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多种金属离子与单宁酸反应媒染微血管的对比研究
目的镜下观察单宁酸与金属盐溶液中Ca2+、Au+、Ag+、Pb2+、Cu2+、Al3+、U6+、K+联用显示大脑微血管的效果.方法用单宁酸媒染固定液灌流大鼠,取脑切片,入氯化钙、氯化金、硝酸银、硝酸铅、硫酸铜、硫酸铝钾、醋酸双氧铀、高锰酸钾和重铬酸钾等溶液中呈色.结果单宁酸与Ca2+、Cu2+、Ag+、Al3+结合显示血管清晰,与Au+、U6+、Pb2+、K+联用媒染血管效果欠佳.结论含Ca2+、Cu2+、Ag+、Al3+的金属盐类可替代氯化铁媒染微血管,氯化金、醋酸双氧铀、硝酸铅、重铬酸钾和高锰酸钾不宜与单宁酸联用来显示血管.
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浅谈细菌革兰染色的影响因素
革兰染色法是微生物实验教学中常用、基本的染色法之一,是细菌形态学中重要、广泛的鉴别染色法.它将细菌分为两大类:革兰阳性菌及革兰阴性菌,其染色机制至今不完全清楚.因此在整个染色过程中由于受到各种因素影响,其结果常不尽人意,为保证染色结果的正确性,采用规范操作方法十分必要,本试验旨在探讨影响其整个操作过程的可能因素.
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应用单宁酸的负染色效果显示大鼠生殖器官微血管
近百年来,许多学者为研究器官内血管立体构筑倾注了大量心血,创造了多种显示微血管构筑的方法,诸如墨汁灌注法[1],橡胶[2]、维尼龙[3]血管、淋巴管立体铸型法,微血管铸型扫描电镜法[4],碱性磷酸酶法(钙铅法)[5]以及单宁酸-氯化铁媒染法(TA-Fe法)[6,7],为科学研究及临床应用做出了贡献.继TA-Fe法媒染微血管后,我们又发现单宁酸过度媒染某些组织结构,有类似电镜标本负染色技术效果,清晰地显示了大鼠子宫、卵巢、输卵管等器官的血管构筑特点.
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改进前后TA-Fe法媒染肾微血管和肾小管效果的对比
应用TA-Fe法媒染肾微血管[1,2],为肾微血管构筑和临床有关疾病的诊断和研究提供了一种简便易行的新方法,但是因其需湿片摄影,时间要求严格.而自然干燥后切片易收缩卷曲、脱落,无法保存原始材料进行回顾性研究.为此,我们对TA-Fe法进行了改进,结果令人满意.它既清晰地媒染微血管,又良好显示了肾微血管与肾小管的关系,切片可长时间保存.
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一种媒染血管的新方法——单宁酸-氯化铁法
单宁酸-氯化铁联用媒染组织中的糖蛋白早在1896年已有文献报道,此后许多学者在探讨单宁酸媒染机制及拓宽其使用范围方面做了大量工作[1~5]。实验已证明,单宁酸与生物体内糖蛋白、胶原、硫酸粘蛋白(乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素)[6]、碳水化合物以及神经组织中的大、小致密核心小泡内的肽类、单胺类递质[3,4]等均有较高的亲和性。
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单宁酸-氯化铁法对SHR脑微血管密度的观察
目前对高血压病血管病变的研究主要集中在"重构"、功能改变及其机理的研究上,也有少数研究发现高血压时血管的数量也会发生改变,即微血管减(稀)少[1].但是否高血压时各器官普遍存在微血管变少,以及它与高血压病发生的先后(因果)关系,仍研究不够.而且研究方法主要局限在传统的墨汁灌注法.本实验采用单宁酸-氯化铁组织化学方法媒染血管[2]和图像分析技术对不同龄高血压大鼠和正常血压对照组大鼠脑微血管的密度进行定量分析,以进一步明确高血压状态时脑内微血管密度的变化,以及它与高血压发生发展的因果关系.
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改良单宁酸-氯化铁法媒染子宫血管的实验研究
目的:光镜下观察大鼠子宫各部位血管构筑.方法:应用单宁酸氯化铁法(TA Fe法)灌流固定大鼠,取子宫不同位置做冰冻切片,氯化铁显色,常规脱水、透明、封片,显微摄影.结果:子宫壁出现类似电镜负染色效果,组织结构灰黑色,血管双线条状,分支明显,过管壁切面可见内皮细胞或平滑肌;子宫动脉进入肌层分支并形成一、二级血管网和多支环状动脉,环行动脉或二级血管网发出的微动脉和毛细血管进入粘膜,形成密集的三级毛细血管网.结论:经灌流的子宫标本较长时间保存在媒染固定液内,导致血管外结构也被媒染;子宫壁有三级血管网;每个子宫有多支环状动脉;各段子宫血管构筑不尽相同.
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大鼠中枢神经系统连续切片制作的实验研究
大鼠中枢神经系统 (central nervous system,CNS)显示神经核团和/或神经纤维束的全程连续切片标本是神经生物学教学的重要的实习标本,也是神经生物学研究工作中的重要参考;但这类标本比较缺乏,尤其是同时显示神经核团和神经束的标本更不易制作, 而且这方面的实验研究也较少.现有的一些连续切片制作方法,大多局限于火棉胶包埋切片 ,其过程相当繁琐,制作周期长,已有的染色方法多为显示单一结构的方法.为了教学和科研工作的需要,我们进行了CNS全程连续切片和染色方面的实验研究.材料和方法:健康成年Wistar大鼠,重250-300g,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉.取出嗅脑到脊髓腰膨大的完整的CNS.10%中性福尔马林浸泡固定2周以上,按30%蔗糖比例加入蔗糖 ,4℃,3d.将完整的CNS按顺序修成厚2cm的块待切.低温冰箱(-70℃)速冻 ,恒冷箱切片机切片,厚30μm,间张贴片,共制成两套CNS连续切片.室温干燥1周左右.染色:(1)冰冻切片从无水酒精下行至蒸馏水,各20min.(2)入2.5%铁铵矾水溶液中媒染4-6h,蒸馏水速洗.(3)入苏木精液(10%酒精苏木精5ml+蒸馏水 100ml)染色2-6h,蒸馏水速选.(4)入2.5%铁铵矾水溶液中分色,镜检至神经纤维束呈兰色,神经核团呈兰黑色.(5)自来水冲洗,晾干,无水酒精脱水,10%石碳酸二甲苯透明,DPX封片,结果:CNS神经纤维及神经纤维束呈鲜兰色,神经元呈兰黑色, 其它细胞胞核呈黑色.讨论:本实验是将CNS速冻后制作连续冰冻切片,同时显示神经纤维束和神经核团,方法简便,结果稳定,重复性好.要注意的问题是冰冻切片需经酒精脱脂 ,媒染铁铵钒水溶液应新鲜配制,CNS各段媒染及染色时间略有不同,应作适当调整.
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细菌革兰氏染色辅助鉴别技术的实验研究
细菌革兰氏染色法是细菌中常见的一种鉴别染色法,是细菌分类鉴定中的重要标志,它可将细菌分为G+和G-两大类.其基本方法是将结晶紫染色剂对已固定的标本染色,以碘液作媒染,再用酒精脱色,后加复红染液复染,凡细菌被染成紫色,我们称之为G+菌;细菌被染成红色,称之为G-菌.