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血清及脑组织中单胺类神经递质高效液相色谱电化学检测方法研究
目的建立一种快速准确测定大鼠血清及脑组织中单胺类神经递质去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)含量的高效液相色谱-电化学检测方法.方法采用ODS柱,流动相为缓冲液(0.02mol/L柠檬酸三钠和0.05mol/L磷酸氢二钠):甲醇=85:15的溶液,流速1.0ml/min.结果四种神经递质保留时间的RSD在0.29%～0.67%之间、峰面积RSD在0.09%～0.36%之间,重现性好.4种回收率在85.3%～95.4%之间,检测限NE为0.083ng/ml、E为0.51ng/ml、DA为0.046ng/ml、5-HT为0.078ng/ml,线性范围NE在1.0～100 ng/ml之间、E为5.0～80ng/m之间、DA为1.0～80ng/ml之间、5-HT为1.0～60ng/ml之间,相关系数在0.996～0.999之间.结论该方法为单胺类递质的神经毒理学、药理学等研究提供了一个简单灵敏、稳定可靠的方法.
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温灸诱发循经高温线形态学和组织酶化学相关机制研究
目的:研究经络温度现象的结构和功能基础,探讨循经高温线的形成机制,了解经络现象的实质.方法:选用健康成年家兔16只,应用红外热像仪寻找和定位温灸家兔"后三里"穴后诱发出的循胃经高温线,对高温线上和经线外组织进行取材,观察和比较经线内外乙醛酸诱发荧光反应以及乙酰胆碱酯酶、乳酸脱氢酶的含量.结果: 温灸家兔"后三里"穴能诱发出循足阳明胃经的高温线. 循经高温线上分布的乙醛酸诱发出的荧光物质(肾上腺素能神经递质)比经线外少. 循经高温线上乙酰胆碱酯酶活性较强,高温线外酶活性则较弱,两者比较有显著性差异(P<0.01). 循经高温线上乳酸脱氢酶活性比较强,高温线外乳酸脱氢酶活性则较弱,两者比较有显著差异(P<0.01).结论:①温灸后所诱发出循经高温线现象是一种较可靠的经络温度现象.②肾上腺素能神经递质较少、能量代谢旺盛、乙酰胆碱含量增加引起的血管扩张均是循经高温线的形成机制.
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哈蟆油石油醚提取物的抗抑郁作用
目的:探索哈蟆油石油醚部位(ROS)的抗抑郁作用及可能的机制.方法:雄性ICR小鼠,分为2批,每批均设空白对照组(生理盐水)和6个治疗组(分别给予阳性药氟西汀10 mg·kg-1和ROS不同剂量10,30,100,300,900 mg· kg-1),连续灌胃给药8d.第1批动物在第7天给药后1h和第8天给药后1h,分别采用小鼠强迫游泳和小鼠悬尾2种“行为绝望”抑郁动物模型进行行为学观察;行为学观察结束后小鼠眼球取血,用放射免疫法检测小鼠血清皮质酮(CORT)水平.第2批动物在第8天给药后采用利血平拮抗模型,观察ROS对由利血平引起小鼠体温下降和运动不能的影响.结果:ROS 100,300,900 mg· kg-1均能不同程度地缩短小鼠强迫游泳和悬尾不动时间(P＜0.05),能拮抗利血平致小鼠体温下降和运动不能(P＜0.05),降低小鼠血清皮质酮水平(P＜0.05).结论:ROS具有抗抑郁作用,其机制可能与单胺类神经递质以及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴密切相关.
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解郁汤对小鼠强迫游泳的作用及机理研究
应用小鼠强迫游泳实验及高效液相-电化学法检测小鼠纹状体、额叶皮层单胺类递质,初步评价解郁汤的抗抑郁效应和作用机制.结果表明,该方剂在(7.47g/kg)缩短小鼠强迫游泳不动时间,增加纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量.本研究初步提示:解郁汤可能具有抗抑郁效应,中枢多巴胺能系统可能为其作用途径之一.
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电针对吗啡戒断大鼠单胺类递质的调节作用
目的:探讨针刺改善戒断症状的作用机理.方法:通过催促反应实验,建立吗啡戒断大鼠模型,观察电针足三里穴对吗啡戒断大鼠脑组织和外周单胺类递质的调节作用.结果:吗啡可使脑组织和血清NE、DA含量降低,5-HT增加,与正常组相比差异显著.电针组NE、DA增加,5-HT减少,与对照组相比有显著差异.结论:电针通过调节体内单胺类递质的合成与释放,起到改善吗啡戒断症状的作用.
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HPLC-ECD检测猕猴血清中单胺类递质
目的:通过应用HPLC-ECD分离测定猕猴血清中单胺类递质,验证其与经前期综合征(PMS)肝气逆证的内在关系,筛选科学有效的检测方法.方法:采用ZORBA×SB-C18.色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙酸钠100 mmol·L-1,柠檬酸85 mmol·L-1,正二丁胺0.4 mmol·L-1,辛烷基磺酸钠1.5 mmol·L-1,乙二胺四乙酸(EDTA)0.2 mmol·L-1,甲醇18%,抽滤.流速0.9 mL·min-1,量程1μA.结果:猕猴血清中去甲肾上腺素(NE),肾上腺素(E),多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)回收率依次为97.0%,97.8%,99.5%,100.3%,RSD 0.22%～0.93%,重复性较好.结论:该方法操作简便、快速、准确,是检测猕猴血清中单胺类递质检测的一种理想方法.
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安宫牛黄丸及重金属组分对内毒素脑损伤大鼠大脑皮层单胺类递质的影响
目的:探讨安宫牛黄丸脑电激活作用的机制,评估朱砂、雄黄在其"醒脑开窍"作用中所发挥的作用,推测其在适应证"瘟病"治疗中存在的意义,为安宫牛黄丸组方的合理性提供实验依据.方法:70只SD大鼠随机分为7组,即对照组、模型组、含朱砂雄黄的安宫牛黄丸(全方)组、不含朱砂雄黄的安宫牛黄丸(简方)组,朱砂+雄黄组、雄黄组、朱砂组,分别给与蒸馏水、0.4 g·kg-1全方、0.32 g·kg-1简方、0.08 g·kg-1朱砂+雄黄、0.04 g·kg-1雄黄、0.04 g·kg-1朱砂,连续给药3 d,末次给药后1 h,以内毒素(LPS)尾静脉注射复制内毒素脑损伤模型,以单胺类递质及其代谢产物为观察指标,采用高效液相电化学检测法(HPLC-ECD),测定安宫牛黄丸及朱砂、雄黄对LPS致脑损伤皮层中单胺类递质及其代谢产物含量的影响.结果:LPS尾静脉注射6 h后,皮层中去甲肾上腺素(NE)含量明显升高,肾上腺素(E)有降低的趋势,对3-甲基-4-羟-苯乙二醇(MHPG)的影响不明显;皮层中5-羟色胺(5.HT)、代谢产物5-羟吲哚乙酸(5.HIAA)含量明显升高;多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)含量无明显变化,3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)的含量降低.全方有降低NE,提高DOPAC,E含量的趋势,但统计学无明显差异,全方可明显降低5-HIAA含量,和模型组比较差异显著.简方则进一步提高皮层NE含量,和模型组及全方组比较差异显著,简方可显著提高皮层DA含量,和各组比较差异均显著.朱砂+雄黄升高E含量、降低NE含量的作用更明显;单独的雄黄可明显降低5-HT含量.结论:安宫牛黄丸可部分逆转LPS所致皮层单胺类神经递质的改变,朱砂+雄黄及单独雄黄、朱砂和全方的作用相似.对皮层单胺类递质的影响可能是安宫牛黄丸对内毒素脑损伤促清醒作用机制之一,推测朱砂雄黄可能是安宫牛黄丸醒脑开窍作用的重要物质基础.
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青藤碱对SSNI模型大鼠镇痛效应和纹状体细胞外液单胺类递质的影响
目的:观察青藤碱对部分坐骨神经损伤(SSNI)诱导的神经病理性疼痛大鼠模型镇痛效应,并探讨其对纹状体细胞外液中单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法:雄性SD大鼠,随机分为假手术组、SSNI模型组、加巴喷丁组(100mg·kg-1)、青藤碱高、低剂量组(40,20mg·kg-1),采用Von Frey hairs和Cold Spray法评价机械痛敏和冷痛敏的程度.纹状体微透析采样,高效液相色谱-电化学法检测细胞外液中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)等神经递质及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量.结果:SSNI模型大鼠的机械痛阈、冷痛敏显著改变,脑内NE显著降低,DA,5-HT及其代谢产物明显升高.与模型组相比,青藤碱高剂量组在腹腔给药30～120min时机械痛阈显著提高(P＜0.01),在30～240min冷痛敏分值明显降低(P＜0.05)；在45～135 min内明显上调纹状体细胞外液NE含量(P＜0.05),45,75,135 min明显降低DA的含量(P＜0.05),45～135 min显著减少5-HT的含量(P＜0.01),并在45～135m in显著降低DOPAC(P＜0.01),45～75 min明显降低5-HIAA的含量(P＜0.05).结论:青藤碱对SSNI模型大鼠神经源性疼痛有干预作用,其机制可能与调节纹状体细胞外液单胺类神经递质紊乱相关.
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慢性运动性疲劳大鼠海马多种单胺类递质水平变化规律的研究
目的：探讨慢性运动性疲劳状态下，大鼠海马组织各种单胺类递质的变化特点。方法建立慢性运动性中枢疲劳大鼠模型，造模时间为4周；对照组不采取任何干预措施，与模型组相同条件正常喂养，时间四周。所有实验动物取材部位为大鼠双侧海马，检测方法为高效液相色谱电化学检测法，研究指标选取5-羟色胺（5- HT）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）和多巴胺（DA）的含量进行定量分析。结果与对照组相比，模型大鼠在慢性运动性中枢疲劳状态下，其海马组织中5-羟色胺含量明显升高（ P ﹤0.01），同时多巴胺和肾上腺素的含量明显下降，二者均在统计学有显著性差异（ P ﹤0.01，P ﹤0.05）；而同样属于单胺类神经递质的去甲肾上腺素的水平则明显升高（ P ﹤0.01）。结论在中枢性疲劳发生时，大鼠海马内四种重要的单胺类神经递质的水平均发生了改变，与额叶皮质研究发现存在不同，这说明大鼠慢性运动性疲劳状态下中枢神经递质确实发生着明显的改变，同时这种变化在不同脑组织中存在着明显差异。
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急性脑卒中后抑郁血清单胺类递质的变化
目的探讨急性脑卒中后抑郁血清单胺类递质浓度的变化.方法选择85例急性脑卒中患者,经美国流行病学调查中心抑郁量表(CES-D)筛选及17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评定,按精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-Ⅳ)标准确定诊断,入选脑卒中后抑郁患者34例(PSD组),脑卒中后无抑郁患者51例(无抑郁组),正常对照20例(正常对照组).采用荧光分光光度仪测定三组空腹血清单胺类递质的浓度.结果脑卒中后抑郁组血清单胺类递质浓度显著下降.结论脑卒中后抑郁与血清单胺类递质浓度降低有关.
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脑卒中后抑郁症与下丘脑-垂体-肾上腺轴的关系及运动干预的研究进展
脑卒中后抑郁症(post-stroke depression,PSD)是指在脑血管性疾病发生后出现以抑郁为特征或重性抑郁样发作的心境障碍,其发病率多在30％---60％之间,严重影响患者的生存质量和预后[1],应及早进行干预和治疗.而PSD的发病机制主要包括两种理论[2]:①原发性内源性机制:脑卒中病灶引起单胺类神经递质水平或其受体功能下降而出现抑郁症状.②反应性机制:认为PSD是脑损害引起下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamus-pituitary-adrenal,HPA)轴功能紊乱,从而导致的调节障碍.目前PSD的治疗方法主要为针对原发性内源性机制如改善单胺类递质的药物治疗,临床上同样存在不可忽视的药物副作用[3]和难治性抑郁患者[4],而针对PSD反应性机制的研究较少,本文就PSD与HPA轴的关系、运动干预在其中的作用相关研究作一综述.
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复方石菖蒲合剂对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应及血中单胺类递质的影响
目的:探讨复方石菖蒲合剂对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)及血中单胺类递质水平的影响.方法:连续给予吗啡(9 mg/kg,sc)6d,引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应.在训练阶段每天sc吗啡前30 min预先给予复方石菖蒲合剂组三种不同剂量的复方石菖蒲合剂(5,10和15g·kg-1)灌胃,用荧光分光光度法测定血中单胺类递质含量.同时检测对小鼠的奖赏效应或厌恶效应.结果:吗啡模型组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长,小鼠血中单胺类递质显著升高.复方石菖蒲合剂可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏爱的形成,降低血中单胺类递质水平含量.结论:吗啡诱导的小鼠位置偏爱效应与血中单胺类递质水平升高、中枢单胺类神经系统激活有关.复方石菖蒲合剂能消除吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的形成,对血中单胺类递质水平的改变具有调节作用.
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营养干预对高+Gy暴露小鼠脑功能及相关生化指标的影响
目的研究高+Gy暴露对小鼠迷宫行为和脑功能相关生化指标的影响和营养干预的效果.方法昆明种雄性小鼠经迷宫训练后分为对照组(A组)、+Gy组(B组)、+Gy营养干预组(C组);A组不予+Gy暴露;B组、C组均给予+10 Gy暴露8 min,B组暴露前3 h蒸馏水灌胃;C组实验前1 d给予强化VitB6的饮水,暴露前3 h混合氨基酸液灌胃;3组动物均记录迷宫实验成绩,检测血清氨基酸f、脑组织单胺类递质含量和γ-谷氨酰转移酶活性.结果 +Gy暴露后迷宫实验成绩下降,并有行为异常,脑内NE明显降低,其他单胺类递质均显著升高(P<0.05),表明脑功能受影响;营养干预后迷宫行为改善,生化指标改变有所缓解.结论高+Gy暴露会引起中枢递质相关的生化营养物质代谢紊乱并影响脑功能,营养干预对此有一定的防护效果.
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补充营养素对持续高+Gz作用后小鼠迷宫实验和某些生化指标的影响的初步观察
目的探讨膳食补充营养素可能对持续高+Gz暴露后小鼠脑功能的影响,用迷宫实验评价脑功能状况.方法将小鼠分为对照组(A组), +Gz暴露但不补充营养素组(B组)及+Gz暴露并且补充营养素组(C组).每组12只小鼠.A组不作+Gz暴露,B组和C组+10 Gz暴露8 min.B组在+Gz暴露前3 h以0.3 ml蒸馏水灌胃.C组在+Gz暴露前1 d饮用强化Vit B6的水,+Gz暴露前3 h以0.3 ml混合氨基酸液灌胃.记录3组动物的迷宫实验成绩.迷宫实验后立即摘眼球取血,测定氨基酸;断头取脑组织,制成组织匀浆,测定单胺类递质.结果 +Gz暴露后, 与对照组相比B组迷宫实验的完成时间显著延长,错误次数增加,C组迷宫实验成绩有改善的趋势,即完成时间缩短,错误次数减少.与B组相比,C组小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)与多巴胺(DA)的比值显著下降.B组和C组脑内γ谷氨酰基转移酶(GGT)活性显著增加.结论持续高+Gz暴露显著降低小鼠迷宫实验成绩.膳食补充某些氨基酸和Vit B6有改善迷宫成绩的趋势,可能与小鼠脑组织中5-HT与DA的比值显著下降有关.
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脑复康软胶囊对血管性痴呆大鼠学习记忆功能的影响
目的:观察脑复康软胶囊对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能的影响.方法:制备VD模型,采用避暗法及水迷宫法评价脑复康软胶囊对VD模型大鼠学习记忆功能的影响,并用荧光分光光度法测定大鼠海马组织中5-羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素含量.结果:50～200 mg·kg-1脑复康可以明显改善VD大鼠的学习记忆功能.与模型组比较,200 mg·kg-1组可明显增加VD大鼠海马组织内5-HT,DA及NE的含量(91.4%,98.6%,50.0%),差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:脑复康对VD大鼠学习记忆功能有一定的改善作用,其机制可能与提高脑组织中单胺类神经递质有关.
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舒通安胶囊对海洛因依赖者血单胺类递质的影响
目的:了解5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)在海洛因依赖发病中的意义,观察舒通安胶囊对海洛因依赖者单胺类递质的影响.方法:用荧光分光光度法检测56例海洛因依赖者(注射组35例、烫吸组21例)治疗前后和23例正常人血浆及血小板5-HT、5-HIAA、DA和NE含量.结果:海洛因依赖者血浆5-HT、5-HIAA、DA和NE含量均高于对照组(P＜0.01),烫吸组血浆DA、5-HIAA含量低于注射组(P＜0.05,P＜0.01),经舒通安胶囊治疗后血浆5-HT、5-HIAA、DA和NE含量显著降低(P＜0.01),其中烫吸组NE高于注射组(P＜0.05).海洛因依赖者血小板5-HT、5-HIAA、DA和NE含量均高于对照组(P＜0.01),烫吸组血小板5-HT、DA含量低于注射组(P＜0.01),经舒通安胶囊治疗后血小板5-HT、5-HIAA、DA和NE含量显著降低(P＜0.01),其中烫吸组DA、5-HT、NE高于注射组(P＜0.01,P＜0.05).结论:单胺类递质在海洛因依赖的病理过程可能有重要意义,舒通安胶囊可调节海洛因依赖者外周单胺类递质水平.
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褪黑激素对吗啡戒断反应及血清单胺类递质的影响
褪黑激素(Melatonin,MT)是松果体分泌的一种吲哚胺.大脑是MT作用的主要部位.根据MT具有镇痛、镇静、助眠以及增强机体免疫力等多种药理功能,本文设计用昆明种小鼠吗啡依赖模型,纳络酮催促跳跃戒断反应,观察MT对吗啡戒断反应(30 min内跳跃次数及跳跃反应出现的潜伏期)以及血清中两种单胺类递质(去甲肾上腺素及多巴胺)的影响.
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酸枣仁汤组分配方对高架十字迷宫大鼠海马单胺类递质及其代谢物的影响
目的 观察酸枣仁汤组分配方对高架十字迷宫大鼠海马单胺类递质及其代谢物的影响,探讨其抗焦虑效用的有效组分及作用机理.方法 采用国际上通用的高架十字迷宫焦虑动物模型,观察酸枣仁汤组分配方对大鼠行为学的影响,高效液相色谱法测定大鼠海马单胺类递质去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5 -HT)、多巴胺(DA)及其代谢物的含量.结果 与空白对照组比较,全组分配方组和有效组分配方组及地西泮组大鼠进入开放臂次数比、在开放臂停留时间比均显著升高(P＜0.01或P＜0.05)；有效组分配方组和地西泮组大鼠海马5-HT的含量均见显著降低(P＜0.05),全组分配方组海马5-HT含量呈降低作用趋势；有效组分配方组大鼠海马高香草酸(HVA)含量显著升高(P＜0.01).结论 酸枣仁汤全组分配方及其有效组分配方与地西泮具有某些相同的抗焦虑作用机制,可能涉及到降低海马5-HT含量；全组分配方及其有效组分配方对大鼠海马单胺类递质代谢的影响有所不同.
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不同的调理脾胃方药对大鼠脑内单胺类神经递质的影响
目的观察6种常用的调理脾胃方药补中益气汤、大承气汤、归脾汤、温胆汤、瓜蒂散、草果知母汤对脑内单胺类神经递质,包括去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)以及代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、高香草酸(HVA)含量的变化.方法分别给予大鼠6种中药汤剂灌胃,15 d后,采用高效液相-电化学法检测大鼠脑内单胺类递质的含量.结果补中益气汤、归脾汤可增加脑组织NE的含量,大承气汤有降低皮层和海马NE的作用,草果知母汤可降低海马DA的含量,温胆汤则可降低皮层DA的含量,瓜蒂散可升高皮层NE含量.结论不同的调理脾胃方药作用于单胺类递质的部位和趋势有所不同:温补和吐泻的调理脾胃药以作用于NE系统为主,调畅气机的脾胃药以作用于DA系统为主.
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样品固相萃取及高效液相色谱法测定血浆中去甲肾上腺素
去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)是重要的单胺类递质,原发性高血压患者的血浆NE通常增高,故测定其血浆浓度可为高血压的诊治、嗜铬细胞瘤诊断定位提供依据.国内外有不少测定人血浆中去甲肾上腺素含量方法的报道,如气质联用、高效液相色谱-荧光检测器和放射酶标分析等,由于它们存在灵敏度低和选择范围窄、费时、成本高等问题,近年来,又出现了高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)[1～7].该法对不同样品处理的方法各异[1,2,5,7],但大都步骤烦琐或特异性差,不够理想.本实验采用酸洗氧化铝吸附及高氯酸洗脱的方法萃取血浆中的NE,用HPLC-ECD法测定血浆NE的质量浓度.该方法与其他方法相比更加简便,而且灵敏度高、特异性强、数据重现性好、测定结果可靠,是临床诊断和基础研究较为实用的方法.
