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桂莪术提取物对人肝星状细胞的影响
目的:观察桂莪术提取物对肝星状细胞株(HSC-LX2)增殖、胶原生成以及基质金属蛋白酶表达的影响。方法:HSC-LX2培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液中,用终浓度分别为0、22.5、45、90μmol·L-1的桂莪术提取物处理24 h后,MTT法测定细胞增殖抑制率;LDH比色法检测桂莪术提取物对HSC-LX2的细胞毒性;ELISA法检测HSC-LX2 I型胶原表达的影响;Western Bolt法检测HSC-LX2基质金属蛋白酶-1(MMP-1)蛋白表达。结果:MTT结果显示,22.5、45、90μmol·L-1的桂莪术提取物均能抑制HSC-LX2细胞增殖,呈剂量依赖性,抑制率分别为16.2%,43.9%,59.4%,IC50为59.1μmol·L-1;桂莪术提取物各剂量组培养上清液中LDH活力差异无显著性;45、90μmol·L-1桂莪术提取物可显著降低I型胶原的表达(P<0.01);Western Blot结果分析显示,45、90μmol·L-1桂莪术提取物可显著提高HSC-LX2 MMP-1蛋白的表达(P<0.05)。结论:桂莪术提取物可能通过抑制HSC-LX2增殖和I型胶原合成,提高MMP-1蛋白表达,发挥抗肝纤维化作用。
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益气化瘀方影响椎间盘软骨细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原的作用分析
目的 分析益气化瘀方及其拆方于椎间盘的软骨细胞,其凋亡状态下的Ⅰ型与Ⅱ型胶原所具有的调控表达作用.方法 通过对椎间盘(大鼠)软骨细胞进行培养(酶消化法),再运用Fas抗体对其进行诱导凋亡,以益气化瘀方(还包括其拆方:化瘀方和益气方)相应的药理血清来进行干预,再以SP法(免疫组化)对大鼠椎间盘的软骨细胞于不同状态之下对这两型胶原的表达情况做相关检测与分析.结果 凋亡模型组显示胶原表达(Ⅰ型)较正常的对照组明显,显示Ⅱ型胶原仅呈轻度表达,两组差异呈显著性(P<0.01);所用益气化瘀方(还包括其拆方:化瘀方和益气方),同凋亡模型组相较,不仅均能够明显的上调其胶原的表达(Ⅱ型),而且能够下调其胶原的表达(Ⅰ型),再将3种中药组与诱导凋亡组相较,差异呈显著性(P<0.01).结论 予以益气化瘀方(还包括其拆方:化瘀方和益气方)能够调控发生在凋亡状态下大鼠椎间盘自身软骨细胞胶原的表达(Ⅰ型与Ⅱ型).
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氧化苦参碱对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原表达的影响
目的:研究口服氧化苦参碱对CCl4诱导的大鼠肝纤维化组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原表达的影响.方法:♂ Wistar大鼠140只随机分为正常对照组(n=20)、CCl4模型组(n=30)、氧化苦参碱预防低剂量组(n=30)、中剂量组(n=30)和高剂量组(n=30).氧化苦参碱低、中、高剂量组大鼠氧化苦参碱的用量分别为30,60,100 mg/kg,每日灌胃1次,共12 wk.肝组织学检查观察肝组织炎症和纤维化程度,免疫组化观察肝组织中Ⅰ,Ⅲ和Ⅳ型胶原的表达,电镜观察肝组织的超微结构变化.结果:组织学检查结果表明对照组肝脏炎症和纤维化程度明显高于氧化苦参碱预防组;免疫组化检测表明预防对照组大鼠肝内有大量Ⅰ,Ⅲ和Ⅳ型胶原沉积,其中Ⅲ型和Ⅳ型胶原的沉积形成肝窦毛细血管化,而氧化苦参碱预防组肝内胶原沉积较少,无明显的肝窦毛细血管化形成;电镜学检查证明氧化苦参碱预防组肝细胞损伤程度较对照组显著减轻.结论:口服氧化苦参碱可减少CCl4诱导的大鼠肝纤维化组织中胶原的表达,对肝纤维化有预防作用.
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结肠癌患者癌组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达及血清中HA和Ⅳ型胶原的定量检测
目的:探讨结肠癌组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达以及血清中透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原的浓度在结肠癌预后判断中的作用.方法:采用免疫组织化学技术,检测60例结肠癌组织以及10名正常组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达,同时采用放射免疫技术检测上述60例结肠癌及10名正常人血清中透明质酸(HA)和Ⅳ型胶原的含量.结果:结肠癌组织中CD44v6阳性率为75%,明显高于癌旁对照及正常结肠组织,有淋巴结转移组的结肠癌组织中CD44v6的表达明显高于无转移组(70.9%vs33.3%,P<0.01),DukeA和DukeB期明显低于DukeC和DukeD期(30.3%,36.4%vs 62.5%,66.7%,P<0.01);而Ⅳ型胶原在结肠癌组织中均有不同程度的减少,其中高分化组结肠癌组织中明显高于中、低分化组(61.1%vs29.0%,18.1%,P<0.01),有淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组(20.8%vs58.3%,P<0.01),Dukes A和DukeB期明显高Duke C和Duke D期(70.0%,54.5%vs31.3%,16.6%,P<0.01),结肠癌患者血清中HA和Ⅳ型胶原含量明显高于正常对照组(200±160 μg/L,125±42 μg/Lvs61±14 μg/L,60±15 μg/L,P<0.01),且与有无淋巴结转移和Dukes分期相关,随着组织中CD44v6和Ⅳ型胶原表达逐渐增加,血清中HA亦逐渐增加,而Ⅳ型胶原则逐渐减少.结论:组织中CD44v6和Ⅳ型胶原的表达及血清中HA和Ⅳ型胶原的含量对判断结肠癌患者的预后有重要意义.
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犬冠状动脉球囊扩张与支架置入术后血管内膜Ⅲ型胶原的不同表达
细胞外基质是支架术后再狭窄的重要成分.胶原是细胞外基质的主要的成分之一.Riessen等[1]发现冠状动脉(冠脉)Ⅲ型胶原表达密度和强度与再狭窄病灶中的内膜增生密切相关,但确切机制目前仍不清楚.本研究通过对照观察单纯球囊扩张与支架置入术后血管壁内膜增生和Ⅲ型胶原表达,探索Ⅲ型胶原在血管损伤修复过程中的表达规律.
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msCs移植对扩张型心肌病TGF-β1、AT1、CYP11B2及心肌胶原表达影响的研究
目的:探讨经外周静脉途径移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, msCs)治疗扩张型心肌病心衰的可行性及对TGF-β1、AT1、CYP11B2及心肌胶原表达的影响。
方法:1.扩张型心肌病心衰动物模型的构建与鉴定SPF级近雄性SD大鼠采用腹腔注射ADR的方法构建DCM心衰模型。给药第10周对两组大鼠行心脏超声检查,心肌组织HE、Masson病理染色、心肌胶原分析及免疫组化检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,鉴定模型。2.骨髓间充质干细胞移植治疗扩张型心肌病将DCM大鼠经尾静脉注射含msCs的细胞悬液。于细胞移植第20周进行心脏超声检查,观察LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS。于末次移植后第20周末行心肌组织HE、Masson病理染色、心肌胶原分析及免疫组化检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,RT-PCR扩增Ⅰ、Ⅲ胶原、TGF-β1、AT1、CYP11B2基因片段,检测其mRNA的表达。数据进行统计学分析。 -
致敏大鼠肺内细胞增殖与凋亡的研究
为探讨支气管哮喘时气道重塑的特点及细胞增殖与凋亡机制对气道重塑的调节,我们检测了卵蛋白(OVA)致敏不同时间大鼠气道粘膜下细胞增殖及凋亡指数的变化、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化以及气道基底膜Ⅲ型胶原表达的变化,并对与细胞增殖、凋亡密切相关的Fas/Fas L抗原表达进行研究。 材料与方法雄性SD大鼠24只,随机分为4组,每组各6只。对照1周组和对照3周组:以生理盐水代替抗原进行注射和雾化吸入;致敏1周组和致敏3周组:参照文献[1]方法给予OVA致敏和激发。雾化后分别于第7、21d经0.3%戊巴比妥钠麻醉,取肺组织。
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吸入布地奈德气雾剂对致敏大鼠气道细胞增殖影响的研究
支气管哮喘是一种气道慢性炎症,在炎症发病过程中修复与重塑的调控机制已被引起高度重视.我们采用免疫组化ABC法,检测卵蛋白致敏不同时间(1、3周)大鼠气道粘膜下细胞增殖指数的变化及气道基底膜Ⅲ型、Ⅴ型胶原表达的变化,同时观察分别吸入布地奈德(商品名:普米克)1、3周的影响,以阐明吸入糖皮质激素对肺内气道重塑的影响.
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苦参碱干预对肺纤维化大鼠转化生长因子β1和结缔组织生长因子表达的影响
肺纤维化是由于各种刺激因子导致成纤维细胞大量聚集和细胞外基质(ECM)过量沉积,肺组织弹性减退,肺容积缩小,进而发生呼吸衰竭的一类疾病.近年研究[1-2]证实,苦参碱在抗肝脏、肾脏纤维化中有一定疗效.本研究通过观察苦参碱干预对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子β1(TGFβ1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原表达的影响,探讨其可能的作用机制.
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IgA肾病患者血管内皮细胞生长因子及其受体的表达
肾小球内皮细胞是肾小球血管壁的重要组成部分,对于维护肾小球血管壁的完整性具有重要的意义.血管内皮细胞生长因子(VEGF)能促进内皮细胞的增生、迁移,增强内皮细胞通透性.本研究通过观察IgA肾病患者肾组织内VEGF及其受体(flk-1)和Ⅳ型胶原的表达,分析VEGF、flk-1表达与IgA肾病患者尿蛋白、血压、血肌酐、肾小球Ⅳ型胶原表达的关系.
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192 Ir血管内放射治疗对血管成形术后I型胶原表达的影响
早期的动物实验研究表明,在合适的剂量范围内血管内放射治疗可以降低血管内膜增生程度[1].初步的小规模临床研究亦显示,血管内放射治疗有可能是继支架之后另一降低再狭窄率的有效技术[2,3].但对血管内放射治疗抑制内膜增生的相关机制的研究,尤其是对血管壁细胞外基质影响的研究目前尚较少.近有作者分别从动物实验及临床发现,血管内放射治疗因延迟损伤愈合而导致后期血栓形成.因此,对血管内放射治疗的基础研究尚有待深入.本研究旨在探讨血管内放射治疗对血管成形术后I型胶原动态演变的影响.
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异种异体和同种异体半月板移植术后兔半月板和关节软骨中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥研究
目的:研究同种异体半月板移植和异种异体半月板移植后,移植半月板和关节软骨中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原表达和免疫排斥反应发生的情况.方法:切除30只成年新西兰白兔的内侧半月板造成半月板缺失的动物模型.A组进行同种异体内侧半月板移植.B组取猪半月板组织修剪成同兔内侧半月板形态和尺寸相同的异种异体半月板植入物,进行兔内侧半月板的异种异体移植.分别在术后第6周、12周、24周取实验动物的半月板、关节软骨进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ型胶原的单克隆抗体的免疫组织化学染色,并取外周血进行补体依赖性微量淋巴细胞毒实验(CDMT),用放射免疫法检测血清中IL-2和IL-6的含量,了解是否发生免疫排斥反应.结果:同种异体半月板移植后,关节软骨和移植半月板的情况良好,但术后第24周,异种异体移植物部分被吸收,关节软骨出现损伤.两组中各时段移植半月板中的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况无明显差异,术后第12周,两组关节软骨中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况相似,但术后第24周,异种异体半月板组的关节软骨开始有异常Ⅹ型胶原表达.同种异体和异种异体半月板移植组均未发现致命的免疫排斥反应发生.结论:用猪的半月板组织塑形后移植替代兔内侧半月板组织,半年后移植物被溶解吸收,同种异体内侧半月板移植可以取得圆满的结果.同种异体和异种异体半月板移植后移植半月板和关节软骨中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型胶原的表达情况相似,但术后第24周,异种异体移值组关节软骨中开始有异常的Ⅹ型胶原表达.两种移植物组均未发生致命的免疫排斥反应.
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电子射线照射大鼠胶原及自由基改变的研究
目的探讨加速器电子射线局部照射SD大鼠致放射损伤后胶原表达的变化、自由基的改变及两者的相关性.方法采用直线加速器局部照射制作SD大鼠的辐射损伤模型,观察MDA、NOS、SOD、GSH-PX及Ⅰ/Ⅲ型胶原mRNA表达及蛋白含量的改变.结果照射后在一定剂量范围内MDA、NOS上升;SOD、GSH-PX则下降,血清中指标变化显著而皮肤中变化无明显规律性.受照射局部皮肤Ⅰ/Ⅲ型胶原mRNA表达及蛋白含量有明显改变,但其自由基的变化与胶原的变化无明显相关性.结论辐射损伤后能在全身产生自由基,其对受照射局部皮肤组织中胶原表达改变的作用不大,在电子射线放射损伤中胶原可能起重要作用.
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心力衰竭大鼠心室与肺血管胶原含量变化及福辛普利和洛沙坦的干预作用
已有研究表明缺氧性肺动脉高压时,肺血管和右心室胶原表达增加[1].心力衰竭时也存在不同程度的肺动脉压的升高[2].福辛普利和洛沙坦是心力衰竭的有效治疗药物,而二者对心力衰竭时肺血管和心肌间质中胶原含量的影响仍不清楚.因此,我们通过建立心力衰竭大鼠动物模型,观察肺血管和心肌间质中胶原含量,分析这种改变与肺动脉压的关系,探讨福辛普利和洛沙坦对肺血管和心肌间质胶原的作用.
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低氧促进大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ胶原mRNA表达
目的:研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前a肽链表达的影响.方法:分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞的DNA合成速率,采用原位杂交技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果:成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第6h、12 h时3H-TdR掺入量较常氧组显著增加,分别增加34%(P<0.05)和36%(P<0.01);低氧第4 h、8 h、12 h Ⅰ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞;低氧第2 h,Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论:低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞DNA合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链表达,提示低氧对心脏成纤维细胞生长和胶原表达的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.
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金雀异黄素对肢芽软骨细胞的影响
Ⅱ型胶原是软骨基质的主要成分,由软骨细胞合成分泌,它的出现及分布变化可反映软骨组织的形成过程.金雀异黄素(GEN)可影响胚胎肢芽软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达.为探讨其对胚胎肢芽软骨细胞的作用机制,我们采用cDNA-mRNA原位杂交法观察金雀异黄素对胚胎肢芽软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响.现将结果报告如下.
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双环醇对慢性乙型病毒性肝炎肝组织转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
乙型肝炎病毒感染是引起肝纤维化的常见病因之一,目前对肝纤维化的发病机制研究已深入到分子水平,但临床治疗手段仍相对滞后.
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肝纤维化大鼠肝内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原表达和氧化苦参碱治疗作用的研究
肝纤维化是各种慢性肝损伤的共同特征之一,可引起肝内外循环障碍,影响肝细胞与血液之间的物质交换,加重肝细胞损伤,而后者进一步促进肝纤维化发展,由此形成恶性循环,其中部分患者可进展为肝硬化,甚至肝癌.近几年来,医学界对肝纤维化是一种可逆性病变已达成普遍共识,因此如何在肝纤维化的早中期对之加以逆转具有重要临床意义和社会经济价值.本研究以CCl4诱发大鼠实验性肝纤维化,分析肝纤维化大鼠肝内胶原纤维的表达以及氧化苦参碱对其表达水平和转化生长因子(TGF)-β1表达的影响,旨在探讨氧化苦参碱对肝纤维化的治疗作用及其机制.
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电子射线局部辐照大鼠Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及基质金属蛋白酶改变的研究
目的 探讨电子射线(模拟β射线)局部辐照大鼠致放射损伤后胶原表达及相关基质金属蛋白酶(MMPs)变化的情况.方法 采用直线加速器局部照射制作SD大鼠的辐射损伤模型,观察Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及MMP1、MMP2、MMP9表达的变化情况.结果 β射线照射引起的皮肤损伤可以引起胶原含量和分型的改变,MMP-1有不同程度的提高,MMP2与MMP9的表达随辐射剂量的增加,由强变弱再上升变强.结论 β射线照射皮肤损伤引起的创面难愈合可能与胶原含量和结构的改变相关,其又与胶原的降解酶MMP1活性增强有关;MMP2与MMP9参加基底膜的溶解、血管形成和坏死组织的清除,有助于创面的重建,促进创面的愈合.
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拉米夫定联合双环醇片治疗对慢性乙肝患者血清转化生长因子β1及Ⅲ型前胶原表达的影响
据统计,全世界无症状乙肝病毒携带者超过3.5亿[1]。慢性乙型肝炎在没有接受正规化抗病毒治疗或治疗不力的情况下容易复发,并造成血清中乙型肝炎病毒变异株增多,对常用抗病毒药产生耐受性,增大治疗难度,并有可能在3~5年进展为肝硬化。双环醇是一类保肝降酶新药。前期研究表明,双环醇具有抗氧化和免疫损伤、细胞凋亡和维持细胞膜稳定等多种作用,能对多种化学性、药物性和免疫性肝损伤产生明显的保护作用[2,3]。本次研究通过分析应用双环醇联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎前后,患者的血清转化生长因子β1)(transforming)growth) factor)β1, TGF-β1)、Ⅲ型前胶原(procollagen)Ⅲ, PCⅢ)的表达水平的变化,初步探讨双环醇片联合拉米夫定在慢性乙型肝炎治疗中的疗效及临床意义。