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毛细管区带电泳法分离测定铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠
目的建立利用毛细管区带电泳(CZE)技术分离测定铁强化酱油中的铁营养强化剂乙二胺四乙乙酸铁钠(NaFeEDTA)的方法.方法在25kV电压下阳极端检测,采用合有30mmol/L柠檬酸、20mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.15mmol/L十二烷基溴化铵(CTAB)和0.05mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)的缓冲溶液作为分离介质,254nm紫外检测器检测,样品经稀释后进样分析.结果方法的线性范围广,精密度和准确度高,重复测定(n=6)的相对标准偏差RSD为2.15%,样品平均加标回收率为94.3%～101.2%.NaFeEDTA在铁强化酱油的低检出限为4μg/ml(S/N=3).结论使用不同品牌的酱油作为载体对NaFeEDTA的测定没有影响,本方法具有直接、准确、快速、简便等优点.
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毛细管区带电泳法测定黄精和玉竹多糖的含量及其单糖组成
目的:建立毛细管区带电泳(CZE)法测定黄精和玉竹多糖含量的方法,并用CZE法测定其单糖组成,为探讨这两种功效相近中药材的药效物质基础提供参考.方法:通过正交试验对黄精和玉竹多糖降解条件进行优化.以1-苯基-3-甲基-吡哇啉酮(PMP)为单糖的柱前衍生化试剂,用CZE法测定黄精和玉竹多糖的含量及其单糖组成.同时与采用苯酚-硫酸法测定黄精和玉竹多糖含量的结果进行比较.结果:黄精和玉竹多糖均由木搪、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸等组成,但组成比例差异显著.结论:CZE法用于测定黄精和玉竹多糖的含量及单糖组成准确、可靠,结果满意.其单糖组成的异同一定程度上佐证了两者功效的相近和区别,提示两者临床上不能混淆使用.
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冬虫夏草中核苷类成分的毛细管区带电泳定量分析研究
目的:建立冬虫夏草中核苷类成分(腺苷、鸟苷、尿苷和次黄嘌呤核苷)的毛细管电泳定量分析方法,研究青海产天然冬虫夏草和人工发酵虫草菌粉的核苷类成分差异.方法:采用0.025 mol·L-1硼砂缓冲液,pH 9.5,工作电压为20 kV,毛细管温度25 ℃,波长检测260 nm,对4种核苷定量分析.结果:用毛细管区带电泳法定量分析冬虫夏草及人工发酵虫草菌粉中的腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷,平均加样回收率分别为98.9%,95.1%,97.8%和98.8%,RSD分别为0.4%,1.7%,1.3%和5.0%.在天然冬虫夏草中未检测到腺苷,而在人工发酵虫草菌粉中未检测到次黄嘌呤.结论:本研究方法可满意地用于腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷的定量分析.青海产地道药材冬虫夏草核苷类成分组成与人工发酵虫草菌粉有明显差异.
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黄连不同炮制品HPCE特征图谱研究
目的:建立黄连不同炮制品的高效毛细管区带电泳(HPCE)图谱,考察不同炮制品中生物碱类成分的差异,为黄连的炮制原理研究提供参考.方法:采用HPCE,以苄基三乙基氯化铵为内标物,对黄连不同炮制品中生物碱成分进行分析,计算各色谱峰的相对保留时间和峰面积比值,比较其色谱图及主要生物碱类成分变化情况.电泳条件以0.05 mol·L~(-1)Na_2B_4O_7(H_3PO_4调pH 7.0)-MeOH(65:35)溶液为背景电解质,运行电压15 kV,紫外检测波长225 nm,室温.结果:黄连不同炮制品的HPCE图谱均有8个特征峰,均得到较好的分离,不同炮制品之间同一色谱峰峰面积比值差异显著,同一炮制品的8个峰之间的比值相对恒定.结论:建立的黄连不同炮制品的HPCE图谱稳定、可靠,可作为黄连的特征图谱.
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缓冲液种类对毛细管区带电泳分离蛋白质的影响
目的寻找可同时分离酸性和碱性蛋白的合适缓冲液.方法以马心肌红蛋白、β-乳球蛋白A、碳酸酐酶Ⅱ和核糖核酸酶A为标准混合样品,详细研究了四种缓冲液,磷酸盐、硼酸盐、Tricine和Tris对毛细管区带电泳分离蛋白质的影响.结果磷酸盐缓冲液与毛细管壁和蛋白均可发生作用,能改变碱性蛋白质的迁移规律;而硼砂缓冲液主要是通过与毛细管壁作用抑制蛋白的吸附,不改变蛋白质的迁移规律;Tris和Tricine不能有效地抑制蛋白质的吸附.结论磷酸盐是同时分离酸性和碱性蛋白质的较好缓冲液.
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毛细管区带电泳法测定头孢氨苄胶囊的含量
目的毛细管区带电泳法测定头孢氨苄胶囊的含量.方法毛细管区带电泳法,有效毛细管长度40cm×75μm;硼砂缓冲液25mmol·L-1(pH7.89),分离电压14kV,温度25℃,检测波长214nm,枸橼酸昔多芬为内标.结果头孢氨苄在33.9～678μg·ml-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 6),回收率在97.9%～102.4%之间.结论本法简单、快速、灵敏,可用于头孢氨苄胶囊的含量测定.
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高效毛细管区带电泳法测定羟基喜树碱注射液的含量
目的建立羟基喜树碱注射液的毛细管区带电泳测定方法 .方法在Beckman 5000型毛细管电泳仪上,采用石英毛细管柱, 以20mmol*L-1硼砂溶液为电极缓冲液,214nm的检测波长,进行定量分析.结果在1～10μg*ml-1范围内呈良好的线性关系,其回归方程为:Y =0.005 52X+0.003 5,r=0.999 6,回收率大于95.68%,小检测限为0.5μg*ml- 1(S/N=3).结论毛细管区带电泳可以用于羟基喜树碱注射液的定量分析,具有高效、快速、简便、样品及试剂消耗少等优点.
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九州虫草的核苷类成分及不同部位两种活性成分含量的分布
目的快速测定九州虫草中的部分核苷类成分及其主要活性成分虫草素与腺苷的含量,并考察九州虫草不同部位虫草素和腺苷含量的分布.方法用高效毛细管区带电泳法确定野生和人工九州虫草中的核苷类成分,测定虫草素和腺苷的含量,并比较它们在九州虫草不同部位含量的分布.结果蒙山九州虫草中含有至少8种核苷或碱基,其中抗肿瘤活性成分虫草素的含量远高于冬虫夏草和蛹虫草,且人工栽培九州虫草中虫草素的含量又显著高于野生九州虫草.腺苷主要存在于九州虫草子座中,而虫草素则不仅在九州虫草子座中含量甚高,人工栽培九州虫草虫体中虫草素含量也较高.结论天然和人工九州虫草及其不同部位的核苷和碱基成分存在一定差异,九州虫草中的虫草素含量高,具有良好的栽培、药用与开发前景.
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毛细管电泳中万古霉素拆分氧氟沙星对映体手性识别位点的探讨
以大环类抗生素万古霉素和去甲万古霉素为手性选择剂,通过比较手性选择剂的浓度、电泳缓冲液pH、分离电压对氧氟沙星、安妥沙星及其右旋异构体拆分的影响作用,结合利用them 3D软件中的分子力学算法(moleeular mechanical method)对万古霉素、去甲万古霉素不同空间区域(domain)与氧氟沙星对映体、安妥沙星及其右旋异构体相互作用的稳定结合能的计算结果,探讨万古霉素在毛细管电泳中拆分氧氟沙星的手性识别位点.万古霉素和去甲万古霉素均可形成2个不同的空间域,万古霉素I区为拆分氧氟沙星的手性识别位点:氧氟沙星C-6的羧基与万古霉素糖链中羟基的氢键相互作用、氧氟沙星分子与万古霉素I区形成的袋状结构的匹配程度和氧氟沙星C-10哌嗪侧链中的甲基与万古霉素分子中N甲基亮氨酸中的甲基的疏水相互作用,决定了万古霉素手性识别位点与氧氟沙星的相互作用程度.
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胆汁酸类化合物的毛细管区带电泳法分析
目的建立毛细管区带电泳法分离胆汁酸类化合物.方法缓冲液含硼砂126 mmol·L-1、磷酸氢二钠43 mmol·L-1,18%甲醇,磷酸调至pH 9.3.毛细管柱570 mm×0.05 mm(有效长度500 mm),操作电压30 kV,温度30℃,检测波长200 nm,压力进样,进样量5 kPa×8 s.结果 30 min内一次性分离了8种结合型和游离型胆汁酸.加样回收率89%～107%.结论本法简便,可用于熊胆中胆汁酸的测定.
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盐酸替罗非班的毛细管区带电泳手性分离
目的:建立盐酸替罗非班对映异构体的毛细管区带电泳手性分离方法并测定其R-异构体的含量.方法:通过手性拆分剂的种类及浓度、运行缓冲液的浓度及pH值、分离电压及温度的优化,选择佳手性分离条件.结果:采用未涂层熔融石英毛细管(46 cm×75 μm,有效长度39 cm),以含0.6 mmol·L-1羟丙基-γ-环糊精的50 mmol·L-磷酸盐缓冲液(pH 2.0)-甲醇(95:5)为背景电解质溶液,检测波长200 nm,工作电压为18 kV,温度为15℃,基线分离了盐酸替罗非班与R-异构体.结论:所建立的方法简便、快速,可用于盐酸替罗非班中R-异构体的测定.
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尼妥珠单抗毛细管区带电泳鉴别方法的建立与验证
目的:建立尼妥珠单抗的毛细管区带电泳鉴别分析方法.方法:利用基于荷质比的毛细管区带电泳技术建立尼妥珠单抗的鉴别分析方法,并对所建立的方法进行系统适用性、专属性、精密度等方法学验证.结果:利用该方法对各单抗参比品进行测定,系统适用性中参比品的主峰迁移时间差均＜ 0.1 min,该方法能够对尼妥珠单抗和其他单抗进行有效的区分,不同单抗的主峰迁移时间差均＞0.1 min,在毛细管区带电泳色谱行为上显示出产品专属性.在日内精密度试验中,重复制备样品及重复进样的主峰迁移时间RSD值分别为0.081％和0.035％;在日间精密性评价中,主峰迁移时间的RSD值为0.566％.结论:建立了简便、快速、准确的尼妥珠单抗毛细管区带电泳鉴别方法,可用于尼妥珠单抗及其他抗体类产品的常规检定.
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用于肠道病毒71型灭活疫苗纯度分析的毛细管区带电泳法研究
目的:建立毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)方法,用于肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)灭活疫苗纯度检测及分析.方法:以样品检测峰高度、分离度、信噪比为判断标准,对不同运行缓冲液、样品缓冲液、毛细管长度、上样时间等进行选择优化,确定毛细管区带电泳条件,同时采用HPLC法分离及免疫共沉淀法对各样品检测峰进行鉴定.利用建立的CZE方法对7批EV71灭活疫苗原液进行检测,采用面积归一法,计算疫苗原液纯度.结果:当运行缓冲液为pH 8.2硼酸缓冲体系、盐浓度为150 mmol· L-1、SDS浓度为10 mmol· L-1时,上样时间为100 s、毛细管有效长度为50 cm时,主检测峰高度高、信噪比优和分离度大于1.5.以含SDS 10 mmol·L-1的150 mmol·L-1 pH8.2硼酸盐缓冲液为运行缓冲液,5 mmol·L-硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,以长50 cm、内径为50 μm的无涂层石英毛细管作为色谱分离柱,对EV71灭活疫苗原液纯度进行检测,可见2个样品检测峰,经HPLC法及免疫共沉淀法鉴定,样品检测峰1为EV71病毒颗粒,迁移时间6.98 min、样品检测峰2为杂质,迁移时间8.42 min;连续进样6次,2个样品检测峰的峰面积、峰起时间、峰止时间和保留时间的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均＜2.0％.应用该方法对7批EV71灭活疫苗原液纯度进行检测,为95.3％ ～99.4％,均大于95％.结论:初步建立了可用于EV71灭活疫苗原液纯度测定的毛细管区带电泳方法,为该疫苗的质量研究、工艺过程控制及稳定性研究奠定了基础.
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CZE分析抑肽酶中去丙氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶
目的:建立毛细管区带电泳分析抑肽酶中的去丙氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶的方法.方法:未涂层石英毛细管柱60 cm×75 μm;运行缓冲液120 mmol·L-1的磷酸二氢钾溶液(pH2.5);运行电压为12 KV,柱温30℃;检测波长214 nm.结果:抑肽酶、去丙氨酸-抑肽酶、去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶迁移时间的RSD分别为1.13%,1.11%,1.11%,校正峰面积(A/t)的RSD分别为3.96%,3.94%,3.84%,A/t%的RSD分别为0.18%、0.96%,1.13%.结论:本法分析抑肽酶中的去丙氨酸-抑肽酶和去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶高效快速、杂质分离度高、操作成本低,有助于控制其产品质量.
关键词： 毛细管区带电泳 抑肽酶 去丙氨酸-抑肽酶 去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶 -
毛细管区带电泳法测定杜仲药材中绿原酸的含量
目的:建立采用高效毛细管电泳测定杜仲中有效成分绿原酸(CA)含量的方法,比较不同产地杜仲中绿原酸含量.方法:采用毛细管区带电泳(CZE),以内标法测定:运行电解质为含80 mmol·L-1硼砂缓冲液-100 mmol·L-1氢氧化钠(20:1,pH=9.32),工作电压30 kV,柱温25 ℃,检测波长为340nm,内标物为盐酸小檗碱.结果:绿原酸在0.006～0.574 mg·mL-1的浓度范围内呈良好的线性关系r=0.9994),平均回收率为101.43%,RSD为1.44%.结论:该方法简便、准确,重复性好.
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毛细管区带电泳测定人血浆中麦考酚酸浓度
建立了人血浆中麦考酚酸浓度的毛细管区带电泳测定法.200μL的血浆样品经400μL的乙腈沉淀蛋白后,紧接一段水柱进样,进样量为:0.5 psi×10s.分离采用内径75μm,有效长度50 cm的未涂层熔硅弹性石英毛细管柱.通过均匀设计实验,选定pH为8.60的硼酸缓冲液(硼酸初始浓度为200 mmol/L)为背景缓冲液.结果显示,测定方法的标准曲线在0.625～30.0 μm/mL.的范围内,r平均值大于0.9997;检测下限为0.200μg/mL;日内、日间精密度均小于4.45%.应用本方法和高效液相色谱.串联质谱法,对14份接受麦考酚酸酯治疗的肾移植术后患者的血样进行分析.表明本方法准确、精密、经济,对于麦考酚酸的临床定量极具价值.
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毛细管区带电泳研究化合物S009和CC趋化因子受体4三个胞外区相互作用
CC趋化因子受体4(CCR4)是G蛋白偶联受体的一种,在过敏性炎症中起着举足轻重的作用.在本研究中,我们合成了CCR4的三个胞外loop区(EL 1-EL3),用毛细管区带电泳(CZE)的方法研究化合物S009和3个胞外loop区的相互作用.分别进行了定性和定量研究.实验数据表明,化合物S009和EL3有相互作用并通过Scatchard方程计算得到化合物S009和EL3之间的结合常数为(12.5±0.19)× 104 M-1.我们的研究确证了CCR4结合小分子的具体胞外域并为进一步发现新型CCR4拮抗剂提供了有帮助的信息.
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毛细管区带电泳研究凝血酶与蛇目菊和肉苁蓉提取物的相互作用
目的采用毛细管区带电泳法研究凝血酶与蛇目菊和肉苁蓉提取物的相互作用.方法研究了在pH 7.2的Tris-醋酸缓冲溶液中,凝血酶和天然提取物于25 ℃以不同比率混合温育20 min后的相互作用情况,分离在5 min内完成.结果与阳性对照和阴性对照相比,蛇目菊中的提取物CB-1, CB-2与凝血酶有相互作用,并计算得到了CB-1,CB-2和凝血酶的结合常数;蛇目菊中的提取物CB-3和肉苁蓉中的HC-1, HC-2, HC-3与凝血酶没有相互作用.结论本实验采用的毛细管区带电泳研究天然提取物与凝血酶相互作用的方法快速、准确、可靠.
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利用亲和毛细管电泳和毛细管区带电泳快速筛选新疆一支蒿提取物中与HIV-1包膜蛋白gp120上V3环以及逆转录酶相互作用的活性成分
HIV-1侵入宿主细胞的过程中与一系列受体和协同受体结合.这些受体和协同受体都由HIV-1的包膜蛋白gp120识别,在病毒入侵过程中是重要环节之一.逆转录酶拮抗剂是早针对抗病毒治疗的几个靶点之一,对其的改进对于寻找新型拮抗剂十分关键.许多天然植物如新疆一支蒿被报道具有抗病毒的生物活性.这些天然植物也许就是潜在的靶向针对包膜蛋白gpl20上V3环或者逆转录酶的艾滋病毒抑制剂.V3环结构中的相对保守的肽段R15K可以被用来研究蛋白的相互作用.本研究利用毛细管亲和色谱方法研究了R15K与新疆一支蒿各种粗提物之间的相互作用.利用毛细管区带电泳法研究了逆转录酶与新疆一支蒿各种粗提物之间的相互作用.实验结果表明,新疆一支蒿的氯仿层提取物与R15k和逆转录酶之间均存在较明显的相互作用.本研究提供了一种可以快速高通量筛选天然植物中抗艾滋病毒的活性成分的方法.
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基于毛细管区带电泳的IgG2型单抗电荷异质性分析方法的建立
目的 建立IgG2型单抗毛细管区带电泳(CZE)电荷异质性分析方法.方法 通过对三乙基四胺(TETA)和6-氨基己酸(EACA)浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度等参数进行优化,建立能够有效分离和定量IgG2单抗电荷异构体的CZE分析方法,并对该方法进行方法学验证和应用评价.结果 TETA和EACA浓度,以及电泳缓冲液pH和毛细管分离温度的变化,会影响IgG2单抗的电荷异构体分离效果,通过一系列参数的优化,终确定了方法参数(400 mmol·L-1EACA/0.05％ TETA,pH 6.2,分离电压30 kV,分离温度35℃).建立的CZE分析方法可以有效地对IgG2单抗电荷异构体进行分离,并具有良好的精密度,峰面积的RSD值小于3.0％.该方法同样适用于IgG1和IgG4型单抗的电荷异质性分析,同时,根据电泳图谱和迁移时间,能够对不同亚型和靶点的单抗进行有效的区分鉴别.结论 建立的IgG2型单抗毛细管区带电泳方法,可有效分离电荷异构体,并具有良好的精密度,可作为平台方法应用于IgG2型单抗的电荷异质性分析和鉴别.
