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UPLC-MS/MS同时测定蛹虫草中6种成分的含量
目的:建立同时测定蛹虫草中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素含量的方法.方法:液质联用技术,以甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相等度洗脱,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,通过电喷雾离子源,选择正离子模式多反应监测方式检测.结果:腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素的线性范围分别为37.5～1 200 μg·L-1(r=0.998 5),20 ～640 μg·L-1(r =0.996 4),40～1 280 μg·L-1(r=0.999 1),77.5 ～2 480 μg·L-1(r=0.993 5),27.5～880μg·L-1(r=0.992 4),90～2 880 μg·L-1(r=0.9937),加样回收率在92.1％～102.6％,RSD均＜8,1％.腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素在蛹虫草中的平均质量分数分别为268.33,11.28,185.66,1 421.44,10.67,812.21μg·g-1.结论:该法专属性强、快速灵敏,可用于蛹虫草中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤、虫草素的含量测定.
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正交试验优化川党参总核苷的提取工艺
目的:优选川党参中核苷类成分的提取工艺条件,为该有效部位的开发提供基础资料.方法:采用超声波提取川党参中核苷类成分,以胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的总提取量为评价指标,在单因素试验基础上,通过正交试验考察不同因素对川党参中核苷类成分提取量的影响.运用HPLC测定胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的含量,流动相甲醇(A)-水(B)梯度洗脱(0～ 10min,1％ ～5％A;10 ～15 min,5％ ～15％A;15 ～22 min,15％ ～ 17％A;22 ～26 min,17％ ～20％A;26 ～32 min,20％ ～24％A),检测波长260 nm.结果:各因素对核苷类成分提取量的影响顺序为甲醇体积分数＞提取次数＞料液比＞提取时间,佳提取工艺为加10倍量水提取2次,每次30 min,川党参中4种核苷类成分总提取量1.523 mg·g-1.结论:建立的HPLC检测川党参中核苷类成分的含量方法准确可靠.优选的提取工艺稳定可行,具有节约成本、快速、高效等优点.
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整体毛细管电色谱测定冬虫夏草中胞苷与腺苷的含量
目的:采用聚甲基丙烯酸丁酯(PBMA)整体柱毛细管电色谱法测定冬虫夏草中胞苷和腺苷的含量.方法:采用自制的PBMA电色谱整体柱(总长为34.5 cm,有效长度26.0 cm),流动相20 mmol·L~(-1)硼砂水溶液(pH 3.5),运行电压15kV,压力进样(6×10~5)Pa×0.1 min;柱温30℃,检测波长214 nm,内标溶液100μg·mL~(-1)甲氧苄啶(TMP)溶液(乙醇-流动相1:1为溶剂).结果:两核苷的在12.5～125 mg·L~(-1)线性关系良好.检测限(S/N=3)及定量限(S/N=10)分别为:胞苷2.14,7.14 mg·L~(-1);腺苷1.88,6.25 mg·L~(-1).两核苷加样回收率在97.2%～103.5%,RSD在0.9%～2.6%.结论:该方法可用于冬虫夏草中胞苷和腺苷的含量测定.
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5-脱氧杂氮胞苷对人肺腺癌细胞系增殖的影响
目的:探讨DNA甲基化异常与肺腺癌间的相关性及5-脱氧杂氮胞苷对肺癌细胞株增殖的影响及其机制.方法:用5-脱氧杂氮胞苷处理肺腺癌细胞株SPC-A-1,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,Western-blot检测Apaf-1蛋白表达的变化,RT-PCR法比较Apaf-1基因和甲基转移酶mRNA表达量的变化.结果:5-脱氧杂氮胞苷处理36 h后Apaf-1蛋白和mRNA表达增加,而DNA甲基转移酶mRNA表达明显降低;G0/G1期细胞比例增加到(80.2±2.88)%,S期细胞比例降低至(6.4±0.62)%,G2/M期细胞比例增加到 (13.4±0.93)%,凋亡率增加到(13.5±0.97)%. 结论:肺腺癌的发生与DNA甲基化异常有关,甲基化酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷可能通过抑制甲基转移酶抑制抑癌基因启动子区域的高甲基化,恢复其生长调控功能,从而使肺癌细胞株的恶性生物学行为发生逆转.
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高效液相色谱法测定蛴螬中7个成分的含量
目的 建立蛴螬中尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷含量的HPLC方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters HSS T3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)和水(B)进行梯度洗脱,检测波长为260 nm,流速为1.0mL·min-,柱温为30℃.结果 7种成分线性回归方程的相关系数为0.999 1～1.000 0;平均回收率(n=6)在91.2％～97.4％,RSD在1.5％～2.3％.结论 该方法简便、准确、可靠,可为蛴螬的质量控制提供参考.
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不同采收期太子参中13种核苷类成分的含量测定研究
目的 建立超高效液相色谱-三重四级杆线性离子肼复合质谱(QTRAP UPLC-MS/MS)同时测定太子参中13种核苷类成分含量的方法,分析不同生长期太子参中核苷类成分积累的动态变化.方法 采用Waters Atlantis T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm),以5 mmol·mL-1醋酸铵(B相)-甲醇(A相)为流动相,0.4 mL·min-1梯度洗脱:0～4.5 min,3％～4％A;4.5～8 min,4％ ～ 18％ A;8 ～ 10 min,18％ A;10～ 10.1 min,18％～3％A;10.1～13 min,3％A.正离子多反应监测(MRM)模式测定.结果 13种核苷类成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r ＞0.991 0);加样回收率为95.52％～105.07％.太子参核苷类成分中,以胞苷、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷含量较高;不同生长期太子参核苷类成分含量有所差异,6月中旬含量相对较高.结论 该方法简便、灵敏,结果准确、可靠,为探索太子参药材的品质形成机制及确定药材适宜采收期提供依据.
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UPLC-MS/MS法同时测定金水宝胶囊中5种成分的含量
目的 建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定金水宝胶囊中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤的含量.方法 采用UPLC-MS/MS法.色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-0.1％甲酸溶液(等度洗脱),采用电喷雾电离源,多反应离子监测(MRM),用于定量分析的腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤检测离子对m/z分别为268.1/136、244.2/112.1、284.1/152.1、183.1/69、136.1/119.1.外标法定量分析.结果 腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤的质量浓度范围分别在10～320、5～160、15～480、100～3200、10～320 ng/mL范围内与各自的峰面移呈良好的线性关系(r=0.9974、0.9953、0.9982、0.9951、0.9915).加样回收率在95.13％～99.87％范围内,RSD均低于2.13％.腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤在金水宝胶囊中平均含量分别为2752.6、298.9、2146.5、11051.4、479.4 μg/g.结论 该法专属性强、快速灵敏,可用于金水宝胶囊中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤的含量测定.
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DNA甲基化对细胞氧糖剥夺后复糖复氧模型中脑红蛋白持续表达的影响
目的 探讨基因组DNA甲基化对于细胞氧糖剥夺后复糖复氧(OGD/R)模型脑红蛋白持续表达的影响.方法 以A549细胞株为研究对象,实验组细胞在含10 μmol/L的5-氮杂胞苷完全培养基中培养4d,而对照组细胞则在完全培养基中培养相同天数,同时行氧糖剥夺处理后,测量不同时间点两组细胞脑红蛋白表达、DNA甲基化转移酶表达、全体DNA甲基化水平及细胞抑制率的变化.结果 相较于对照组,实验组中全体甲基化水平显著下降[6 h:(1.0±0.0)比(2.1±0.3);12 h:(0.9±0.0)比(1.4±0.0);24 h:(0.9±0.0)比(2.6±0.2);36 h:(0.9 ±0.0)比(2.9±0.1)],脑红蛋白持续高表达[NGB-PCR6h:(3.3±1.1)比(0.4±0.1);12 h:(3.2 ±0.8)比(0.1±0.1);24h:(4.6±0.6)比(0.2±0.0);36 h:(5.1±0.3)比(0.1±0.1)],且在相同时间点实验组细胞抑制率较对照组低[6 h:(10.4±0.5)比(14.1±0.7);12 h:(22.0±1.3)比(35.1±0.5);24 h:(25.7±1.0)比(40.6±1.3);36 h:(30.0 ±0.8)比(44.4±0.7)],差异均有统计学意义(均P＜0.05).实验组中不同OGD时间点3种甲基化转移酶mRNA表达水平均高于对照组,其中DNMT1及DNMT3B差异有统计学意义(P＜0.05),而DNMT3A表达在相同时间点两组对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在A549细胞株OGD/R模型中,基因组DNA甲基化将导致脑红蛋白的不持续表达,而当使用DNA甲基化抑制剂后能使脑红蛋白表达量升高.
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广东桑叶化学成分及其α-葡萄糖苷酶活性研究
目的 研究广东桑Morus atropurpurea叶的化学成分和生物活性.方法 采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20及HPLC等柱色谱技术进行分离纯化,根据波谱数据及理化性质鉴定化合物结构;采用pNP法测定了多羟基生物碱类化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.结果 从广东桑叶乙醇提取物中分离得到了18个化合物,分别鉴定为1-脱氧野尻霉素(1)、fagomine(2)、胞苷(3)、2-(1',2',3',4'-四羟基丁基)-5-(2",3",4"-三羟基丁基)-吡嗪(4)、2-(1',2',3',4'-四羟基丁基)-6-(2",3",4"-三羟基丁基)-吡嗪(5)、2-(1',2',3',4'-四羟基丁基)-5-(1",2",3",4"-四羟基丁基)-吡嗪(6)、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、山柰酚3-O-β-D-葡萄糖苷(8)、山柰酚3-O-β-D-芸香糖苷(9)、菊苣苷(10)、roseoside (11)、植醇(12)、伞形花内酯(13)、3-醛基吲哚(14)、咖啡酸乙酯(15)、蔗糖(16)、B-谷甾醇(17)、胡萝卜苷(18).结论 化合物5、6、14、15为首次从桑属植物中分离得到,化合物3、4、7～13、16为首次从该植物中分离得到.化合物1～6具有一定的抑制α-葡萄糖苷酶的活性.
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塔里木盆地17个引进红枣品种HPLC指纹图谱及定量测定的研究
目的 建立塔里木盆地17个引进红枣品种高效液相色谱指纹图谱方法,为红枣品质的科学评价和产品的质量控制提供科学依据.方法 采用HPLC法,色谱柱TOSOH TSKgel ODS-100V C18柱(150 mm×4.6 mm,3μm),流动相为甲醇-0.3％磷酸二氢钾缓冲水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长260 nm.对采自塔里木大学种质资源圃中17个引进品种的红枣进行指纹图谱研究,用药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A进行评价.结果 建立了红枣的指纹图谱,标定了22个共有峰,各峰分离度良好,并对尿嘧啶、次黄嘌呤、腺嘌呤、胞苷、尿苷、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)进行测定.结论 HPLC指纹图谱分析技术可用于红枣的鉴别.
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不同产地加工方法太子参核苷类成分Q-TRAP-LC-MS/MS分析
目的 探讨不同加工方法对太子参核苷类成分量的影响.方法 采用Q-TRAP-LC-MS/MS技术同时测定不同加工太子参药材中13种核苷类成分的量.结果 太子参核苷类成分中,以胞苷、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷的量较高;不同加工方法对太子参中核苷的量有一定影响,烘干样品核苷的量普遍高于晒干样品.结论 为揭示加工对太子参化学成分的影响及优选太子参适宜产地加工方法提供基础资料.
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犬骨髓间质干细胞体外诱导及非诱导培养后向心肌细胞的分化
目的:骨髓间质干细胞体外诱导和非诱导培养向心肌细胞分化的结果的对比.方法:实验于2003-03/2004-12在阜外心血管病医院中心实验室完成.①分离犬骨髓间质干细胞.②于体外培养,应用不同浓度(0,6,8,10,12,14,20 μmol/L)的5-氮胞苷定向诱导并连续传代培养4周,未诱导的细胞培养8周.③进行细胞形态学、细胞免疫组织化学、透射电镜鉴定.结果:①骨髓间质干细胞于5-氮胞苷诱导培养2周时,α-肌动蛋白、TroponinⅠ染色阴性;4周时,α-肌动蛋白染色阳性,Troponin Ⅰ阴性;电镜下可见肌丝结构,其中8 mmol/L 5-氮胞苷诱导的间质干细胞肌丝结构排列较规则.②骨髓间质干细胞非诱导培养8周时,α-肌动蛋白染色阳性,TroponinⅠ阴性,电镜下亦可见肌丝结构形成;而培养4周时全部为阴性.结论:骨髓间质干细胞经5-氮胞苷诱导培养4周及未诱导连续培养8周均可定向转化为具有肌丝结构的肌样细胞,而非心肌样细胞.
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胞二磷胆碱神经元保护研究进展
胞二磷胆碱(Citicoline)是一种中枢神经系统兴奋剂,其化学名为胞嘧啶核苷-5-二磷酸胆碱(Cytidine-5-diphosphocholine),基本结构分为胞苷和胆碱两部分.除兴奋作用外,近年发现其有神经元保护功能,并逐渐受到临床工作者的认同,本文就胞二磷胆碱神经元保护的作用机制、胞二磷胆碱脂质体及临床应用文献复习如下.
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UPLC-MS-MS法同时测定蒲地蓝消炎口服液中3种核苷
目的 建立UPLC-MS-MS法同时测定蒲地蓝消炎口服液中3种核苷的含有量.方法 该药物20％甲醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm);流动相甲醇-0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量0.2 mL/min;电喷雾(ESI)离子源,正离子扫描,多反应离子监测(MRM)模式.结果 腺苷和胞苷在15～150 ng/mL范围内、鸟苷在20～200 ng/mL范围内线性关系良好(r=0.999 3、0.999 9、0.999 9),平均加样回收率分别为96.98％、102.61％、100.29％,RSD分别为2.77％、3.00％、3.22％.结论 该方法简便灵敏,准确可靠,可为进一步完善蒲地蓝消炎口服液的质量控制提供依据.
关键词： 蒲地蓝消炎口服液 腺苷 胞苷 鸟苷 UPLC-MS-MS -
RP-HPLC法同时测定猴头菌片中5种核苷
目的 建立RP-HPLC法同时测定猴头菌片(猴头菌菌丝体)中5种核苷的含有量.方法 该药物水提物的分析采用ZorbaxSB-Aq C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);以甲醇-0.1％磷酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温26℃;检测波长260 nm.结果 胞苷、腺嘌呤、尿苷、腺苷、鸟苷分别在0.007～0.169、0.005～0.115、0.032 ～0.797、0.032～0.792、0.004～0.103 μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=6)分别为99.4％(RSD=2.0％)、98.3％ (RSD=1.8％)、98.0％ (RSD=2.8％)、101.4％ (RSD=1.9％)、101.7％(RSD=1.2％).结论 不同厂家猴头菌片中5种核苷的含有量存在明显差异,应加以关注.
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一测多评法同时测定板蓝根中4种核苷及(R,S)-告依春
目的 建立同时测定板蓝根中4种核苷(腺苷、胞苷、尿苷、鸟苷)及(R,S)-告依春的HPLC-DAD定量检测方法.方法 板蓝根水提取,采用Agilent 1260、Agilent 1100、Waters 2695-2996高效液相色谱仪,流动相为水-甲醇,梯度洗脱.以腺苷、胞苷和尿苷为参照成分计算色谱峰之间的相对校正因子,再与外标法比较.结果 33批板蓝根药材中5种成分相对校正因子在3种仪器检测的耐用性良好.计算值与实测值(外标法)相对误差＜5％.结论 本研究建立了准确、快速且耐用性良好的板蓝根中5种活性成分同时测定的“一测多评”方法,但本方法得到的相对校正因子受检测波长变化影响较大,5种活性成分同时测定的波长宜为254 nm.
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衰老的表观遗传修饰研究
衰老是内、外因素共同作用的结果,是一种多基因的复合调控过程,衰老相关基因的表达调节衰老的进程.表观遗传修饰包括DNA甲基化和组蛋白乙酰化等,是基因表达调控的重要方式之一.衰老过程中表观遗传修饰改变复杂,通常基因组脱氧甲基胞苷(dmC)的含量普遍减少,而在某些启动子含GC丰富序列的局部区域(称为CpG岛)dmC的含量增加[1].
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LC-MS法同时测定至灵菌丝胶囊中5种成分的含量
目的：建立同时测定至灵菌丝胶囊中腺苷、胞苷、鸟苷、甘露醇、腺嘌呤含量的方法。方法：采用液相色谱串联质谱（LC-MS）法。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱，流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液，采用电喷雾电离源，多反应离子监测（MRM），用于定量分析的5种成分检测离子对m/z分别为268.1/136、244.2/112.1、284.1/152.1、183.1/69、136.1/119.1。外标法定量分析。结果：5种成分的质量浓度分别在37.5～1200、20～640、40～1280、77.5～2480、27.5～880 ng·mL-1范围内与各自的峰面积呈良好的线性关系（r=0.9985、0.9964、0.9991、0.993、0.9924）。加样回收率在95.7%～101.4%范围内，RSD均低于7.3%。结论：该法专属性强、快速灵敏，可用于至灵菌丝胶囊中5种成分的含量测定。
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利用抗CTP合成酶反馈抑制筛选胞苷高产突变株
目的:通过解除对CTP合成酶的反馈抑制,得到胞苷高产突变株.方法:以胞苷脱氨酶缺失的枯草芽孢杆菌为出发菌株进行亚硝基胍(NTG)诱变,用6-氮杂尿嘧啶(6-AU)、5-氟胞苷(5-FCR)和3-脱杂氮尿嘧啶(3-DU)3种嘧啶结构类似物进行抗性筛选.结果:筛选得到突变株K-215,研究表明其抗6-AU、5-FCR和3-DU的浓度分别是0.9 mg/mL,3.5 mg/mL和4.5 mg/mL;突变株CTP合成酶的活性为出发菌株的6.2倍,37℃培养80 h积累胞苷可达6.2 mg/mL.结论:突变株K-215能够累积胞苷且CTP合成酶的反馈抑制得到部分解除.
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抑制骨髓增生异常综合征细胞增殖的实验研究现状
骨髓增生异常综合征（myelodyspastic syndrom，MDS）是一组异质性、克隆性造血干细胞疾病，其主要特征是骨髓中原始细胞增多伴一系或多系发育异常（病态造血）并具有高风险向急性白血病转化的风险。目前仍认为是不可治愈的。由于MDS 的异质性，其诊断尚无“金标准”，治疗也无明确的方案，虽然从2004年FDA 制定胞苷类似物阿杂胞苷为MDS 治疗指定药物，以及近几年地西他滨的临床应用提高了MDS 治疗疗效，但明显的骨髓抑制限制了临床的应用。为此研究者们不断地研究MDS 的发病机制及从不同角度研究达到抑制MDS 细胞增殖的通路。本文主要针对近年来实验室在抑制MDS 细胞增殖方面作一综述。
