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基于生物信息学的植物乳酸杆菌表层黏附蛋白的筛选及
目的: 筛选、鉴定及验证植物乳酸杆菌CGMCC No. 1258表层黏附蛋白.方法: 用盐酸胍结合超速离心法提取表层膜蛋白, 通过HRP标记的黏蛋白作抗体Westernblot找到含有黏附蛋白的条带进行质谱分析,生物信息学的TPP软件分析获得可能的蛋白,进行蛋白的分段表达克隆, 并对纯化的蛋白用Western blot进行再次鉴定找到靶蛋白. 同时将黏蛋白连接的sepharose 4B柱提取菌体黏附蛋白, 通过制备的靶蛋白多克隆抗体对菌体黏附蛋白作Western blot进一步验证.结果: 表层蛋白提取后, 电泳及Western blot结果显示30-33 kDa处可及HRP标记的黏蛋白结合的阳性条带, 随后进行质谱及TPP分析获得的蛋白为: (1)A型GTP连接蛋白; (2)丙酮酸氧化酶; (3)细胞分裂激活蛋白; (4)整合膜蛋白;(5)后期能力蛋白. 并进行克隆表达及分段表达, 并在此后的Western blot鉴定中呈强阳性条带显示靶蛋白是整合膜蛋白的第2段. 在应用该靶蛋白制备的多克隆抗体进一步Westernblot验证试验中发现同菌体黏附蛋白相作用的强阳性条带.结论: 植物乳酸杆菌表层黏附蛋白为整合膜蛋白, 并且该蛋白的黏附区域位于其第2段氨基酸序列中.
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植物乳酸杆菌CGMCC NO.1258表层黏附蛋白同致病性大肠埃希菌竞争黏附肠上皮细胞的研究
目的 了解植物乳酸杆菌CGMCC NO.1258表层黏附蛋白(IMP2)在同肠上皮细胞(Caco-2)黏附作用中的机制.方法 在制备和鉴定IMP2的多克隆抗体的基础上,同EPEC进行竞争黏附肠上皮细胞中,采用体外抗体阻断的方法检测IMP2对植物乳酸菌CGMCC NO.1258黏附作用的影响.结果 多克隆抗体能够有效抑制植物乳酸菌CGMCC NO.1258对肠上皮细胞的黏附,并且导致EPEC对Caco-2细胞黏附的增加.结论 IMP2在植物乳酸杆菌CGMCC NO.1258同肠上皮细胞黏附中发挥着重要的作用.
