电磁脉冲诱导小鼠肠组织基因表达谱的变化

目的 用基因芯片技术研究电磁脉冲(EMP)对小鼠肠组织的生物效应.方法 将12只小鼠随机分为正常组和EMP组(每组6只),用200kV/m,200次的电磁脉冲辐照大鼠,于照后第18h,活杀小鼠,取空肠,提取RNA,经反转录后用Cy3、Cy5荧光标记,获得两组动物来源cDNA探针;cDNA探针与基因表达谱芯片进行杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计.结果 EMP组与正常组相比,有56条基因表达发生了明显变化,其中有37条基因表达水平明显升高,而19条基因表达量明显下降.在表达异常的基因中有19条基因是已知功能或部分功能的基因.其中α-catenin胞质蛋白、淋巴细胞同型抗原、谷氨酰果糖6磷酸氨基转移酶、核糖体蛋白S17、小富脯氨酸蛋白2 A、腺状激肽释放酶、脂氧舍酶、醛酮还原酶、RNA结合蛋白、α-胰淀粉酶2、弹性蛋白酶2、p6-5淋巴细胞抑制因子基因等12条为表达上调基因;Jam新连接粘附分子、精氨酸甲基转移酶,Carm1、NNP-1、2-5寡腺苷酸合成酶、Mlark、ATP合成酶α亚基、解偶联蛋白基因等7条为表达下调基因,其余37条则为未知功能的基因.结论 电磁脉冲辐照可诱导小鼠肠组织多个基因特异性表达,且上调基因数居多.

高氧诱导慢性肺疾病早产鼠肝肠组织的自由基变化

目的:探讨高氧致早产鼠慢性肺疾病(CLD)发生中肝肠组织的自由基变化.方法:采用高浓度氧致早产鼠CLD模型为研究对象,应用分光光度计比色法动态测定肝及肠组织超氧化物岐化酶(SOD)活性及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量变化,并同步观察肺组织上述指标的改变.结果:实验组MDA水平,肝及肠组织7 d内无差异,14 d明显高于对照组(分别为122±9μmoL/gvs68±7μmoL/g,117±9 μmoL/g vs68±9 μmoL/g,P＜0.01),21 d仍高于正常水平(P＜0.05);而肺组织早期即明显升高,7 d达高峰(94±12 μmoL/g vs 24±5 μmoL/g,P＜0.001),持续1 wk后逐渐下降,21 d时仍高于正常水平(P＜0.01).两组肺、肝及肠组织SOD的活性均无差异(P＞0.05);结论:高氧肺损伤时,肝及肠组织同样发生自由基损伤,但其发生时间明显滞后于肺组织.

核因子-κB在大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织的表达及其意义

目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织核因子-κB(NF-kB)及TNF-α、ICAM-1的表达,探讨NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中的作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,设正常组、生理盐水组及轻、重模型组共4组.采用免疫组织化学染色检测肠组织NF-κB、TNF-α和ICAM-1表达,生化方法检测MPO含量,并分析NF-κB活性与肠道病理损伤指数、MPO含量、TNF-α及ICAM-1表达的关系.结果:溃疡性结肠炎大鼠肠组织中NF-κB活性,TNF-α、ICAM-1表达及MPO含量较正常组及生理盐水组显著增高(NF-κB:52.14±9.81、30.26±10.20,60.73±13.41、45.24±10.86 vs13.31±4.76、16.95±6.83,11.61±4.85、14.10±5.76;TNF-α:74.50±11.20、48.11±5.95,84.09±14.52、53.40±8.79vs16.99±5.48、20.04±6.76,10.13±1.79、16.03±6.21;ICAM-1:68.15±7.25、44.34±7.54,77.69±8.09、47.01±8.82vs15.34±4.03、17.50±6.95,10.33±2.38、13.41±4.91;MPO:1.69±0.11,0.71±0.06vs0.39±0.07,0.31±0.08;P＜0.01),且在病情严重组增高尤为明显.NF-κB表达水平与TNF-α和ICAM-1阳性细胞密度、MPO含量、肠道病理损伤指数呈显著正相关关系(r分别为0.9 304,0.8 680,0.6 865,0.9 292,0.8 462;P＜0.001或P＜0.005).结论:NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中可能起重要作用.

谷氨酰胺对肠组织TLR2、4及N F-κB的调节与内毒素致肠损伤保护作用的关系

目的:探讨谷氨酰胺对肠组织TLR2、4及NFκB的调节与内毒素引起的肠损伤保护作用的关系.方法:24只日龄10d的Wistar幼鼠随机分为正常对照组(n=8）,生理盐水1 mL/kg腹腔注射；内毒素血症组(n=8）,脂多糖组(lipopolysaccharide,LPS)(5 g/L)5 mg/kg腹腔注射；谷氨酰胺组(glutamine,Gln)(n=8),Gln10 mL/kg(含谷氨酰胺13.46 mg/100 mL)+LPS5 mg/kg腹腔注射.于腹腔注射后3h处死幼鼠,留取远端回肠组织,HE染色,光镜下观察肠组织病理改变,RT-PCR检测肠组织TLR2、4及NF-κB3 mRNA的表达,免疫组织化学检测肠组织TLR2、4及NF-kκB蛋白定位表达.结果:光镜下对照组肠组织结构正常,Gln组和LPS组均可见间质和上皮细胞水肿,Gln组较LPS组明显减轻；肠组织TLR2、4及NF-κBmRNA表达Gln组较LPS组明显下降(3.055±0.51 vs 4.09±0.90,3.92±0.50 vs 16.71±1.28,0.37±0.14 vs 2.23±0.72,均P＜0.01),肠组织TLR4及NF-κB蛋白定位表达Gln组较LPS组明显降低(P＜0.05).TLR2蛋白定位表达Gln组较NS组、LPS组均增强(P＜0.01）.结论:Gln减轻肠组织损伤的保护作用可能与其下调TLR4及NF-κB mRNA和蛋白的表达相关.

结直肠癌微血管密度与增生细胞核抗原的关系

目的:探讨微血管密度计数(MVD)与增生细胞核抗原(PCNA指数)在结直肠癌中的变化,以及与结直肠癌临床病理间的关系.方法:应用免疫组化方法分析结直肠癌52例、结直肠腺瘤10例、正常肠黏膜组织8例中的MVD、PCNA表达.结果:结直肠癌MVD(20.7±10.2)明显高于结直肠腺瘤(8.5±2.3)和正常肠黏膜组织(3.5±0.8)(P<0.01),结直肠腺瘤亦明显高于正常肠黏膜组织(P<0.05);MVD与结直肠癌淋巴结转移、浆膜浸润、远处转移有关,DukeD,C期明显高于A,B期(P<0.01),而与其肿瘤大小、病理类型无关(P.05).结直肠癌PCNA指数(61.5±23.8)明显高于结直肠腺瘤(18.6±9.0)、正常肠组织(12.3±8.5)(P<0.01),而结直肠腺瘤与正常肠组织相比,PCNA指数无显著性差异(P＞0.05);PCNA指数与结直肠癌淋巴结侵犯、浆膜浸润、远处转移有关(P<0.05,P<0.01),与肿瘤大小无关(P＞0.05),低分化组PCNA指数明显高于中分化组、高分化组(P<0.05),随Duke分期进展,Duke D期高(83.6±13.6),Duke D,C期明显高于Duke B,A期(P<0.01,P<0.05).相关分析表明,MCD与PCNA指数呈正相关(γ=0.572,P<0.05).结论:MVD、PCNA与结直肠癌生物学行为密切相关,PCNA与结直肠肿瘤血管生成有关.

FK506对大鼠小肠移植排斥反应bcl-2/bax表达及预后的影响

目的:观察FK506对大鼠小肠移植排斥反应bcl-2/bax表达及预后的影响方法:选用近交系F344/N(RT Ⅰ1)和Wistar大鼠进行全小肠异位移植,随机分为对照组、同基因移植组(F344/N-F344/N)、异基因移植组(F344/N-Wistar)、FK506治疗组(F344/N-Wistar+FK506).观察大鼠的一般状况及存活时间,并于术后第3、5、7 d取移植,应用免疫组化检测术后移植肠组织中bcl-2及bax在的表达.结果:异基因移植组术后第3 d,bcl-2的表达显著低于对照组(P＜0.05),并随着移植天数的增加,差异更加显著(P＜0.01);bax的表达与对照组比较差异无显著性(P＞0.05),但bcl-2/bax呈下降趋势,大鼠在术后第3、5、7 d病理学检查移植肠出现排斥反应,大鼠存活时间与其他3组有显著差异;FK506治疗组bcl-2及bax表达与对照组比较,差异均无显著性(P＞0.05).同基因移植组、FK506治疗组无明显排斥,可长期存话.结论:FK506能明显抑制小肠移植急性排斥反应的产生,显著地延长移植物存活时间.bcl-2表达水平可作为早期诊断急性排斥反应的一个有意义参考指标.

急性坏死性胰腺炎肠黏膜损害与NK-1R的过度表达相关

目的研究神经激肽-1受体(NK-1R)和神经激肽-2受体(NK-2R)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠末端回肠组织中的表达,探讨该受体的表达与ANP肠粘膜损害的关系.

糖巨肽对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠组织肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β水平的影响

坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)是新生儿期发病率和病死率均较高的肠道炎症性疾病,在所有住院新生儿中的发病率为2.6%[1].约20%～40%的NEC患儿因肠管坏死和穿孔需外科手术治疗[2],病死率高达20%～30%[3].

血管活性肠肽和甲泼尼龙对内毒素性休克大鼠肠道Toll样受体mRNA表达的影响

目的 探讨血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)和甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致休克大鼠肠道组织Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2 mRNA和TLR4 mRNA表达的影响.方法 90只SD大鼠,随机分为LPS组(20只)、LPS+ VIP组(20只)、LPS +MP组(20只)、LPS +VIP+ MP组(20只)和对照组(10只).LPS组尾静脉注射LPS(E Coli O55B5)10 mg/kg;LPS +VIP组尾静脉注射LPS 10 mg/kg后注射VIP(5 nmol/kg)；LPS+ MP组尾静脉注射LPS 10 mg/kg后注射MP 3 mg/kg; LPS+ VIP+ MP组尾静脉注射LPS 10 mg/kg后注射VIP 5 nmol/kg+ MP 3 mg/kg;对照组尾静脉注射等容量生理盐水.分别于注射后6h和24 h处死,留取肠道组织标本,RT-PCR检测肠道TLR2/4 mRNA表达,光镜下观察肠组织病理变化.结果 注射LPS后大鼠肠黏膜坏死脱落,微绒毛结构消失,结缔组织充血,炎性细胞浸润.采用VIP、MP或VIP +MP干预组病变较轻.注射LPS6h,LPS组(1.14 ±0.38,1.21 ±0.18)、LPS+ VIP组(1.17±0.42,1.04±0.38)、LPS+ MP组(1.16±0.41,1.11±0.34)和LPS+VIP+MP组(0.92±0.29,1.01±0.20) TLR2 mRNA与TLR4 mRNA表达均高于对照组(0.32±0.20,0.24±0.17) (P ＜0.01),LPS组、LPS +VIP组、LPS+ MP组和LPS+ VIP+ MP组之间差异无统计学意义(P＞0.05).注射LPS 24 h后,LPS+ VIP组(0.63±0.12,0.67 ±0.09)、LPS+ MP组(0.59 ±0.13,0.64 ±0.09)和LPS+ VIP+ MP组(0.52±0.19,0.51 ±0.31)TLR2 mRNA与TLR4 mRNA表达明显低于LPS组(1.04 ±0.38,0.82 ±0.18) (P ＜0.05).结论 VIP和糖皮质激素的胃肠保护作用与炎症信号TLR2/4 mRNA表达改变有关,在LPS休克6h内,VIP或MP和VIP +MP对肠道TLR2/4 mRNA表达影响不明显,24h时VIP、MP和VIP +MP可下调TLR2/4 mRNA表达.

双歧杆菌对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤及肠组织血小板活化因子、肿瘤坏死因子α的影响

新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)是新生儿期常见的危及生命的严重胃肠道急症[1],2006年1月至7月,我们利用新生大鼠NEC模型,观察补充双歧杆菌对新生鼠NEC模型肠道形态学影响和肠组织血小板活化因子(platelet-actvating factor,PAF)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量变化.现报告如下.

火炮打击兔应激防护模型肠组织病理及NMDAr1表达的形态学研究

目的 探讨实弹演习火炮打击后,不同位置掩体保护下兔肠组织病理及NMDAr1表达的变化.方法 闽南山地团进攻演习,按照模拟战地士兵隐蔽情况,将30只实验兔随机分为远离火炮打击的空白对照组及火炮打击区域的反角隐蔽组和迎面隐蔽组.火炮打击6h后,各组存活兔取肠组织,观察其病理损伤形态学及NMDAr1表达的变化.结果 与空白对照组比较,反角隐蔽组和迎面隐蔽组NMDAr1表达强阳性,肠组织结构层紊乱,间质出血,炎症细胞浸润;迎面隐蔽组肠组织结构损伤程度及NMDAr1免疫反应强度均高于反角隐蔽组.结论 火炮打击后兔肠组织应激损伤反应强烈,反角掩体保护能够减轻肠组织损伤,NMDAr1参与肠组织损伤病理过程.

血红蛋白氧载体对重度失血性休克大鼠小肠粘膜组织形态学的影响

目的 观察血红蛋白氧载体(HBOCs)复苏对失血性休克大鼠肠黏膜组织形态学的影响,并探讨其机制.方法 用SD大鼠制作45％放血重度失血性休克模型,以0.9％NaCl、万汶(6％羟乙基淀粉)和HBOCs进行复苏.观察平均动脉压(MAP)及肠黏膜组织病理变化,Chiu氏六级病理评分评定肠黏膜损伤程度.结果 复苏后各休克组大鼠小肠黏膜病理损伤评分及组织形态学显示不同程度损伤,其中HBOCs组损伤轻,万汶组次之,NaCl组损伤重,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HBOCs复苏有利于减轻肠组织水肿,从而维持肠组织正常形态.

一氧化氮在肠道上皮损伤中的作用

肠缺血再灌注损伤是在临床失血性休克液体复苏、腹部和胸部血管手术、小肠移植、使用体外循环的外科手术情况中常发生的病理、生理过程,它具有高发病率和死亡率的特点.肠缺血再灌注损伤引起肠道屏障功能丧失,使细菌移位入循环系统,从而导致全身炎症(SIRS).SIRS的诱导是对启动因子的一个复杂反应,启动因子包括促炎症反应细胞活素类、前列腺素、血栓素、活性氧簇和一氧化氮.此外,缺血损伤肠组织的再灌注会进一步加重组织的损伤,并被认为是局部、远处炎症和多脏器衰竭的效应器,且缺血损伤肠组织的再灌注是危重患者死亡的首要原因.NO是肠损伤重要的第二信使和炎症因子,它在肠屏障功能丧失中发挥重要的作用.本研究重点是叙述NO的生物学特性和对改善肠道上皮细胞损伤的机制.

幼年及成年大鼠在肠缺血-再灌注中肠组织学损伤的比较

目的 在建立小肠缺血-再灌注(intestinal ischemia-reperfusion injury,Ⅱ/R)模型的基础上,比较Ⅱ/R幼年及成年SD大鼠肠组织形态学变化.方法 4周龄和10周龄SD大鼠,分为幼鼠组和成鼠组,每组5只大鼠用于作正常对照,余下15只用于建立Ⅱ/R模型,分别于缺血前、缺血1h、再灌注1h和再灌注2h4个时间点取距回盲部5 cm处肠管行组织学观察并进行Chiu's氏6级评分,结果进行统计学分析.结果 缺血1h可见绒毛倒伏但结构基本完整,绒毛下间隙增宽和充血;再灌注1h时出现绒毛坏死崩解脱落、小溃疡形成,多处固有层分离,毛细血管暴露,再灌注2h时肠组织损伤程度未见明显加重,但绒毛上皮细胞脱落,溃疡面增多,幼鼠组有明显的出血现象.肠组织病理改变的Chiu氏评分结果随缺血和再灌注时间的延长而评分增加,再灌注1h时幼鼠组的分值高于成鼠组(P＜0.05),其余各时间点两组评分值间的差异无显著性(P＞0.05).结论 肠组织病理损伤呈现随Ⅱ/R的时间延长而加重,其中又以幼年大鼠肠组织损伤较严重且发展快.

高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液对失血性休克大鼠肠缺血-再灌注损伤中L-选择素的表达和中性粒细胞浸润的影响

目的:观察高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(HSH)对失血性休克/内毒素二次打击大鼠复苏时是否能抑制L-选择素的表达和减少肠组织中性粒细胞的浸润,从而减轻肠缺血-再灌注损伤.方法:SD大鼠54只,采用失血性休克/内毒素二次打击模型.动物随机分为对照组(C组)、乳酸林格氏液复苏组(RL组)、高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(HSH组).比较中性粒细胞L-选择素的表达及肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性;肠标本进行病理学检查.结果:休克复苏后中性粒细胞L-选择素检测,各时相点HSH组明显低于RL组(P＜0.01);肠组织MPO活性测定,HSH组稍高于C组,无统计显著性,但HSH组明显低于RL组(P＜0.01);病理学检查,HSH组肠组织较RL组损伤轻.结论:HSH可以抑制中性粒细胞L-选择素的表达,从而降低肠组织中性粒细胞浸润,减轻肠组织缺血-再灌注损伤.

高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液对失血性休克大鼠肠缺血-再灌注损伤中氧自由基的影响

目的:观察高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(HSH)对失血性休克/内毒素二次打击大鼠复苏时是否能降低氧自由基的产生.方法:SD大鼠54只,采用失血性休克/内毒素二次打击模型.动物随机分为对照组(C组)、乳酸林格氏液复苏组(RL组)、高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液(HSH组).检测肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;肠标本进行病理学检查.结果:休克复苏后1h,RL组与HSH组肠组织MDA含量均明显升高,SOD活力明显下降;复苏后2h,HSH组肠组织MDA含量开始下降,SOD活力升高,而RL组变化不明显;至复苏后4h,两组比较MDA和SOD相差显著(P＜0.05);病理学检查,HSH组肠组织较RL组损伤轻.结论:HSH可以降低机体氧自由基的产生,减轻肠组织缺血再灌注损伤.

大承气颗粒抑制脂质过氧化反应的实验研究

腹腔感染及内毒素血症时,需氧生物细胞产生大量的自由基,破坏细胞膜及溶酶体膜,经脂质过氧化作用引起多脏器的细胞损伤,因此清除过多的自由基,抑制脂质过氧化作用在急腹症的救治中起着重要作用.大承气汤是<伤寒论>中重要方剂之一,由大黄、枳实、厚朴、芒硝4味中药组成,功擅通胃结,救胃阴,承顺胃气之下行,散结通便,临床用于急腹症的治疗.为进一步完善大承气汤通里攻下作用的机制,本文观察了大承气颗粒对腹膜炎大鼠血液及肝脏、肠组织中MDA含量和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响.

Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用

目的 探讨Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用.方法 将152只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为假手术组、氢气对照组、脓毒症组和氢气治疗组4组,每组38只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,假手术组和氢气对照组不进行CLP,其他操作相同.氢气对照组和氢气治疗组于假手术或CLP后1h、6h分别吸入2％氢气1h.每组取20只小鼠,观察术后7d内的生存率.每组剩余18只小鼠,分别于术后6、12和24 h各处死6只,取部分肠组织,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Nrf2、高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)的蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Nrf2 mRNA表达;于术后24 h取部分中段空肠,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肠组织损伤程度.结果 假手术组和氢气对照组各指标差异均无统计学意义.脓毒症组小鼠7d生存率较假手术组明显降低(0比100％,P＜0.05);氢气治疗组小鼠7d生存率较脓毒症组明显升高(55％比0,P＜0.05).与假手术组比较,脓毒症组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白表达(灰度值)和mRNA表达均明显升高(Nrf2蛋白6 h:1.973±0.350比1.000±0.000,t=4.411,P=0.002; 12 h:2.367±0.186比1.000 ±0.000,t=10.210,P=0.000; 24 h:2.517±0.280比1.000±0.000,t =9.521,P=0.000;Nrf2 mRNA 6 h:1.606±0.271比1.000 ±0.000,t=3.631,P=0.002; 12 h:1.692±0.399比1.000±0.000,t=3.233,P=0.005;24 h:1.784±0.341比1.000±0.000,t=3.894,P=0.001),术后24 h肠组织HMGB1表达(灰度值)明显升高(1.507±0.220比1.000±0.000,t=3.948,P=0.004).与脓毒症组比较,氢气治疗组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白和mRNA表达明显升高(Nrf2蛋白6 h:2.583±0.395比1.973±0.350,t=2.765,P=0.024; 12 h:2.725±0.235比2.367±0.186,t=2.674,P=0.028; 24 h:2.930±0.212比2.517±0.280,t=2.595,P=0.032; Nrf2 mRNA 6 h:2.008±0.400比1.606±0271,t=2.405,P=0.029;12 h:2.188 ±0.475比1.692±0.399,t=2.317,P=0.034;24 h:2.333±0.406比1.784±0.341,t=2.728,P=0.015),术后24 h肠组织HMGB1表达明显降低(1.147±0.152比1.507±0.220,t=2.805,P=0.023).HE染色结果显示,脓毒症组出现明显的肠组织损伤;氢气治疗组肠组织损伤较脓毒症组有所减轻.结论 氢气可以通过激活Nrf2-抗氧化反应元件(ARE)通路,使脓毒症小鼠肠组织中Nrf2蛋白表达增加,HMGB1水平降低,终对严重脓毒症小鼠肠组织起到保护作用,并可明显提高脓毒症小鼠的生存率.

内毒素血症对短肠综合征大鼠肠组织修复能力的影响

肠组织血红素加氧酶-1在失血性休克复苏大鼠肠粘膜损伤中的作用

失血性休克是创伤及外科手术中较常见的并发症,此时发生全身血流再分布,导致肠道血流量减少,绒毛顶部的枯膜细胞缺血、缺氧、坏死和脱落,复苏时的再灌注可加重肠粘膜损伤,导致肠粘膜屏障受损,肠道内大量细菌向肠腔外迁移,此过程称为细菌移位[1],可触发全身炎性反应和多器官功能衰竭.血红素加氧酶(HO)作为血红素代谢过程中的起始酶和限速酶,包括3种同工酶:HO-1、HO-2和HO-3,其中只有HO-1是诱导型酶[2].