伤创面影响.采用PCR技术和DNA重组技术,从胎肝细胞内将编码人VEGF的cDNA序列克隆至表达载体pQE-40上,挑取阳性克隆扩增后,提取DNA进行酶切鉴定和测序.同时通过SDS-PAGE和western blot方法对其表达产物进行特异性鉴定.猪小面积深Ⅱ度烫伤后,立即将含有1.5μg/g VEGF的表达产物制成的膏剂均匀涂于创面,每个创面200mg膏剂,隔日换药一次,至伤后14d.用透明膜描记称量法记录创面面积,并取创面组织作组织学和免疫组化检测.克隆出的VEGF基因cDNA片段由380bp组成,包括翻译起始密码子、编码序列和终止密码子等部分.重组表达质粒pQE-VEGF在M15细菌体内能够表达.小型猪烫伤后7d,VEGF处理的伤口处肉芽组织增生明显,毛细血管数量增多.烫伤14d后,M15处理组的创面仍未愈合,VEGF组的创面可见连续的上皮覆盖,CD34阳性细胞率与M15处理组相比明显升高,两者差异显著(P<0.01).构建的VEGF表达载体可以编码VEGF121蛋白,其表达产物能够诱导肉芽组织生长,刺激血管内皮细胞增殖,加速新生血管形成,促进创面愈合.
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肝硬化和肝癌肝组织内Fas与FasL表达及血清中sFas检测
Fas和Fas配体(FasL)是介导细胞凋亡的一对膜蛋白,两者均以膜分子和可溶性分子的形式存在。受不同致病因素影响的肝组织Fas、FasL表达水平不同,通过Fas系统介导的凋亡方式清除异常肝细胞的速度及程度与肝脏的病理过程密切相关。本研究旨在通过检测Fas、FasL在肝硬化和肝癌组织的表达及血中可溶性Fas(sFas)的含量,了解Fas、FasL和sFas在肝硬化转变为肝癌的过程中所起的作用。 1.材料和方法:本院1994~1997年肝硬化门静脉高压症病人术中取硬变肝活检标本和肝癌的手术切除标本,其中肝硬化49例,男30例,女19例,年龄24~65岁;原发性肝癌36例,男31例,女5例,年龄25~74岁。所有组织均立即经10%甲醛固定,石蜡包埋,5 cm连续切片。门静脉高压症和肝癌病人术前采外周静脉血,其中肝硬化28例,男18例,女10例,年龄28~69岁;原发性肝癌27例,男21例,女6例,年龄28~69岁。正常对照取自年龄匹配的健康志愿者。Fas、FasL免疫组化检测采用Dako Envision二步法,操作按说明进行,
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肾癌c-erbB-2免疫原性及临床应用的可行性研究
我们采用树突状细胞激活的杀伤性T淋巴细胞对过继免疫治疗肾癌进行研究.现报告如下.材料与方法 2001年我院行根治性肾切除术的新鲜肾细胞癌组织标本10例,其中透明细胞癌6例、嗜色细胞癌1例、混合细胞癌3例,术后冻存待检.另取77例包含有肿瘤和正常组织的肾癌石蜡标本切片行免疫组化检测.