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Plin1－／－小鼠高血压发生机制
脂肪组织功能紊乱与高血压密切相关，其可能机制包括炎症、氧化应激、肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活和自主神经兴奋等。Perilipin 1基因敲除小鼠（Plin1－／－）小鼠出现脂肪组织功能紊乱，研究人员通过监测不同周龄 Plin1－／－小鼠主动脉血压，明确其可发生早发高血压，并初步探讨其机制。
研究表明：Plin1－／－小鼠血浆中甘油三酯、甘油、葡萄糖轻度升高，而醛固酮、电解质、炎性因子（脂联素、TNF-α和 IL-6）及氧化应激水平均无显著变化，提示这些因素并不参与 Plin1－／－小鼠高血压的发生。随后通过离体血管环实验对血管本身功能和结构变化检测时发现：Plin1－／－小鼠主动脉及肠系膜动脉内皮舒张功能均受损，在维多利亚蓝对血管弹力纤维的染色中也提示血管结构的损伤。管周脂肪（PVAT）可双向调节血管张力，其既可分泌舒张因子，具有抗收缩功能，同时也可分泌促收缩因子。本研究通过离体血管环实验证实 PVAT 抗收缩功能受损，而氧化应激和炎症浸润是其主要机制，免疫组化结果表明Plin1－／－小鼠 PVAT 中有巨噬细胞浸润，Real-time PCR 结果也证实其 PVAT 局部 TNF-α、IL-6和 MCP-1 mRNA 水平明显升高，管周脂肪 DHE 染色提示超氧阴离子含量增加，而肠系膜 PVAT 氧化应激标志物硫代巴比妥酸反应产物也明显升高。这些结果均表明炎症浸润及氧化应激可能是 Plin1－／－小鼠血压升高的重要机制。此外，研究人员利用放免法检测发现 Plin1－／－小鼠管周脂肪局部 AngⅡ浓度显著升高，表明 PVAT 组织 RAS 系统的激活促进高血压的发生；此外，对 Plin1－／－小鼠保留 PVAT 胸主动脉研究表明，其在不给予任何药物刺激就出现张力缓慢升高（自发性收缩），同时发现 Plin1－／－小鼠皮下脂肪的脂质抽提成分可刺激血管收缩，这表明除 AngⅡ外，Plin1－／－小鼠脂肪组织可还分泌另一种引起脂类收缩血管物质，其具体成份有待进一步研究。 -
奈必洛尔对西地那非降低大鼠离体肺动脉环张力的影响
目的 观察奈必洛尔与西地那非对大鼠离体肺动脉环和胸主动脉环的舒张特性并研究两药对肺循环和体循环的选择性和协同作用.方法 制备离体肺动脉环和胸主动脉环.按照血管收缩剂不同,分为去氧肾上腺素(Phe)组和5-羟色胺(5-HT)组,Phe组用Phe 1 ×10-6mol· L-1预收缩血管环,加入奈必洛尔1×10-9～1×10-4mol·L-1或西地那非1×10-9 ～1 ×10-4 mol·L-1,或以奈必洛尔3×10-6 mol·L-1孵化血管环后,再给予系列浓度的西地那非1×10-9～1×10-4mol·L-1,测定血管环的张力.5-HT组先给予60 mmol·L-1 KC1使血管环达到大收缩,分别用奈必洛尔1×10-9～1×10-4 mol·L-1或西地那非1×10-9～1×10-4 mol·L-1孵育,再加入5-HT1 ×10-6～1 ×10-4mol· L-1或1 ×10-6 ～5 ×10-4 mol·L-1,观察5-HT累积浓度-反应曲线的变化.对照组不加药物孵育,加入5-HT 1 ×10-6 ～1 ×10-4 mol·L-1或1 ×10-6～5 ×10-4mol·L-1,作其累积浓度-反应曲线;予或不予左旋-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)1×10-4 mol·L-1孵育血管环后,加入奈必洛尔1×10-5 mol·L-1或西地那非1×10-7mol·L-1或1×10-5mol·L-1孵育,得到5-HT 1 ×10-6～1×10-4 mol·L-1或1 ×10-6～5×i0-4 mol· L-1累积浓度-效应曲线并比较.结果 Phe组,奈必洛尔或西地那非可以浓度依赖性地降低肺动脉环和胸主动脉环张力;奈必洛尔对两血管环的舒张作用差异无统计学意义(P＞0.05);西地那非对肺动脉环的舒张作用较胸主动脉环强,差异有统计学意义(均P＜0.01);奈必洛尔增强西地那非的舒张作用,与单用西地那非相比,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).5-HT组,低、高2个浓度(1×10-7,1 ×10-5mol·L-1)或(1×10-5,1×10-4mol·L-1)的奈必洛尔、低、高2个浓度(1 ×10-9,1 ×10-7mol·L-1)或(1×10-5,5×10-5 mol·L-1)的西地那非分别浓度依赖性地减弱5-HT对肺动脉环或胸主动脉环的收缩作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01),两药用于胸主动脉环的有效浓度比肺动脉环的高出100倍.L-NAME可减弱奈必洛尔或西地那非对5-羟色胺收缩的两血管环的舒张作用,与对照组比较,差异有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01).结论 奈必洛尔及西地那非浓度依赖性地降低肺动脉环和胸主动脉环的张力,奈必洛尔可增强西地那非的作用,两药对肺动脉环具有更高的选择性.
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DL0805衍生物的生物活性筛选与细胞毒性评价
目的:DL0805是本实验室发现的具有Rho激酶抑制作用的吲唑类化合物,本研究拟对DL0805结构改造后得到的105个小分子化合物进行体外活性筛选,发现潜在候选药物.方法:利用ELISA方法评价105个化合物的Rho激酶活性抑制作用;采用离体大鼠胸主动脉血管环张力检测系统评价化合物舒张血管作用;利用MTT法,检测化合物对血管平滑肌细胞(VSMC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞毒性,并评价化合物对VSMC增殖的抑制作用.结果:经过初筛和复筛,发现5个化合物对Rho激酶活性具有较强的抑制作用;22个化合物对离体血管具有良好的舒张作用;1个化合物对VSMC毒性作用较强;5个化合物对血清诱导的VSMC增殖有一定的抑制作用;3个化合物对HUVEC毒性较强.结论:对DL0805衍生物的生物活性和细胞毒性的系统评价和综合分析,105个化合物中发现5个化合物具有良好的Rho激酶抑制作用、舒张血管活性及较低的细胞毒性,具有继续研究和开发的潜力,其中4个化合物为全新结构,值得进一步研究.
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血管环离体灌流供气系统的改进
血管环离体灌流装置是用于观察动物离体血管对不同药物反应的实验装置.离体血管环灌流方法是心血管研究的常用方法之一,在基础与临床研究中广泛应用.血管环离体灌流装置的每个灌流壶均有灌流液的进、出口及输送气体的进气口.常规使用的血管环离体灌流装置采用单气道供气(图1中以黑色三通控制氮、氧瓶通路部分表示),在实验过程中氧气和氮气瓶不能同时开启,仅能进行单一气体供应.这种装置在实验中调节换气时常出现时间和气压不同步,因此影响实验质量.为克服传统供气方式的缺点,满足实验中氧、氮同开且互不干扰,各单壶自由调节的要求,我们设计了离体血管环灌流系统的双气道供气系统.
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新结构Rho激酶抑制剂对离体胸主动脉血管环舒张作用及机制研究
目的评价2个全新结构小分子 Rho 激酶抑制剂J35242和J35243对离体大鼠胸主动脉血管环的舒张作用,并探讨其作用机制。方法利用离体大鼠胸主动脉血管环模型,分别用高浓度 KCl 和去甲肾上腺素( norepinephrine, NE)预刺激,评价化合物的舒张血管活性；通过各种工具药干预,观察化合物舒张血管作用的内皮相关机制、钾通道相关机制和钙离子相关机制。结果 J35242和J35243可以剂量依赖性舒张高浓度KCl和NE预收缩的血管环,并呈现一定的内皮依赖性；L-NAME和亚甲蓝可在一定程度上影响其舒张作用；化合物还明显抑制由细胞内钙释放和外钙内流引起的血管收缩,说明其可能通过阻断钙离子通道发挥舒张血管作用；另外两个化合物可能不是通过开放钾离子通道发挥舒张血管作用。结论 J35242和J35243在体外具有一定的舒张血管作用,并且J35242的作用要强于J35243,其机制可能依赖于血管内皮功能,另外可能与抑制平滑肌细胞钙离子通道,降低细胞内钙离子浓度相关。
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盐酸关附甲素对大鼠血管舒缩功能的影响及其机制
目的 研究盐酸关附甲素(guanfu base-A,GFA)对大鼠离体胸主动脉舒缩功能的影响,并探讨其可能机制.方法 将SD大鼠胸主动脉分离并制成血管环,分成内皮完整组和去内皮组,采用离体血管环实验,观察GFA对基础状态,氯化钾(KCl)预收缩及苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的血管舒张功能的影响,并结合不同抑制剂及无钙液处理,探讨其舒张血管的可能机制.结果 累积浓度的GFA(10-8~10-4 mol·L-1)对基础状态或KCl预收缩的有无内皮的血管环的张力均无明显影响(P>0.05);对PE(10-6 mol·L-1)预收缩内皮完整的血管有浓度依赖性舒张作用,而与PE预收缩的去内皮组相比,从10-7 mol·L-1开始差异有显著性(P<0.01).一氧化氮合酶抑制剂L-NAME、鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝及环氧合酶抑制剂吲哚美辛孵育后,均能明显抑制GFA的扩血管作用(P<0.01);经无钙液及GFA处理后,胸主动脉对PE的反应性降低(P<0.01).结论 GFA对大鼠胸主动脉的舒张作用主要通过两种途径:内皮依赖性舒张作用的机制主要与NO-GC-cGMP途径及激活环氧合酶有关;非内皮依赖性舒张机制主要与抑制内钙释放有关,与门控钙通道引起的外钙内流无关.
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鸟苷对大鼠胸主动脉血管环的舒张作用及机制
目的 研究鸟苷对大鼠离体血管环的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 分离SD大鼠胸主血管环,分成去内皮组和内皮完整组,采用离体血管环实验方法,经生物信号采集与分析系统测定血管环张力的变化,观察鸟苷的舒血管作用并探讨不同抑制剂对鸟苷舒张大鼠离体血管环作用的影响.结果 鸟苷(10-9～10-5 mol·L-1)对基础状态下或KCl预收缩血管环的张力无影响;对PE预收缩的血管环有内皮依赖性舒张作用;环氧合酶抑制剂吲哚美辛孵育对鸟苷的舒张作用无明显影响;一氧化氮合酶抑制剂L-NAME或鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝可阻断鸟苷的血管舒张作用.结论 鸟苷对大鼠离体胸主动脉有浓度依赖性舒张作用,其舒张作用可能与NO-GC-cGMP途径相关.
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盐酸法舒地尔对血管舒缩功能的调节作用
目的 观察盐酸法舒地尔(hydroxyl fasudil, HF)对犬脑血管痉挛的舒张作用,并采用兔离体胸主动脉环进一步探讨其舒张血管的作用机制.方法经十二指肠给予麦角胺咖啡因片(0.5 mg+50 mg)·kg-1建立犬脑血管痉挛模型,观察给予HF后 2 h内脑血流量、脑血管阻力、股动脉血流量、股动脉血管阻力、心率、收缩压、舒张压及平均动脉压的变化;用离体血管环实验方法观察HF对血管舒缩作用的影响.结果 ①犬脑血管痉挛模型中,HF 1 mg·kg-1给药后脑血管阻力降低,5～120 min脑血流量增加;但对心率、收缩压、舒张压及平均动脉压影响较轻微.②离体血管实验中,HF对甲氧明(methoxamine, Met)及氯化钾(postassium, KCl)引发的收缩均有明显的舒张作用,且作用在去内皮与内皮完整的血管标本之间无差异(P＞0.05).结论 对犬痉挛脑血管HF静脉给药可明显扩张脑血管,降低脑血管阻力,增加脑血流量,对外周股动脉血管亦有扩张作用,但作用较弱.HF的舒血管作用与血管内皮细胞无明显相关,此作用为非内皮依赖性舒张作用.
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褪黑素对肾血管型高血压大鼠的血压及主动脉舒缩功能的影响
目的观察褪黑激素(melatonin,MT)对两肾一夹(2K1C)高血压大鼠的降压作用,并探讨降压作用的血管机制.方法左肾动脉狭窄法建立两肾一夹高血压大鼠模型;无创尾套法测量尾动脉收缩压;离体血管功能实验方法记录MT血管作用活性.结果 MT10 mg·kg-1 ip可降低2K1C大鼠血压[由(23.45±2.40) kPa降为(19.81±2.78) kPa,P<0.05];MT(10-4 mol·L-1)可部分恢复2K1C大鼠离体主动脉血管环对乙酰胆碱(Ach)的舒张反应(P<0.01),减弱血管对去甲肾上腺素(NE)的收缩反应(P<0.05);MT(10-5～10-3 mol·L-1)明显抑制血管对氯化钾(KCl)的收缩反应,该抑制活性在2K1C与假手术组中没有差异.结论 MT的血管活性作用是其2K1C大鼠降压效应的因素之一,MT通过其清除自由基与抗氧化功能部分恢复高血压所致血管内皮功能受损与血管平滑肌细胞内氧化状态失调,使血管部分恢复正常活性.
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清眩降压汤对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及黄芩苷成分分析
目的 探讨清眩降压汤对离体大鼠胸主动脉环舒张作用的影响及有效成分分析. 方法 以大鼠离体胸主动脉血管环为研究对象,观察清眩降压汤对血管环张力的影响;利用超高液相色谱法分析其主要成分黄芩苷. 结果 清眩降压汤对血管环及去甲肾上腺素所致的主动脉环收缩反应具有显著的舒张作用;超高液相分析提示黄芩苷是清眩降压汤主要成分之一. 结论 清眩降压汤可明显降低离体血管环的收缩力,具有一定舒张血管的作用,其主要有效成分之一是黄芩苷.
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对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨
目的 为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用.方法 用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用.结果 对氧磷(36.3nmol/L～36.3/μmol/L)与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响.对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性.对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高.加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用.结论 该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关.
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同型半胱氨酸抑制缺氧诱导猪冠状动脉痉挛的机制研究
目的：持续缺氧可通过激活PI3K／Akt／Rho激酶信号通路引发冠状动脉痉挛，同型半胱氨酸（ Hcy）的血浆浓度升高是心血管疾病的一个重要危险因素，本研究旨在探讨Hcy对缺氧诱导猪冠状动脉痉挛的影响及其可能机制。方法：离体血管环灌流实验测定猪离体冠状动脉的张力变化；免疫印迹检测磷酸化与总的MLC、Akt和MYPT1蛋白表达水平。结果：持续缺氧15 min以上可引起猪冠状动脉的持续收缩，预孵育Hcy（0．1～1 mmol／L）30 min，可以浓度依赖性地抑制缺氧诱导的冠脉收缩；而预孵育相同浓度的Hcy对该收缩无影响。缺氧15 min时冠状动脉p－MLC （ Ser19）蛋白水平显著降低，持续缺氧60 min时p－MLC （Ser19）水平较缺氧15 min时升高。预孵育Hcy（1 mmol／L）30 min，对缺氧15 min引起的p－MLC（Ser19）蛋白水平降低无影响，但抑制了缺氧60 min时p－MLC（Ser19）的升高。预孵育Hcy（1 mmol／L）30 min对持续缺氧引起p－Akt（Ser473）的变化影响不大。结论：Hcy可能通过激活Rho激酶改善缺氧诱导猪冠状动脉非内皮依赖的收缩。
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PI3 K／Akt／FoxO1介导的PKG转录抑制参与了硝酸甘油耐受形成
目的：PKG在血管硝酸甘油（nitroglycerin， NTG）耐受形成中起重要作用，PI3K／Akt信号通路与血管张力调节关系密切，本研究旨在探讨该通路在NTG耐受形成中的作用及其机制。方法：通过猪离体冠状动脉孵育NTG（10－5 mol／L，24 h）建立离体NTG耐受模型；通过皮下注射NTG（20 mg／kg体重，每天3次，连续3 d）建立小鼠在体NTG耐受模型；运用离体血管环灌流、Western blot、实时定量PCR及免疫荧光等方法进行研究。结果：离体和在体研究表明，耐受组血管对硝酸甘油的舒张反应较对照组显著减弱，并且耐受组血管的p－Akt （Ser473）蛋白水平显著增加。 PI3K的特异阻断剂LY294002与NTG共孵育冠状动脉24 h，可显著抑制耐受组引起的p－Akt （Ser473）蛋白水平升高，同时部分改善了血管对NTG的反应性。耐受组冠状动脉PKG的蛋白和mRNA水平较对照组明显降低，且均可被LY294002所反转。耐受组血管的p－FoxO1（ Ser256）蛋白水平较对照组显著升高，且出现由胞核向胞浆的转位，以上现象均可被LY294002所阻断。结论：活化的PI3K／Akt通过促进FoxO1的出核，抑制了PKG的表达，从而导致NTG耐受。
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氯高铁血红素对肾性高血压大鼠离体血管反应性的影响
目的:利用两肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型,观察了氯高铁血红素(HLL)对高血压大鼠血压的影响及离体主动脉环反应性的改变,探讨HLL对肾性高血压发生发展的影响及机制.方法:①制作肾性高血压大鼠模型,分别于2、4、6、8周记录大鼠的血压改变.②腹腔注射HLL,观察血压的改变.③离体血管环灌流,取不同时期大鼠的胸主动脉制作血管环,利用四道记录仪记录血管张力的变化.
