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制备磷酰胺RNA核糖核苷酸嘌呤的高区域保护
目的:制备磷酰胺RNA核糖核苷酸嘌呤的高区域保护.方法:用一氢磷酰盐的方法来保护RNA甲硅烷基化合成的反应.结果:以鸟苷为原料生成苯氧乙酰胺来保护羟基,合成RNA中间体,通过液相图谱的方法来检验合成的物质.结论:本实验方法是基于二位的羟基是高区域专一的硅烷化作用,为了更有效的使羟基硅烷化用磷酰胺的方法,我们以前是定量的使一氢磷酰脂分裂,没有甲硅烷基的转化,除此之外,相同的方法,高区域专业用阻止硅烷化和磷酰化的方法.
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尿中黄曲霉毒素代谢产物的高效液相色谱测定法
黄曲霉毒素(AF)是一类毒性和致癌性很强的化合物,为第一类人类致癌物[1] ,是人类原发性肝癌的主要致病因素之一[2～4],其中毒性和致癌性强的为AFB1,进入机体后除形成AFM1、AFP1等外,也可被活化为AFB1-8,9-环氧化物,攻击DNA形成AFB1-N7-鸟苷(AFB-N7-GUA), 可经尿液排出,攻击蛋白质形成AFB1-白蛋白加合物而残留于血液中[5].
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UPLC法测定半夏提取物中尿苷、鸟苷和腺苷的含量
目的:建立以超高效液相色谱(UPLC)法测定半夏提取物中尿苷、鸟苷和腺苷含量的方法.方法:色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm× 50 mm,1.7 μm),流动相水-甲醇不同比例梯度洗脱,柱温30℃,流速0.5 mL· min-1,检测波长254 nm.结果:尿苷在2.033 ～ 20.33 mg·L-1线性关系良好,回归方程为y=16 788X-3 556(r=0.999 9),平均回收率98.65％,RSD 2.12％;鸟苷在1.098 ～ 10.98 mg·L-1线性关系良好,回归方程为y =25 378X-325(r =0.999 9),平均回收率98.21％,RSD 2.32％;腺苷在0.201 2～2.012 mg·L-1线性关系良好,回归方程为Y=30800X-59(r=0.9999);平均回收率98.54％,RSD l.91％.结论:该方法准确、快速、可靠,能有效地测定半夏提取物中尿苷、鸟苷和腺苷的含量.
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毛细管区带电泳内标法测定半夏中鸟苷含量
建立毛细管区带电泳内标法测定半夏鸟苷含量的方法.方法 采用毛细管区带电泳内标法定量,以熔融石英毛细管(57 cm ×75 μm,有效长度50 cm)为分离通道,运行缓冲液经NaOH溶液调pH至9.0的0.8 mol· L-1硼酸溶液-0.1mol· L-硼砂溶液-乙腈(50∶50∶13),分离电压25 kV,检测波长254 nm,毛细管温度25℃,自动压力进样5 s.结果 半夏中鸟苷在0.25-1.5 mg线性关系良好(r=0.9991),鸟苷加样回收率为102.0％,RSD为2.4％.结论 用毛细管区带电泳内标法测定半夏鸟苷含量的方法准确可行.
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UPLC-MS/MS同时测定蛹虫草中6种成分的含量
目的:建立同时测定蛹虫草中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素含量的方法.方法:液质联用技术,以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相等度洗脱,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,通过电喷雾离子源,选择正离子模式多反应监测方式检测.结果:腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素的线性范围分别为37.5～1 200 μg·L-1(r=0.998 5),20 ～640 μg·L-1(r =0.996 4),40～1 280 μg·L-1(r=0.999 1),77.5 ～2 480 μg·L-1(r=0.993 5),27.5～880μg·L-1(r=0.992 4),90～2 880 μg·L-1(r=0.9937),加样回收率在92.1％～102.6％,RSD均＜8,1％.腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素在蛹虫草中的平均质量分数分别为268.33,11.28,185.66,1 421.44,10.67,812.21μg·g-1.结论:该法专属性强、快速灵敏,可用于蛹虫草中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素的含量测定.
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不同产地和商品等级延胡索中尿苷、鸟苷、腺苷的含量分析
目的:建立高效液相色谱法同时测定延胡索药材中尿苷、鸟苷和腺苷3种核苷成分含量的方法,并比较不同产地、不同商品等级中3种核苷类成分含量的差异和各成分间的结构比.方法:采用Venusil MP C18(2)色谱柱(4.6 mmx250mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相梯度洗脱(0 ～ 10 min,1％ ～5％A;10 ～ 15 min,5％ ～ 15％ A;15～ 22 min,15％ ～ 17％A;22 ～26 min,17％ ～20％ A;26 ～32 min,20％ ～ 24％ A),流速1.0 mL· min-1,柱温35℃,检测波长260 nm.运用上述方法对38批延胡索药材进行测定,并对测定结果进行聚类分析.结果:测定了延胡索药材中3种核苷类成分的含量,在线性范围内线性关系良好(r ＞0.999 8),平均回收率为99.63％ ～ 104.24％,RSD为0.7％ ～ 2.3％.38批延胡索样品中尿苷、鸟苷和腺苷均可检测到,不同产地延胡索药材中尿苷、鸟苷、腺苷量及组成结构比差异显著;同一产地不同种植户的延胡索药材其3种成分量及组成结构比也存在明显差异.采用聚类分析能将不同产地的38批延胡索药材分为3类.结论:总体上来说,不同产地延胡索药材成分的组成存在显著性差异,不同商品等级延胡索中核苷类含量无明显差异,延胡索药材的质量受自然环境、栽培技术因素的影响.该方法适用于延胡索中尿苷、鸟苷和腺苷的含量测定,为其质量控制提供保证.
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正交试验优化川党参总核苷的提取工艺
目的:优选川党参中核苷类成分的提取工艺条件,为该有效部位的开发提供基础资料.方法:采用超声波提取川党参中核苷类成分,以胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的总提取量为评价指标,在单因素试验基础上,通过正交试验考察不同因素对川党参中核苷类成分提取量的影响.运用HPLC测定胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的含量,流动相甲醇(A)-水(B)梯度洗脱(0～ 10min,1％ ～5％A;10 ～15 min,5％ ～15％A;15 ～22 min,15％ ～ 17％A;22 ～26 min,17％ ～20％A;26 ～32 min,20％ ～24％A),检测波长260 nm.结果:各因素对核苷类成分提取量的影响顺序为甲醇体积分数＞提取次数＞料液比＞提取时间,佳提取工艺为加10倍量水提取2次,每次30 min,川党参中4种核苷类成分总提取量1.523 mg·g-1.结论:建立的HPLC检测川党参中核苷类成分的含量方法准确可靠.优选的提取工艺稳定可行,具有节约成本、快速、高效等优点.
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姜半夏质量标准的研究
目的:建立姜半夏的质量标准.方法:以β-谷甾醇、琥珀酸和鸟苷为指标,采用薄层层析法和高效液相色谱法对收集的姜半夏进行质量标准研究.结果:暂定姜半夏的β-谷甾醇和琥珀酸的薄层层析结果应呈阳性,鸟苷的含量不得少于0.004 mg/g.结论:建立了较为完善的姜半夏质量标准,改变了过去仅依靠经验和感官判断的鉴定方法.
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不同品系栝楼果皮腺嘌呤和鸟苷含量比较
目的：比较不同品系栝楼果皮腺嘌呤、鸟苷含量，为选育良种和评价瓜蒌皮药材质量提供依据。方法采用高效液相色谱法测定3个品系栝楼果皮中腺嘌呤、鸟苷的含量，色谱柱为Waters AtlantisT3-C18（4.6 mm×150.0 mm，5μm），流动相为甲醇-水，检测波长254 nm。结果品系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ栝楼果皮腺嘌呤含量分别为0.1594、0.1596、0.1341 mg/g，鸟苷含量分别为0.0971、0.1279、0.0934 mg/g。结论不同品系栝楼果皮鸟苷含量存在较大差异，以品系Ⅱ果皮中的腺嘌呤、鸟苷含量较高，提示选育良种是提高瓜蒌皮药材腺嘌呤、鸟苷含量的有效途径。
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南京产野生半夏中鸟苷的含量分析
目的对南京产野生半夏进行鸟苷的含量分析,以评价其质量.方法用反相高效液相色谱法建立鸟苷的含量测定方法,以湖北道地产区的野生半夏药材为对照.结果南京产野生半夏中的鸟苷含量为0.0401%～0.0464%,湖北产野生半夏中的乌苷含量为0.0168%.结论南京产野生半夏中鸟苷的含量显著高于湖北道地产区的野生半夏.
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冬虫夏草中核苷类成分的毛细管区带电泳定量分析研究
目的:建立冬虫夏草中核苷类成分(腺苷、鸟苷、尿苷和次黄嘌呤核苷)的毛细管电泳定量分析方法,研究青海产天然冬虫夏草和人工发酵虫草菌粉的核苷类成分差异.方法:采用0.025 mol·L-1硼砂缓冲液,pH 9.5,工作电压为20 kV,毛细管温度25 ℃,波长检测260 nm,对4种核苷定量分析.结果:用毛细管区带电泳法定量分析冬虫夏草及人工发酵虫草菌粉中的腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷,平均加样回收率分别为98.9%,95.1%,97.8%和98.8%,RSD分别为0.4%,1.7%,1.3%和5.0%.在天然冬虫夏草中未检测到腺苷,而在人工发酵虫草菌粉中未检测到次黄嘌呤.结论:本研究方法可满意地用于腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷的定量分析.青海产地道药材冬虫夏草核苷类成分组成与人工发酵虫草菌粉有明显差异.
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高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中核苷类成分的含量
目的:建立毛细管电泳测定液体制剂--四维灵芝液中核苷类成分的方法.方法:熔融石英毛细管柱75 μm id×57 cm (有效长度50 cm);缓冲体系 20 mmol*L-1硼砂含30 mmol*L-1 SDS,添加5%乙醇(95%),pH 10.0(1 mol*L-1NaOH调节);气动进样时间15 s;分离电压10 kV(恒压方式);柱温 20 ℃;检测波长 254 nm .结果:回归方程腺苷:Y=0.0705+0.01707X(r=0.9995);鸟苷:Y=0.0232+0.01864X(r=0.9999).平均回收率(n=5):腺苷为99.22%,RSD=3.66%;鸟苷为104.3%,RSD=1.91%.根据建立的方法,测定了9批样品腺苷与鸟苷的含量.结论:方法简便、快速、准确、重现性好,可用于样品核苷类成分测定.
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丛枝菌根真菌对半夏产量及化学成分的影响
目的:研究丛枝菌根真菌(AM)对半夏叶形指数、繁殖系数、产量及化学成分等的影响.方法:半夏生长期间常规测量叶长、叶宽、株高及叶柄直径(茎粗)直至倒苗,计算叶形指数;收获块茎后,测量并计算块茎产量;采用高效液相色谱法测量收获块茎和赫章县栽培半夏块茎中鸟苷含量;采用紫外-可见光分光光度计法测量收获块茎和赫章县栽培半夏块茎中生物碱含量.结果与结论:接种AM真菌可显著提高半夏块茎产量,提高繁殖系数;接种AM真菌提高半夏叶形指数,使叶片趋向竹叶型,推迟半夏倒苗时间;摩西球囊霉+根内球囊霉第1批处理(gm+gi 1)对提高半夏块茎鲜重、干重及繁殖系数的效果为明显,说明多菌协同、接种时间越长对提高半夏块茎产量和繁殖系数效果越为明显.接种AM真菌可显著提高半夏块茎鸟苷、生物碱含量,且接种菌剂的处理生物碱及鸟苷含量大多高于赫章县栽培半夏;摩西球囊霉+根内球囊霉第2批处理(gm+gi 2)对增加块茎鸟苷、生物碱含量的效果为明显,说明多菌协同,且在半夏生长中期进行接种效果好.
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蛴螬的TLC鉴别与HPLC含量控制方法
建立蛴螬的TLC鉴别与蛴螬中肌苷、鸟苷含量同时测定的HPLC方法.采用薄层色谱分析用硅胶G板对蛴螬进行定性鉴别;采用色谱条件:色谱柱为Waters HSS T3(4.6 mm×250mm,5μm);流动相为乙腈(A)和0.08％三氟乙酸(B)进行梯度洗脱;检测波长为260 nm;流速为1.0 mL· min-1;柱温为30℃.TLC鉴别方法重现性好,专属性强.含量测定中的肌苷和鸟苷的线性关系良好(r ＞0.999 8);平均回收率分别为96.53％(RSD 1.6％)和99.71％(RSD 2.7％).建立方法简单、准确、重现性好,可为该药材的质量标准提高提供参考.
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组培半夏中鸟苷的含量分析
半夏为中医临床上常用的中药之一,药用历史悠久,具燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效.半夏多为野生,由于配方用药和原料药需求量的不断增加,再加上近年来山地开垦、过度采挖、盲目开发等多种人为因素的影响,使得野生资源日趋枯竭而难以满足市场的需求.通过研究认为,采用组织培养获得种苗后进行种植以获得优质的半夏,是解决半夏资源枯竭、满足市场需要的有效途径之一.为此,作者对半夏进行了快速繁殖的初步研究,并获得了比较理想的半夏生药[1].
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半夏的HPLC指纹图谱研究
半夏Pinelia ternate(thumb)Breit为天南星科植物的干燥块茎,具有燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结之功效,主要含鸟苷、腺苷、胆碱、盐酸麻黄碱等化学成分,当前对半夏的研究主要是含量测定和以氨基酸类成分为主的指纹图谱的研究,但由于药材各产地生境不同,其化学成分出现差异,为更好地控制其生产的质量,本研究根据鸟苷具有改善心脑循环,防止心率失常等作用,选其作为参照物,采用HPLC确定半夏药材的指纹图谱,作为半夏药材的质量控制方法.
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泰半夏干物质及活性成分积累动态研究
目的:通过研究不同生长发育期泰半夏干物质及有效化学成分积累规律,以期为半夏的生理与栽培技术提供参考依据.方法:以泰半夏为材料进行盆栽试验,于春秋2个生育周期的各生长时期分别取样测定半夏各器官干物质积累量及块茎总游离有机酸和鸟苷含量.结果:泰半夏在年生长周期内要经历春、秋2个生长高峰,在春季生长过程物质积累量较大,总游离有机酸和鸟苷含量在生长期内呈上升趋势,但在抽薹期与春季倒苗期会有所下降.结论:高温和抽薹会显著影响有机酸的积累,生产上应合理防止热伤害.
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腺病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷体系对晶状体上皮细胞的作用
目的观察腺病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)基因/丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)体系对体外培养的牛晶状体上皮细胞的杀伤效应,并初步探讨晶状体上皮细胞死亡的机制.方法利用携带HSV-tk基因的重组腺病毒载体adenoviral vector(ADV)/HSV-tk,感染体外培养的牛晶状体上皮细胞后用GCV治疗,并观察疗效.以切除E1区的空腺病毒载体ADV/Empty作为对照.以电镜、TUNEL法及吖啶橙-溴化乙啶染色法检测晶状体上皮细胞的凋亡及坏死情况.结果 GCV在体外对感染ADV/HSV-tk的牛晶状体上皮细胞有明显的杀伤作用,且具有旁观者效应,而对转染了ADV/Empty的细胞则无显著的毒性.GCV的杀伤效应随剂量的增大及时间延长而增强.导入HSV-tk基因的晶状体上皮细胞出现明显的细胞凋亡现象,而且细胞的凋亡率(t=7.28,P<0.01)及坏死率(t=14.72,P<0.001)显著高于对照组.结论腺病毒载体可将HSV-tk基因转导入牛晶状体上皮细胞中;GCV可有效杀伤表达HSV-tk的晶状体上皮细胞;HSV-tk/GCV体系引发的细胞死亡可能与凋亡及坏死两种机制有关;腺病毒载体介导的HSV-tk/GCV体系有可能成为后发性白内障的有效治疗方法.
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天然与发酵培养冬虫夏草中核苷类成分的含量及其变化
目的比较天然和人工培养冬虫夏草中核苷类成分的含量,并考察其变化.方法用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量;考察湿热对冬虫夏草中核苷类成分含量的影响.结果人工冬虫夏草的核苷含量明显高于天然冬虫夏草;新采集的天然冬虫夏草中核苷类物质含量极低,而采集日久者核苷类成分含量较高;湿热可明显增加天然冬虫夏草中核苷类物质的含量,但对人工冬虫夏草中核苷类成分的含量无明显影响.结论天然和人工冬虫夏草中核苷类成分存在一定差异,天然冬虫夏草中核苷类物质可能主要来源于大分子核苷(酸)的降解.
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卷柏化学成分研究
目的研究中药卷柏(Selaginella tamariscina (Beauv.) Spring)水提物中的化学成分.方法利用Sephadex LH-20及硅胶等色谱技术进行分离纯化,根据理化性质、光谱数据进行结构鉴定.结果得到4个化合物,分别鉴定为1-羟基-2-[2-羟基-3-甲氧基-5-(1-羟基乙基)-苯基]-3-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-丙烷-1-O-β-D-葡糖苷(卷柏苷B,I),腺苷(II),鸟苷(III),熊果苷(IV).结论卷柏苷B为新化合物,腺苷、熊果苷、鸟苷为首次从卷柏属植物中分离得到.
