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免疫组化和连续切片在检测头颈鳞癌颈淋巴结微转移中的意义
目的:探讨分析应用免疫组化和连续切片对检测头颈鳞癌颈淋巴结微转移的意义.方法 对手术淋巴结标本采用EnvisionTM法来检测角蛋白CKAE/AE3,并将检测结果和常规冰冻病理作比较,对比两者对淋巴结微转移的检测率.同时对头颈鳞癌颈淋巴结标本采用连续切片方法,和常规的病理切片比较淋巴结微转移的检测率.结果 快速EnvisionTM法及连续切片EnvisionTM法可以检测出常规病理或常规冰冻病理不能检测出来的淋巴结微转移.结论 EnvisionTM法检测角蛋白CKAE/AE3,能够迅速判断头颈部鳞状细胞癌淋巴结微转移情况,了解患者的具体情况并为后续治疗提供更多参考.
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组织连续切片三维成像
本文介绍了目前在结构生物学领域广泛使用的组织连续切片三维成像技术.总结概括了该技术的优劣.为本技术在生物医学工程领域的应用提供技术参考.
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构建中国女虚拟人一号的初步探索
连续解剖切片图像的三维重建和显示,是一种重要的形态学研究方法.三维重建过程中,首先要对连续切片图像进行配准,为三维显示奠定基础.基于真实人体解剖的数字化虚拟人体研究结合医学科学与计算机技术构建一个像真人一样的计算机模型,在数字解剖、手术计划与培训和很多非医学方面有广泛的应用价值.本文以中国第一例女虚拟人的三维重建为例,介绍了连续解剖切片图像三维重建过程.
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大鼠小肠壁连续切片的三维重建
目的 在肠壁、微绒毛及肠腺3个观察水平对大鼠小肠进行三维重建,观察其内部各结构的三维形态学特征及空间位置关系.方法 正常SD大鼠1只,取小肠制作石蜡包埋标本,经连续切片、HE染色后,进行数字化图像采集;经图像拼接、预处理、配准、分割及三维重建等步骤后,观察各结构空间相互位置关系,并进行形态学指标测量.结果三维重建图像能够直观、立体地显示肠壁及肠壁内各结构(如动脉、静脉、淋巴管、微绒毛、肠腺等)的三维形态及相互空间位置关系.根据重建结果测量得到多项形态学指标,如微绒毛密度、平均高度,肠腺密度、体积.结论小肠黏膜下层与微绒毛内部存在丰富的血管网及淋巴管网,其排列方式与小肠的吸收及免疫功能密切相关.
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成年小鼠海马结构的三维重建
目的 利用三维重建工具软件对小鼠大脑、海马结构进行三维重建,并对重建的图像进行观察和测量. 方法 获取小鼠大脑连续冷冻Nissl染色切片,进行图像预处理后,构建三维重建数据集.利用PhotoshopCS3软件对小鼠大脑冠状切片海马结构的不同区域填充不同的颜色.然后,利用3D-DOCTOR 4.0软件分别对上述连续切片图像进行配准、分割和三维重建,并对重建的脑及海马结构进行观察.结果 利用小鼠脑连续冷冻Nissl染色切片图像可以对小鼠海马结构进行三维重建,并能立体观察海马下托、CA1、CA2、CA3、CA4区和齿状回等结构. 结论利用小鼠脑的连续冷冻Nissl染色切片可以对小鼠脑及海马结构进行三维重建.
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大鼠肾标本连续切片的三维重建及形态学测量
目的 综合运用目前较成熟的技术,建立一个易施行的、可对大组织标本连续切片整体图像进行三维重建及形态学测量的方法. 方法 对正常大鼠肾的石蜡包埋标本进行全序列连续切片,HE染色后对切片图像进行数字化采集,经过拼接、配准步骤,建立切片整体图像的数字化数据集,对其内部的血管系统及肾盂进行分割及三维重建,并对重建结果进行形态学测量.结果 切片的整体图像清晰,数字化图像数据集配准准确,三维重建结果再现了各种结构的立体特征及其在原组织块内的位置,在三维空间内,可进行无阻挡的自由观察,并且测量出了脉管系统的多项三维形态学指标,包括组织体积构成百分比、动脉长度及分支角度等. 结论采用这种方法取得了较为满意的重建结果,可为其他组织连续切片的三维重建研究提供借鉴.
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采用Photoshop软件对成年SD大鼠脊髓中皮质脊髓束三维重建的研究
目的 利用大鼠脊髓连续切片,结合三维重建工具软件对正常大鼠皮质脊髓柬进行三维重建.方法 制作正常成年SD大鼠脊髓连续横断切片,进行Luxol快蓝(LFB)染色并摄片,获得大鼠脊髓皮质脊髓束连续切片图像.在Photoshop软件环境下完成切片图像的配准、分割、灰度化.利用3D-DOCTOR软件进行阈值分割并对大鼠脊髓、脊髓灰质、双侧皮质脊髓束结构进行三维重建,在普通台式机(PC)上对重建结构进行任意角度的观察、切割和测量.结果 重建出的大鼠脊髓、脊髓灰质、双侧皮质脊髓束具有立体感,大鼠皮质脊髓束于大鼠颈1节段(C1)～骶4节段(S4)走行于大鼠脊髓后索腹侧,紧贴灰质中间带背侧,呈逐渐变细的类圆柱状形态.在PC机中进行切割后可以对切割后剩余结构进行表面积和体积的数据测量.结论 利用大鼠脊髓的连续LFB染色切片,结合计算机三维重建技术,能够进行大鼠皮质脊髓束的三维重建,并提供测量数据.
关键词： 皮质脊髓束 连续切片 3D-DOCTOR软件 三维重建 大鼠 -
斑马鱼3D解剖互动系统的制作
目的 制作斑马鱼三维(3D)解剖互动系统软件.方法 采用光学显微镜和微计算机断层扫描技术(Micro-CT)研究斑马鱼的组织构造,并收集其形态结构图像.使用Photoshop对获得的连续切片(HE染色)的图片进行校正,使用Autodesk 3ds Max 2012 64-bit-English软件进行三维模型建立.结果 获得了斑马鱼骨骼的3D成像和连续切片图像(雄鱼144张,雌鱼179张),实现了斑马鱼重要器官的3D重构,建立了斑马鱼3D解剖互动系统(V 1.0),获得了计算机软件著作权登记证书(证书号:软著登字第0989966号). 结论 斑马鱼3D解剖互动系统软件制作的完成为研究斑马鱼立体形态学奠定了基础.
关键词： 连续切片 图片校正 三维重建 微计算机断层扫描技术 斑马鱼 -
基于肾组织连续切片的三维实体构建
目的 采用肾组织连续切片探索组织三维实体构建的方法和可行性.方法 C57/BL/6J小鼠,腹主动脉灌流同定,垂直于肾长轴取组织块,锇酸后固定,Epon 812包埋,获取2.5 μm半薄连续切片400张,所有切片采用甲苯胺蓝染色.数字显微图像摄取后进行配准,检验配准正确性,之后进行色彩校正并转化为灰度图像,并做导入前预处理.后用MIMICS软件进行肾组织三维构建.结果 间隔采用拍摄的400张光学显微切片图像作为原始数据,通过主观和客观两方面验证配准结果符合三维重构要求,使用MIMICS软件获得肾组织三维实体,三维实体的体积为51 205 497.02μm3,表面积为18 650 385.47μm2.生成的三维实体文件可以用于有限元分析.其组织微细结构经形态学分析正确.结论 利用本方法生成的三维实体不仅可以用于可视化、形态学参数的测量等,还可以构建有限元分析的几何模型.
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平推式切片机的捞片技术改进
使用平推式切片机常遇到如何将8～10张小组织蜡片(尤其是胃镜取材的小标本)捞到一张载玻片上,形成类似轮转式切片机的连续切片问题.我们采用蜡片"搭乘法"解决了平推式切片机的这一缺点,使诊断医师可以看到不间断的连续切片.
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适用于三维重建的乳头病理连续切片制作
乳头作为人体乳房腺体与外界连接的通道,其解剖结构和功能正常是保证乳汁顺利排出的基本条件.目前国内外对乳头的研究,主要集中在基于乳头乳晕复合体表面细胞成分的肿瘤筛查、保乳手术时乳头乳晕复合体周围神经分析、经乳头内乳导管灌注铸型、乳头勃起机制和乳头内陷的治疗等,绝大多数是根据乳头周围血管神经解剖或细胞生物学进行研究,而对乳头内部的微观解剖分析较少[1-4].
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组织芯片
组织芯片(tissue chip)是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片.它分为多组织片[1](multi-tissue section),组织阵列(tissue array,MTA,多可含60个直径2 mm的组织)和组织微阵列[2](microtissue array, 多可含1 000个直径0.6 mm的组织)(图1,2).组织芯片的特点是:体积小,信息含量大,一次性实验即可获大量结果(high-throughput).组织芯片可用于组织中的DNA、RNA和蛋白质的定位分析和检测.像普通组织切片一样,可做HE染色、特殊染色、免疫组织化学染色、DNA和RNA原位杂交、荧光原位杂交.组织芯片蜡块可做100～200张连续切片.这样用同一套组织芯片即可迅速的对上百种生物分子标记(如抗原,DNA和RNA)进行分析、检测.因此组织芯片技术是建立疾病,特别是肿瘤的生物分子文库的强有力的工具[3].
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求得基层临床病理科发展的一些思考
1.努力学习、转变观念、适应社会:病理医生需要同临床医生和患者交往,人文知识也十分重要,我们必须学习交际、管理、表达、理财等多方面的知识,提高这些方面的能力.此外,病理科工作人员的仪态、举止和科室环境都要有良好的形象.病理科要在努力做好学问、提高诊断水平的同时,提高经营意识.科主任应努力设法提高科室的社会效益和经济效益,创造使大家积极读书、做事的工作环境.诊断报告上应将所做的特殊染色、免疫组织化学、连续切片等项工作充分反映出来.并有制作切片的技师签名,这样可增强工作人员的责任心,调动工作积极性.
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CD34在肝细胞癌血窦中的表达以及微血管密度与预后的关系
一、材料和方法1.标本来源:HCC 31例,男29例,女2例;HCC 伴慢性胆囊炎14例,男9例,女5例;肝细胞癌伴结节性肝硬化24例,男22例,女2例;HCC伴结节性肝硬化、慢性胆囊炎23例,男21例,女2例.标本分别取自第三军医大学附属西南医院,华西医科大学附属一院.局灶性结节状增生30例,男26例,女4例;再生性结节状增生27例,男19例,女8例,肝细胞不典型增生36例,男30例,女6例.标本取自第四军医大学西京医院和唐都医院,标本均经常规石蜡包埋,4 μm连续切片.
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乳腺近红外线检查诊断隐性乳腺癌1例报告
患者女，48岁，发现右侧腋窝肿物1个月，余无不适，要求检查。查体：右侧腋窝淋巴结肿大，3颗淋巴结聚合成团，活动度稍差。无触痛。双侧乳腺发育正常(见图1)，皮肤无异常改变，未触及肿块，无乳头溢液。乳腺近红外线检查(CDI)：右侧乳腺外上象限显示一支血管扩张充血，血管灰度较深3级，压迫时不易退色，血管中断处可见点状黑色阴影(见图2)，两侧乳腺浅静脉相比不对称，腋窝淋巴结呈灰色阴影，灰度Ⅱ级，周边未见特异性血管变化。印象：乳腺癌伴淋巴结转移?于2000年5月18日入肿瘤科手术治疗。在手术途中第一次冰冻切片病理结果：侧腋窝淋巴结转移性腺癌，右侧乳腺增生病。第二次再取乳腺组织病理连续切片结果：右侧乳腺浸润性导管癌。接着行乳癌根治术，住院22天治愈出院。
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Dukes B期大肠癌淋巴结微转移与临床病理关系
目的:探讨80例Dukes B期大肠癌淋巴结微转移状态及其与临床病理因素与预后的关系.方法:对80例Dukes B期大肠癌淋巴结行间断连续切片结合细胞角蛋白20抗体免疫组织化学染色方法检测淋巴结微转移,并对全部患者进行随访.结果:大肠癌淋巴结微转移与性别、年龄、肿瘤部位、大体分型、以及肿瘤大径长无关,而与肿瘤的分化程度和肿瘤侵犯肠周径有关;微转移阳性组5 a生存率为36.7%,微转移阴性组5 a生存率为72.2%,经Log-Rank检验差异有统计学意义(P＜0.01),微转移阳性组与阴性组复发率分别为75%和28.8%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:间断切片法结合CK20免疫组织化学方法有助于检出Dukes B期大肠癌淋巴结微转移,增加每个淋巴结的切片数量有助于提高微转移的检出率;低分化及癌肿侵犯肠周径＞3/4者易发生淋巴结微转移;淋巴结微转移阳性组与阴性组的生存率与复发率有显著差异.
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胃腺癌组织学异质性与淋巴结转移程度相关
目的:研究胃腺癌组织学异质性与淋巴结转移程度的关系,探讨胃腺癌组织学异质性的临床意义.方法:收集138例胃腺癌手术切除标本,对全部肿块进行间断连续切片后,在光镜下检查,以出现两种和两种以上的组织学亚型为有组织学异质性.对切除的淋巴结进行全数检查,并按照UICC/AJCC的标准进行N分期,比较不同的N分期中胃腺癌组织学异质性的分布.结果:138例胃腺癌中组织学异质性的出现率仅为58.7%.组织学异质性以同时存在两种组织学亚型者居多(69/81,85%),其中半数以上是管状型腺癌+低分化型腺癌(42/69,60%).138例胃腺癌检查出淋巴结8 568个,平均每例62.1个.N0:33例,N1:36例,N2:29例,N3:40例.N0组中有组织学异质性的胃腺癌仅占36%,N3组中占80%.有无组织异质性在不同的N分期中分布不同,差异有显著性(X2值=14.86,P＜0.001).若按照占优势的组织学结构进行分型,138例胃腺癌与有无淋巴结转移以及淋巴结转移的程度之间并无以上关系(X2值=5.24,P＞0.05).结论:胃腺癌的组织学异质性常见,出现率为58%.胃腺癌组织学异质性与淋巴结转移有明显的关系.
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胃腺癌组织学异质性与淋巴结转移程度相关
目的:研究胃腺癌组织学异质性与淋巴结转移程度的关系,探讨胃腺癌组织学异质性的临床意义.方法:收集138例胃腺癌手术切除标本,对全部肿块进行间断连续切片后,在光镜下检查,以出现两种和两种以上的组织学亚型为有组织学异质性.对切除的淋巴结进行全数检查,并按照UICC/AJCC的标准进行N分期,比较不同的N分期中胃腺癌组织学异质性的分布.结果:138例胃腺癌中组织学异质性的出现率仅为58.7%.组织学异质性以同时存在两种组织学亚型者居多(69/81,85%),其中半数以上是管状型腺癌+低分化型腺癌(42/69,60%).138例胃腺癌检查出淋巴结8 568个,平均每例62.1个.N0:33例,N1:36例,N2:29例,N3:40例.N0组中有组织学异质性的胃腺癌仅占36%,N3组中占80%.有无组织异质性在不同的N分期中分布不同,差异有显著性(X2值=14.86,P＜0.001).若按照占优势的组织学结构进行分型,138例胃腺癌与有无淋巴结转移以及淋巴结转移的程度之间并无以上关系(X2值=5.24,P＞0.05).结论:胃腺癌的组织学异质性常见,出现率为58%.胃腺癌组织学异质性与淋巴结转移有明显的关系.
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心复力颗粒对HF大鼠心肌细胞PPAR-α及ET-1的影响
目的：探讨心复力颗粒对阿霉素（ADR）致心力衰竭（HF）大鼠PPAR-α及ET-1的影响及治疗HF的相关作用机制。
方法：60只雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组，心复力颗粒低、中、高剂量组。参照Nithipongvanitch R等方法制备扩张型心肌病（DCM）引起的HF大鼠模型，将注射用ADR用生理盐水配成2 mg/ml溶液，48只造模大鼠均腹腔注射ADR 2.5 mg/kg，正常组12只大鼠腹腔注射等量的生理盐水，每周1次，共6次。从注射ADR第5周开始各组大鼠灌胃给药，将心复力颗粒用生理盐水配成0.5 g/ml的混悬液，低、中、高剂量组的灌胃剂量分别为0.675 g/（ kg·d）、1.350 g/（ kg·d）、2.700 g/（ kg·d），正常组和模型组给予与中剂量组等量生理盐水，每天上午灌胃1次，连续给药4周。将待测左室前壁标本用10％中性缓冲甲醛液固定18 h后脱水、浸蜡、石蜡包埋。连续切片4μm厚，经苏木精-伊红（HE）染色，光镜下（10×20）进行病理学观察，采用常规分级标准定量损伤程度。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血浆中内皮素-1（ET-1）含量；半定量RT-PCR法检测过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR-α）mRNA的表达。 -
免疫组化标记切片褪色再行HE染色的方法介绍
在临床病理工作中,一些经过免疫组化标记的病理切片需要褪色后重新进行苏木素(HE)染色,以满足诊断、教学和学术交流的需要.我们经过长期摸索,建立了一种将免疫组化标记切片褪色后重新进行HE染色的病理技术方法,效果良好,现介绍如下.1 材料与方法1.1 材料收集近2年在我院病理科行病理学检查的子宫平滑肌瘤和结肠癌病例各10例,每例挑选1个组织蜡块,连续切片3张,厚度4 μm,分别行HE染色(HE组)、免疫组化标记(IHC组)和免疫组化标记褪色复染(IHC褪色复染组).其中HE组以普通载玻片捞片,IHC组和IHC褪色复染组以涂胶片捞片.
