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粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血后脑组织NF-κB和 IL-1β表达变化的影响
目的：：观察脑出血( ICH)后粒细胞集落刺激因子( G-CSF)对炎症因子NF-κB和IL-1β表达的影响,探讨G-CSF对ICH后脑组织继发性炎症损伤的保护机制。方法：将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和G-CSF治疗组(治疗组),每组10只。采用注入自体血方法复制脑出血模型。 Garcia等方法进行神经功能障碍评分；干湿重法检测脑组织含水量；免疫组织化学SP法检测NF-κB和IL-1β蛋白的表达；免疫印迹检测NF-κB和IL-1β蛋白的表达水平。结果：与假手术组比较,大鼠脑出血后神经功能障碍评分降低,NF-κB和IL-1β阳性表达和脑含水量明显增多(P<0.05)；G-CSF干预后NF-κB和IL-1β阳性表达和脑含水量显著下调(P<0.05),与脑神经功能障碍评分上调相一致。结论：粒细胞集落刺激因子可能通过抑制炎症因子NF-κB和IL-1β的表达,减轻脑出血血肿周围组织的炎性反应,改善神经功能损伤,起到神经保护作用。
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JAK2/STAT3通路对糖尿病心肌病的调节作用
目的：选取不同时期的2型糖尿病心肌病大鼠和同时期普通大鼠作对比，观察JAK2/STAT3通路在2型糖尿病心肌病中的动态演变。
方法：选取5周龄SD雄性大鼠70只，行腹腔胰岛素耐量试验（IPITT），适应喂养1W后，随机分为普通饮食组（对照组）30只和糖尿病组（DM组）40只，后者给予高脂饮食喂养，各组按照不同的处死时间点分别继续分为1、4、9、14、21周组。按照高脂饮食4 W联合一次小剂量STZ腹腔注射的方式建立2型糖尿病模型。各组大鼠处死前行超声心动图检查，检测观察左室舒张末内径（LVEDd）、左室射血分数（LVEF）、室间隔厚度（IVSd）、舒张期末左室后壁厚度（LVPWd）二尖瓣E/A及E’/A’等指标；行心导管检测，评估左室舒张末压（LVEDP）。经腹主动脉取血检测血糖、血脂、BNP。提取心肌组织蛋白行蛋白免疫印迹检测STAT3（Tyr705）和JAK2磷酸化程度，活化caspase3、Bcl-2、Bax的表达情况。进行H&E、Masson及天狼星红染色，以及免疫组化检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TUNEL法检测细胞凋亡等形态学实验。 -
不典型的远端肌病(calpainopathy)1例研究
目的:分析1例表现为"远端肌无力"的calpainopathy患者的临床、影像学及病理学特点,并与其他远端肌病相鉴别.方法:以"双下肢远端肌无力"起病的患者1例,完善体格检查、血生化、肌电图和肌肉 MR检查.肌肉活检后应用免疫组化染色法观察肌细胞各种胞膜蛋白表达情况,采用免疫印迹法半定量法分析dysferlin蛋白及calpain-3蛋白水平.结果:肌肉MRI示患者以臀中肌、臀小肌、大腿后群及小腿内侧群肌肉受累为著,肌肉病理提示"肌病样"改变,组化染色未发现胞质内存在镶边空泡,免疫组化染色提示dysferlin蛋白无缺失.终经免疫印迹检测发现该患者肌肉组织 calpain-3 94 000/60 000谱带完全缺失, 诊断为calpainopathy.结论:远端肌病包含疾病种类繁多,calpainopathy亦可为其中之一.肌肉影像学可为其鉴别提供一定的线索,确诊需依赖免疫印迹检测.
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前部PVR睫状体上皮损伤修复过程中Cx43表达变化及意义
目的 研究Cx43在前部增生性玻璃体视网膜病变(PVR)睫状体上皮损伤修复过程中表达的变化并探讨其机制和意义.方法 利用苏木精-伊红染色、荧光免疫组织化学、透射电镜和Western blot技术对外伤性前部PVR模型不同时间点睫状体上皮组织病理学变化及Cx43蛋白表达分布和表达量变化分别进行观察和检测.结果 伤后6 h睫状突表面有纤维蛋白渗出,1周时纤维增生膜基本形成.24 h Cx43在睫状体色素上皮(PE)细胞间出现表达,且蛋白含量略增;造模1周时,无色素上皮(NPE)细胞间Cx43表达增加,蛋白含量检测显著增高;伤后24 h之前和1周之后Cx43表达于NPE-PE交界,其表达部位和表达的量的变化也无显著性差异.结论 外伤性前部PVR睫状体上皮损伤修复过程中Cx43表达变化活跃,表明Cx43缝隙连接通道蛋白参与了该病理状态下睫状体上皮的组织损伤修复与功能调节.
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同型半胱氨酸抑制缺氧诱导猪冠状动脉痉挛的机制研究
目的：持续缺氧可通过激活PI3K／Akt／Rho激酶信号通路引发冠状动脉痉挛，同型半胱氨酸（ Hcy）的血浆浓度升高是心血管疾病的一个重要危险因素，本研究旨在探讨Hcy对缺氧诱导猪冠状动脉痉挛的影响及其可能机制。方法：离体血管环灌流实验测定猪离体冠状动脉的张力变化；免疫印迹检测磷酸化与总的MLC、Akt和MYPT1蛋白表达水平。结果：持续缺氧15 min以上可引起猪冠状动脉的持续收缩，预孵育Hcy（0．1～1 mmol／L）30 min，可以浓度依赖性地抑制缺氧诱导的冠脉收缩；而预孵育相同浓度的Hcy对该收缩无影响。缺氧15 min时冠状动脉p－MLC （ Ser19）蛋白水平显著降低，持续缺氧60 min时p－MLC （Ser19）水平较缺氧15 min时升高。预孵育Hcy（1 mmol／L）30 min，对缺氧15 min引起的p－MLC（Ser19）蛋白水平降低无影响，但抑制了缺氧60 min时p－MLC（Ser19）的升高。预孵育Hcy（1 mmol／L）30 min对持续缺氧引起p－Akt（Ser473）的变化影响不大。结论：Hcy可能通过激活Rho激酶改善缺氧诱导猪冠状动脉非内皮依赖的收缩。
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柳胺酚及其新型衍生物YZ51通过靶向RRM2抑制HBV复制的作用及机制
目的：研究核糖核苷酸还原酶（ RR）作为抗HBV及其相关肝癌药物靶点的可能性以及其抑制剂抗HBV的作用和机制。方法：免疫印迹检测RR表达，RR assay检测其活性；虚拟筛选得到老药柳胺酚，并检测其对RR活性的抑制；PCR检测柳胺酚单独或与拉米夫定（3TC）联合用药对野生型及3TC耐药型HBV DNA和cccDNA的抑制，并进行体内评价；评价柳胺酚衍生物 YZ51药效。结果：RR是HBV DNA复制所必需；柳胺酚能够抑制RR活性，从而抑制HBV DNA复制及cccDNA的合成，并与3TC联合有协同作用且能克服3TC耐药性；衍生物YZ51具有更高的药效；柳胺酚在小鼠体内抗HBV效果明显并且体内毒性低。结论：发现了一种与现有抗HBV药物不同的新机制。证明了新型RR酶抑制剂具有抑制RR和HBV复制活性，为进一步研发具有抗HBV及其相关肝癌的药物奠定了基础。
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转录因子Slug对肝癌肿瘤干细胞特性及药物敏感性的影响
肝癌在世界范围内是发病率第5和死亡率第3的癌症，其肿瘤侵袭转移和对传统化疗药物的耐受是目前治疗面临的难题。转录因子Slug主要通过调控基因的表达在肿瘤细胞中发挥功能，已有的研究主要聚焦Slug在上皮细胞的上皮－间质转化（ EMT）中通过抑制E－cadherin的表达促进正常上皮细胞向肿瘤细胞恶性转化的研究，关于Slug在肿瘤干细胞和药物耐受性方面的研究并不多见。我们在已具有间质细胞特性的肿瘤细胞中通过划痕、小室转移等实验检测发现抑制Slug表达对肝癌细胞的迁移能力并无影响；而通过流式细胞术将肝癌细胞中侧群细胞（ side population）分选出进行免疫印迹检测，发现Slug在具有干细胞特性的侧群细胞中表达水平较低而在非侧群细胞中表达水平较高，同时细胞成球实验发现抑制Slug表达可以明显增强肝癌细胞的非锚定依赖生长的肿瘤干细胞特性。随后通过CCK－8实验检测肝癌细胞对化疗药物的敏感性发现，抑制Slug表达可以明显降低细胞对多种化疗药物的敏感性。进一步研究抑制Slug表达导致耐药的分子机制时发现Slug在mRNA水平影响ABC蛋白泵家族多个蛋白的表达并且在使用ABC蛋白抑制剂后，Slug低表达的细胞恢复了对多种化疗药物的敏感性。我们的研究发现了Slug在肿瘤发展过程中新的生物学功能，为肿瘤细胞耐药性的分子机制研究及其临床治疗提供了新的思路和理论基础。
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抗角蛋白抗体免疫印迹检测技术的建立及临床应用
目的 建立抗角蛋白抗体(Anti-keratin antibody,AKA)的免疫印迹检测技术,探讨其临床适用性和实用性.方法 提取大鼠食管上皮组织的角质层抗原,通过SDS-PAGE电泳后将其转移到硝酸纤维素(NC)膜上,对病人标本进行AKA的免疫印迹检测,以间接免疫荧光法作对照.结果 类风湿性关节炎(RA),系统性红斑狼疮(SLE)和干燥综合征(SS)的AKA阳性率分别为45.8%,8.6%和16.7%.结论 免疫印迹法检测AKA比间接免疫荧光法检测具有更好的灵敏度,而且操作简便,结果易读.
