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热休克预处理对大鼠肠缺血-再灌注损伤的保护效应
目的:探讨全身热休克预处理对肠缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,IR)损伤的保护作用.方法:将40只SD♂大鼠随机分为4组:正常体温+假手术对照组(CTRL,n=10),正常体温+肠IR组(IR,n=10),41.5℃-42℃热休克+假手术组(42C,n=10),41.5℃-42℃热休克+肠IR组(42IR,n=10).Western blot检测肠黏膜HSP72蛋白表达,原位末端缺口标记法(TUNEL)检测肠黏膜上皮细胞凋亡,比色法检测肠黏膜caspase-3活性,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测外周血白细胞凋亡比例.结果:42C、42IR组HSP72蛋白表达水平比CTRL、IR组显著增高(1.59±0.32、2.71±0.64 vs 0.41±0.1、0.30±0.04,P＜0.01).42IR组caspase-3活性,白细胞凋亡比例比IR组相比有显著性差异(1.16±0.31 vs 2.32±0.54;39.65% vs 16.94%;P＜0.01),且42IR组肠黏膜上皮细胞凋亡指数比IR组明显减少.42IR组与42C、CTRL组之间,caspase-3活性,肠黏膜上皮细胞凋亡指数,白细胞凋亡比例均无明显差异.结论:全身热休克预处理对肠缺血-再灌注损伤有保护作用,其机制可能与增加热休克诱导HSP72的表达和抑制外周血白细胞激活有关.
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诱导HSP70减轻肠上皮细胞缺氧/再给氧的损伤
目的:观察热休克预处理诱导热休克蛋白70(HSP70)对肠上皮细胞(IEC-6)缺氧/再给氧损伤的影响,并探讨HSP70的细胞保护作用.方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为正常对照(C)、单纯缺氧/再给氧(H/R)及热休克预处理组(HS+H/R),免疫组化检测缺氧/再给氧后各组细胞HSP70表达程度,MTT法分析细胞活力,并检测细胞LDH漏出,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:与C组及H/R组比较,热休克预处理可明显诱导HSP70的产生(0.93±0.07 vs 0.20±0.04,0.39±0.08,P＜0.01),热休克预处理可显著增加IEC-6细胞缺氧/再给氧处理后细胞活力(0.27±0.04 vs 0.24±0.02,P＜0.05),LDH漏出减少(1021.29±207.06 vs 1419.90±393.07,P＜0.05),细胞凋亡率也明显降低(7.8±1.6% vs 12.3±2.9%,P＜0.05).结论:通过热休克预处理诱导HSP70表达,可明显减轻肠上皮细胞缺氧/再给氧损伤.防止肠上皮细胞缺氧/再给氧后细胞凋亡可能是其保护作用机制之一.
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热休克预处理骨髓间充质干细胞对化疗性卵巢早衰的疗效观察
目的 探讨热休克预处理骨髓间充质干细胞(BMSCs)对化疗性卵巢早衰的疗效.方法 分离、培养并鉴定大鼠BMSCs,42℃水浴处理BMSCs 1h.将125只Wistar雌性大鼠分为5组:正常对照组、模型组、假手术组、BMSCs组、热休克BMSCs组,每组25只.除正常对照组外,其余4组腹腔注射环磷酰胺建立化疗性卵巢早衰模型,建模结束后第1天,BMSCs组、热休克BMSCs组大鼠每侧卵巢各注射1 × 106个BMSCs、热休克预处理BMSCs,假手术组注射等体量生理盐水.各组均于移植后第1、15、30、45、60天分批处死5只大鼠,观察各组卵巢结构、卵泡数量、大鼠动情周期、血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)水平及卵巢颗粒细胞凋亡情况.结果 正常对照组大鼠动情周期无改变;模型组和假手术组大鼠在实验中动情周期持续紊乱;细胞移植后16～30d,热休克BMSCs组与BMSCs组开始有大鼠恢复正常动情周期,但两组间差异无统计学意义(P1-15d=1.0,P16-30d=0.358,P31-45d=0.325,P46-60d=0.5).正常观察组激素水平基本平稳,始终高于其余4组.模型组和假手术组E2水平持续下降,FSH水平持续上升.细胞移植后15d,热休克BMSCs组与BMSCs组大鼠的E2水平开始明显高于模型组与假手术组(P＜0.05),而FSH明显低于模型组及假手术组(P＜0.05).移植30d后,热休克BMSCs组E2水平开始明显高于BMSCs组(P＜0.05),而FSH水平则明显低于BMSCs组(P＜0.05);细胞移植后第1天及第15天,模型组、假手术组、BMSCs组、热休克BMSCs组各级卵泡数均明显少于正常对照组(P＜0.05);模型组及假手术组各级卵泡持续减少,而移植后第45、60天,热休克BMSCs组、BMSCs组各级卵泡数均明显多于模型组及假手术组(P＜0.05),且热休克BMSCs组各级卵泡数明显多于BMSCs组(P＜0.05).细胞移植后第1天,模型组、假手术组、BMSCs组、热休克BMSCs组的卵巢颗粒细胞凋亡指数明显高于正常对照组(P＜0.05),但4组间差异无统计学意义(P＞0.05).细胞移植第15、30、45、60天,BMSCs组和热休克BMSCs组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数均较细胞移植后第1天明显降低,且明显低于模型组及假手术组(P＜0.05),且与BMSCs组相比,热休克BMSCs组颗粒细胞凋亡更少(P＜0.05).结论 热休克预处理BMSCs能更为有效地修复化疗损伤的卵巢结构及内分泌功能.
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热休克预处理在大鼠脊髓损伤后细胞凋亡中的作用
目的探讨大鼠脊髓损伤后热休克蛋白70(HSP 70)和氧化氮合酶(iNOS)在细胞凋亡中的作用.方法将96只大鼠分为对照组、损伤组和热休克预处理组.采用静压型脊髓损伤模型,分别在伤后6h,12h,1天,2天,3天,1周,2周和3周处死动物.用原位杂交技术检测HSP 70 mRNA在以上各时点的表达.同时用免疫组化法检测HSP 70、iNOS在各时点的表达.运用TUNEL法检测凋亡细胞.另外,用CBS评分来评估神经功能.结果CBS评分显示,热休克预处理组的神经功能明显好于损伤组(P＜0.05).凋亡细胞数在损伤组显著高于热休克预处理组(P＜0.05).通过原位杂交和免疫组化发现,HSP70 mRNA和蛋白水平在热休克预处理组明显高于损伤组(P＜0.05).免疫组化的结果还显示,iNOS的量在热休克预处理组明显低于损伤组(P＜0.05).结论热休克预处理能减轻脊髓损伤后的细胞凋亡,其机理可能同HSP70合成增加,并进一步抑制iNOS的表达有关.
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热休克预处理预防跟腱末端病实验性研究
目的 揭示热休克预处理方式对跟腱末端病的预防性作用.方法 本实验采用了44只体重均为100g左右的SD雄性大鼠,随机分为对照组7只,造模组22只,预处理组15只.预处理组的大鼠先用42℃的热水温浴双足15min,再与造模组的大鼠一起用"电击跳跃法"进行持续造模12周.结果 从4周开始,造模组大鼠的大跳跃高度和有效跳跃次数明显降低.预处理组大鼠的大跳跃高度和有效跳跃次数在整个造模过程中无明显变化.结论 热休克预处理能有效地预防跟腱末端区病理性变化的发生.运动员在训练前用热水温浴双足可以有效地预防跟腱末端病.
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核转录因子-κB在热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用
目的探讨热休克预处理抑制氧化应激损伤心肌细胞的分子机制.方法采用1 mmol/L的过氧化氢(H2O2)作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞;用总抗氧化能力检测试剂盒及福林-酚法检测心肌细胞中总抗氧化能力的变化;用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测热休克蛋白70(HSP70)、αB-晶状体蛋白、核转录因子-κB(NF-κB)抑制物(I-κB)含量;免疫组化检测NF-κB及HSP70在细胞内的分布情况.结果①与H2O2(1 mmol/L,3 h)损伤组比,热休克预处理组(43 ℃ 1 h,恢复6 h)的总抗氧化能力明显增加(P均<0.01);②心肌细胞经热休克预处理(43 ℃ 1 h)后3 h,HSP70、αB-晶状体蛋白、I-κBα的表达均增加,6～12 h达高峰,并可维持至24 h;③与正常心肌细胞比较,H2O2(1 mmol/L)处理的心肌细胞中I-κBα的含量明显下降,而热休克预处理则可抑制H2O2所致的这种变化;④H2O2(1 mmol/L,30 min)可使心肌细胞胞质中的NF-κB及HSP70向胞核移位,若先经热休克预处理(43 ℃ 1 h,恢复6 h)则可使这种移位显著减少.结论热休克预处理可抑制H2O2所致的心肌细胞损伤,其保护作用可能与其诱导HSP70、αB-晶状体蛋白及I-κBα的表达,从而抑制NF-κB的活化有关.
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热休克预处理对肠上皮细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及其机制
目的:观察热休克预处理对肠上皮细胞(IEC-6)缺氧-再给氧损伤的影响,并探讨热休克蛋白70 (HSP70)的细胞保护作用.方法:体外培养IEC-6细胞,分为正常对照组、单纯缺氧-再给氧组及热休克预处理组,观察缺氧-再给氧后各组细胞HSP70及Bcl -2表达及细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出情况;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:热休克预处理可诱导HSP70产生(P<0.01),显著增加缺氧 -再给氧处理后IEC-6细胞活力(P<0.05),使LDH漏出减少(P<0.05),凋亡相关基因Bcl-2表达明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01).结论:热休克预处理可能通过诱导HSP70表达来减轻肠上皮细胞缺氧-再给氧损伤;增加细胞Bcl-2基因表达并抑制肠上皮细胞缺氧-给氧后细胞凋亡可能是其保护作用机制之一.
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热休克预处理对感染性脑水肿时神经细胞内钙的影响及机制探讨
目的探讨热休克预处理对感染性脑水肿时神经细胞内钙的影响及机制.方法雄性SD大鼠随机分为(1)正常对照组; (2)感染性脑水肿组;(3)生理盐水预处理组;(4) 热休克预处理组;(5)内毒素预处理组.制备百日咳菌液脑水肿模型, Fura-2/AM荧光检测法测定突触体内游离钙浓度([Ca2+]i),同时测定脑含水量、伊文思蓝和Na+含量;原位杂交和Western印迹分析检测HSP70的表达.结果热休克预处理组和内毒素预处理组[Ca2+]i含量较感染性脑水肿组明显降低(P<0.01);[Ca2+]i含量的变化与脑含水量、伊文思蓝含量、 Na+含量的改变呈直线正相关.热休克和内毒素预处理后HSP70 mRNA和HSP70明显增加.结论热休克和内毒素预处理均可减少感染性脑水肿时Ca2+细胞内流,这种作用与其诱导HSP70 的基因表达增加有关.
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热休克预处理诱导人体皮瓣合成HSP70
研究[1,2]发现,热休克应激能对皮瓣存活产生积极影响,热休克的保护作用与皮瓣内合成热休克蛋白(heat shock protein, HSP70)有关.
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不同干预手段对大鼠供肝缺血损伤的保护作用
目的应用缺血、加热等手段对大鼠供肝进行取肝前预处理,比较其对供肝缺血损伤的保护作用,并初步探讨细胞耐受缺血的机制.方法将48只SD大鼠分均为6组,即全肝缺血预处理组、半肝缺血预处理组、肝外脏器(脾脏)缺血预处理组、热休克预处理组、热休克+缺血预处理组及假手术对照组,检测离体肝脏灌洗液的丙氨酸转氨酶(ALT)水平及形态学变化.结果缺血及热休克预处理两种方法联合处理大鼠时,其保护作用明显弱于单独缺血或单独热休克的预处理方法;脾脏缺血同样可起到保护肝脏的效果.结论多种预处理的方法具有进一步研究的意义,缺血预处理与热休克预处理在对肝脏保护的作用中可能具有部分共同通路.
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不同强度热休克预处理对氧化应激所致乳鼠心肌细胞损伤的影响
目的:探讨不同强度热休克预处理对氧化应激所致体外培养的乳鼠心肌细胞损伤的影响.方法:用热休克预处理原代培养的乳鼠心肌细胞,向心肌细胞中加入终浓度为0.5 mmol/L的过氧化氢(H20:),以模拟氧化应激造成心肌细胞损伤.将心肌细胞分为5组:对照组(Ctrl组)、H2O2损伤组(H2O2组)、低强度热休克预处理(42℃,15 min,恢复12 h)+H2O2组(HSR15 min+H2O2组)、中等强度热休克预处理(HSR45 min)+H2O2组和高强度热休克预处(HSR90 min)+H2O2组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察处理后各组细胞的活力;流式细胞仪测定细胞凋亡率;检测各组培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与Ctrl组比较,H2O2组的细胞活力和SOD活性都明显降低(P<0.01),而细胞凋亡率、LDH和MDA含量明显增高(P<0.01);与H2O2组比较,HSR15 min+H2O2组和HSR45min+H2O2组的细胞活力和SOD活性明显增高(P<0.01),而细胞凋亡率、LDH和MDA含量明显降低(P<0.01),HSR90 min+H2O2组与H2O2组无明显差异(P>0.05);与HSR45 min+H2O2组比较,HSR15 min+H2O2组和HSR90 min+H2O2组的细胞活力和SOD活性明显降低(P<0.01).而细胞凋亡率和MDA含量明显增高(P<0.01),LDH也明显增高(P<0.05或P<0.01).结论:热休克预处理能减轻过氧化氢所致体外培养的新生大鼠心肌细胞损伤,且不同强度热休克预处理对心肌细胞的保护作用不同.
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不同预处理对大鼠肝移植供肝保护作用的探讨
目的通过应用缺血、加热等多种手段对大鼠供肝进行移植术前的预处理,比较各种预处理方法对大鼠肝移植供肝缺血再灌注损伤的保护作用.方法将SD大鼠50只,随机分为5组:半肝缺血预处理组、脾脏缺血预处理组、热休克预处理组、热休克+缺血预处理组及手术对照组,分别进行肝脏预处理后行模拟原位肝移植术,术后检测胆汁流量,术后24 h检测血清ALT,AST,ALP水平并观察肝脏形态学变化.结果半肝缺血预处理组、热休克预处理组移植后胆汁分泌量多于对照组,血清ALT,AST水平明显低于对照组(P＜0.05);热休克+缺血预处理组的血清ALT水平低于对照组(P＜0.05),胆汁分泌量及血清AST与对照组没有显著差异;脾脏缺血预处理组的胆汁分泌量多于对照组,血清ALT水平低于对照组(P＜0.05).结论肝脏缺血预处理初始阶段保护作用明显,将缺血及热休克预处理两种方法联合处理大鼠时,其保护作用弱于单独缺血或单独热休克的预处理方法;脾脏缺血预处理也具有保护肝脏的作用.
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热休克预处理供肝对肝移植大鼠细胞因子及γδT细胞的影响
目的 探讨热休克预处理供肝对肝移植大鼠术后细胞因子及γδT细胞的影响.方法 建立大鼠原位肝移植模型,将大鼠分为对照组,热休克预处理组,移植术后3 d.5 d、7 d,12 d收集肝脏组织观察病理学改变,肝组织提取单核细胞流式检测γδT,取血行细胞因子及肝功能测定,并观察两组大鼠术后存活时问.结果 对照组IL-2、IFN-γ高于热休克预处理组,IL-10两组间无差别,IL-4术后两组均不能测出.热休克预处理组γδT高于对照组.对照组大鼠中位生存期为9 d,热休克预处理组中位生存期为15天.结论 热休克预处理可提高移植肝脏单核细胞中γδT的比率,延缓Th1细胞因子上升趋势,但对Th2细胞因子无明显影响,术后γδT比率和细胞因子分泌无相关性,热休克预处理可延长大鼠肝移植的存活时间.
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热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜氧自由基的作用
目的:观察热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜氧自由基及热休克蛋白(HSP)70表达的影响,探讨氧自由基在大鼠烫伤后急性胃黏膜损伤中的作用及热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜的保护作用机制.方法:将96只Wistar大鼠随机分为烫伤组(B组,n=48,其中8只大鼠作为正常对照)及热休克预处理后烫伤组(HB组,n=48,其中8只大鼠作为实验对照),观察各时相点两组大鼠胃黏膜损伤指数(UI)、胃黏膜丙二醛(MDA)及胃黏膜细胞SOD活性变化.应用免疫组化染色分析胃黏膜细胞中HSP 70表达变化.结果:大鼠严重烫伤后胃黏膜细胞SOD大量消耗,MDA显著增加,胃黏膜损害明显;热休克预处理能显著减轻大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害.HB组较B组大鼠胃黏膜HSP 70表达水平显著升高(P＜0.05),热休克预处理能显著降低胃黏膜细胞SOD的消耗,减少MDA的产生.胃黏膜损伤指数(UI)与MDA呈显著正相关(r=0.695,P＜0.01),与HSP 70呈显著负相关(r=-0.794,P＜0.01);胃黏膜SOD与MDA呈显著负相关(r=-0.823,P＜0.01),而与HSP 70呈显著正相关(r=0.527,P＜0.05).结论:严重烫伤大鼠胃黏膜存在氧自由基损伤;热休克预处理可显著减轻烫伤大鼠胃黏膜氧自由基损伤,保护机制与HSP 70保护抗氧化酶SOD活性密切相关.
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热休克预处理对X射线诱发淋巴细胞hprt基因突变的影响
目的 探讨热休克预处理对X射线诱发淋巴细胞hprt基因突变的影响.方法 在42℃、5％ CO2培养箱中对大鼠外周血淋巴细胞进行热休克处理90min.将细胞样本分为:对照组,热休克组,照射组,热休克+照射组,每组6个平行样本.每组样本再分成两组细胞,其中一组细胞加入终浓度为0.1 mmol/L的6-TG,另一组不加6-TG.每组细胞经不同剂量(0.5Gy、1.0 Gy、1.5 Gy、2.0 Gy、2.5 Gy、3.0 Gy)X射线照射并恢复培养3h,6h,10h后,用多核细胞法检测大鼠外周血淋巴细胞hprt基因突变.结果 大鼠外周血淋巴细胞接受不同剂量X射线照射后恢复3h,6h,10h,热休克+照射组细胞hprt基因突变率与照射组细胞hprt基因突变率相比明显下降(P＜0.01).结论 热休克预处理对X射线所致细胞hprt基因突变具有保护效应,对X射线所致细胞hprt基因突变的保护作用在低剂量照射比高剂量照射时更为明显,其保护效率与照射剂量之间为负相关系.
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热休克蛋白70对大鼠脊髓损伤后凋亡的影响
热休克预处理能减轻脊髓损伤后的凋亡,其机理可能同热休克蛋白70合成增加,并进一步抑制NF-κB的表达有关.
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热休克预处理对家兔肝缺血-再灌注损伤的影响
目的:探讨热休克预处理对肝缺血-再灌注损伤的影响.方法:随机将家兔分为对照组和热休克预处理组,复制肝脏缺血-再灌注模型,分别于缺血前、缺血45 min、再灌注45 min三次取血,赖氏法检测血清谷丙转氨酶(ALT)活性.结果:热休克预处理组缺血前的ALT活性稍高于对照组,但是缺血后及再灌注后显著低于对照组.结论:热休克预处理对肝细胞有轻微的损伤作用,但是对缺血后和再灌注后损伤均有显著的保护作用.
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热休克预处理对过氧化氢诱导细胞次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因突变的保护效应
目的 研究热休克预处理对过氧化氢诱导的细胞基因突变损伤是否具有保护效应.方法 将V79细胞分为热休克处理组(热处理组)、过氧化氢损伤组(损伤组)和热休克预处理后过氧化氢损伤组(保护组).采用6-巯基鸟嘌呤(6-TG)筛选次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因突变细胞并形成细胞克隆,应用Giemsa染色法计数突变细胞克隆数,计算各组细胞的相对克隆形成率及基因突变率.结果 (1)温度＞42℃,1 h的热休克处理会诱导明显的HPRT基因突变,细胞相对克隆形成率降低,基因突变率与37℃处理1 h组比较,差异具有统计学意义(P＜0.01);温度≤42℃热休克处理1 h,不会诱导明显的HPRT基因突变,细胞相对克隆形成率高,基因突变率与37℃处理1 h组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)过氧化氢浓度≥0.5 mmol/L时,各亚组HPRT基因突变率与0 mmoL/L亚组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).(3)细胞在接受热休克预处理后再行过氧化氢处理,过氧化氢浓度≤1 mmol/L的细胞没有发生明显的HPRT基因突变,与0 mmol/L亚组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而过氧化氢浓度超过1 mmol/L时,细胞发生明显的HPRT基因突变,与0 mmol/L亚组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).(4)损伤组与保护组相应浓度的亚组(除0,4 mmol/L组)比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 热休克预处理对过氧化氢诱导的HPRT基因突变损伤细胞具有明显的保护作用.
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热休克预处理对高温致中国仓鼠肺细胞(V79)细胞DNA双链断裂的影响
目的 研究热休克预处理对高温致V79细胞DNA双链断裂的影响.方法 培养V79细胞,分为对照组和39℃、40℃、41℃、42℃热休克预处理组,预处理后,恢复6h,再以43℃与45℃进行高温损伤处理,4％多聚甲醛固定,抗γ-H2AX抗体标记,然后羊抗鼠FITC二抗孵育1h,细胞核内DNA双链断裂斑点用激光共聚焦显微镜进行观察.结果 在激光共聚焦显微镜下观察,经统计:对照组细胞核内的DNA双链断裂数量与热休克预处理组细胞核内的DNA双链断裂数量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 热休克预处理可以减少高温所致V79细胞DNA双链断裂的数量,说明V79细胞可以产生对温度的适应性反应.
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热休克预处理对脂多糖所致RAW 264.7细胞迁移的影响
目的 观察热休克预处理对脂多糖所致巨噬细胞迁移的影响.方法 采用ELISA观察脂多糖预处理对RAW264.7巨噬细胞中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β释放的影响;采用趋化实验观察脂多糖处理对RAW264.7巨噬细胞迁移的影响;采用趋化实验观察热休克预处理对RAW264.7巨噬细胞迁移的影响.结果 用500μg/L脂多糖作用RAW264.7巨噬细胞1 h,肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的释放较对照组明显增加(P<0.05);用500μg/L脂多糖处理细胞24 h, RAW264.7巨噬细胞的迁移较对照组明显增加(P<0.05);给予细胞42.5℃热休克预处理1 h后,再予500μg/L脂多糖处理细胞,RAW264.7巨噬细胞迁移较单纯脂多糖处理组明显减少(P<0.05).结论 热休克预处理能抑制脂多糖所致RAW264.7巨噬细胞迁移.
