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大鼠中枢神经系统连续切片显示神经核团
大鼠中枢神经系统(CNS)连续切片是神经生物学教学重要的实习标本,它能显示大鼠神经传导通路、位置、走向及其上下左右邻里关系,尤其通过CNS连续切片的观察和思维联想,有助于学员建立完整的直观的CNS 的立位体形象.目前此类工作国内外研究较少,开展的工作也不多,有一些介绍连续切片制作方法,但多数局限于火棉胶切片,其过程相当繁琐,难以大量制作,且连续切片有一定困难.为此我室申请了一项校管理题,专门对制作方法进行研究,现就目前完成的工作介绍一下.材料和方法:1.健康成年Wistar大鼠,1%戌巴比妥钠腹腔注射麻醉,心脏穿刺10%Formalin灌注固定.取嗅脑至脊髓尾段,10%Formalin浸泡固定3d以上.2.按30%蔗糖比例加入蔗糖,浸泡3d,Leica恒冷箱切片机切片, 厚30μm.3.切片入蒸馏水,30min两次,入0.2%硫堇水溶液染5～10mi n,蒸馏水分化,室温自然干燥,二甲苯透明,Dpx封固.结果:大鼠CNS各段面切片神经元尼氏体呈紫蓝色,神经胶质细胞和其它细胞胞核呈淡蓝色.讨论:制片方法方面我们同时进行了石蜡包埋切片,切30μm厚片,效果不甚理想,进行火棉胶包埋切片,由于连续切片方面的问题也做得不好,唯有冰冻切片进行得很顺利,而且染色不掉片.染色方面我们选择硫堇染色,尼氏体呈鲜蓝色,背景对比好.要注意载玻片用蛋白甘油处理,稍稍多涂一些;冰冻切片放室温自然晾干,染色时间不宜过长.
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大鼠中枢神经系统连续切片制作的实验研究
大鼠中枢神经系统 (central nervous system,CNS)显示神经核团和/或神经纤维束的全程连续切片标本是神经生物学教学的重要的实习标本,也是神经生物学研究工作中的重要参考;但这类标本比较缺乏,尤其是同时显示神经核团和神经束的标本更不易制作, 而且这方面的实验研究也较少.现有的一些连续切片制作方法,大多局限于火棉胶包埋切片 ,其过程相当繁琐,制作周期长,已有的染色方法多为显示单一结构的方法.为了教学和科研工作的需要,我们进行了CNS全程连续切片和染色方面的实验研究.材料和方法:健康成年Wistar大鼠,重250-300g,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉.取出嗅脑到脊髓腰膨大的完整的CNS.10%中性福尔马林浸泡固定2周以上,按30%蔗糖比例加入蔗糖 ,4℃,3d.将完整的CNS按顺序修成厚2cm的块待切.低温冰箱(-70℃)速冻 ,恒冷箱切片机切片,厚30μm,间张贴片,共制成两套CNS连续切片.室温干燥1周左右.染色:(1)冰冻切片从无水酒精下行至蒸馏水,各20min.(2)入2.5%铁铵矾水溶液中媒染4-6h,蒸馏水速洗.(3)入苏木精液(10%酒精苏木精5ml+蒸馏水 100ml)染色2-6h,蒸馏水速选.(4)入2.5%铁铵矾水溶液中分色,镜检至神经纤维束呈兰色,神经核团呈兰黑色.(5)自来水冲洗,晾干,无水酒精脱水,10%石碳酸二甲苯透明,DPX封片,结果:CNS神经纤维及神经纤维束呈鲜兰色,神经元呈兰黑色, 其它细胞胞核呈黑色.讨论:本实验是将CNS速冻后制作连续冰冻切片,同时显示神经纤维束和神经核团,方法简便,结果稳定,重复性好.要注意的问题是冰冻切片需经酒精脱脂 ,媒染铁铵钒水溶液应新鲜配制,CNS各段媒染及染色时间略有不同,应作适当调整.
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生物组织连续切片图像的配准与三维显示
连续组织切片图像的的三维重建和显示,是一种重要的形态学研究方法.三维重建过程中,首先要对连续切片图像进行配准.本文首先介绍了作者提出的用于自动图像配准的分割-计数法.该方法通过对图像做简单的阈值分割,将优化的准则函数定义为图像的联合直方图特定区域上的计数值,大大加快了配准速度.然后将该方法用于小鼠胚胎的连续切片图像配准,得到空间上配准的三维数据场,为三维显示奠定了基础.后给出了一个初步的表面绘制结果.
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乳腺癌哨兵淋巴结微转移的检测及临床意义
目的探讨乳腺癌患者哨兵淋巴结(sentinel lymph node,SLN)中微转移的检测方法及临床意义.方法对50例乳腺癌患者用美蓝染色法,寻找到腋窝SLN,予以切除并行常规HE染色病检,其阴性SLN以250 μm间距行连续切片(serial section,SS)及以细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)为单抗行免疫组化(immunohistochemical,IHC)检测,比较三种方法检测SLN的结果.结果 50例中发现SLN 45例,常规病检16例SLN阳性,29例SLN阴性者经采用SS和IHC法检测,分别检出SLN中有微转移灶7例和6例,阳性检出率分别提高15.55%和13.33%.结论 SS和IHC法可检出常规HE染色阴性SLN中的微转移灶,提高SLN的阳性检出率,降低假阴性率.
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增殖细胞核抗原、p53、p21ras及EGFR蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义
本文应用免疫组化技术检测102例手术切除人脑胶质瘤组织标本中增殖细胞核抗原(PCNA)P53、p21ras及EGFR蛋白的表达,现报告如下.1 材料与方法1.1 组织标本:收集本院1990～1997年手术切除脑胶质瘤标本102例,经10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,连续切片,HB染色并经病理诊断证实胶质瘤无疑(按WHO脑瘤分类).另取14例正常脑组织为对照.
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外阴发疹性毳毛囊肿1例
1 临床资料患儿女,9岁,外阴丘疹1年余.1年前发现左侧外阴部出现数个粟粒大小黑色丘疹,无痛痒感觉,逐渐增多,但增大不明显,曾在外院给予青霉素及迪维霜治疗无效.无家族史.系统检查无特殊发现.皮肤科情况:左侧大阴唇与腹股沟之间皮肤上散在分布数个棕色类圆形丘疹,孤立不融合,直径1～3 mm,表面光滑,触之质硬,无触痛,部分丘疹顶端有黑色细薄结痂,基底部皮肤轻度肥厚及苔藓化,色素加深.组织病理:表皮无明显改变,真皮中部可见一囊腔,囊壁由数层成熟鳞状上皮细胞组成,囊腔内含有毳毛横断面及角质成分,连续切片未见皮脂腺.诊断:发疹性毳毛囊肿.
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腋淋巴结阴性乳腺癌的预后因素分析
目前公认腋窝淋巴结状态是乳腺癌患者重要的独立预后因子,腋窝淋巴结阴性乳腺癌患者的无瘤生存及总生存期较淋巴结阳性乳腺癌患者有明显延长.但对腋窝淋巴结定性的标准仍有争议.其一是淋巴结的病理检查方法不标准.如:一些病理学家仅从淋巴结切下单张切片在显微镜下细阅,淋巴结的大部分组织未被检查,就可能遗漏出现假阴性结果.对腋窝淋巴结作连续切片或采用免疫组织化学方法可明显提高微转移的检出率,但工作量太大.尽管前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)活检基本能反映腋窝淋巴结的状态,理论上,如乳腺癌腋窝SLN无转移,其他腋窝淋巴结转移的可能性应不存在.但由于病理检查方法、跳跃性转移、原发瘤大小、位置及患者身体情况等因素的影响等,SLN也会出现假阴性的情况.其二是关于淋巴结微小转移的问题.大约10％ ～ 20％的患者常规腋窝淋巴结为阴性,而用连续切片、免疫组化染色或连续切片加免疫组化染色检查出淋巴结内有肿瘤细胞.所以如何准确评估腋窝淋巴结的状态仍需进一步研究.
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凋亡细胞核的三维重建
本文对显微组织连续切片的三维重建中的难点问题-定位问题摸索总结出一套方法，通过对辐射小鼠胸腺淋巴细胞中凋亡细胞的连续切片，采用灰度表面模型法，对出现典型染色质凝集的凋亡细胞核进行三维重建。从而在超微结构水平对细胞及细胞器连续切片的三维重建研究作了初步探索。
