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基于微透析技术探讨安神定志灵对SHR大鼠前额叶NE、DA及其代谢产物含量的影响
目的:研究安神定志灵对SHR大鼠多动冲动行为及前额叶皮质单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法:依据随机数字表将SHR大鼠分为模型组,择思达组(0.045mg/kg),安神定志灵低、中、高剂量组(6.7,13.4,26.7g/kg),每组8只,另设WKY大鼠、SD大鼠各8只为正常组,灌胃给药28d.旷场实验观察大鼠运动距离及运动速度,微透析联合HPLC-ECD检测前额叶去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和代谢产物3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量.结果:①给药前,模型组、择思达组及安神定志灵各剂量组运动距离及运动速度较正常组1 (WKY)显著升高(P＜0.05);给药第14、21、28天,择思达组和安神定志灵中剂量组上述指标较模型组显著降低(P＜0.05).②给药前,模型组、择思达组及安神定志灵各剂量组NE、DA、DOPAC、HVA含量较WKY组显著降低(P＜0.05);模型组NE、HVA含量较正常组2(SD)显著降低(P＜0.05);给药第14天,择思达组NE、DA含量较模型组显著升高(P＜0.05);给药第28天,择思达组、安神定志灵中剂量组NE、DA含量较模型组显著升高(P＜0.05),安神定志灵中剂量组DOPAC含量较模型组显著升高(P＜0.05).结论:安神定志灵能调控SHR多动、冲动行为,改善NE、DA缺乏状态.
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微透析法研究针刺后中缝背核单胺类神经递质含量的动态变化
目的:研究针刺“神门”和“命门”穴后大鼠中缝背核(DRN)的5-羟色胺(5-Hr)、去甲肾上腺素素(NE)、多巴胺(DA)及高香草酸(HVA)含量变化,探讨微透析技术在针刺机理研究中的应用.方法:SD雄性大鼠21只随机分为空白对照组、针刺“神门”组、针刺“命门”组,采用立体定位法将微透析探针置入大鼠中缝背核,运用微透析法收集大鼠针刺前40min、针刺后20、40、60、80、100、120 min DRN细胞外液,用高效液相-电化学法(HPLC-ED)检测其5-HT、NE、DA及HVA含量的变化.结果:与对照组比较,针刺大鼠“神门”穴和“命门”后2h各时相点中缝背核5-HT、NE、HVA水平差异具有统计学意义(P＜0.01),但其中针刺“神门”穴NE水平在120min时相点处差异无统计学意义.与针刺前的基础值相比,针刺大鼠“神门”和”命门”穴20min后中缝背核5-HT、NE及HVA的水平显著下降(P＜0.01),在其后的2h维持在低水平.针刺“神门”和“命门”穴作用相比除针刺“神门”后40min时相点处NE含量较低(P＜0.05)外,其余无显著性差异.本研究在DRN未检出DA.结论:针刺“神门”和“命门”穴能降低中缝背核组织中5-HT、NE及HVA含量.
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清醒自由活动大鼠脑酪氨酸羟化酶活性的测定
目的:建立清醒自由活动大鼠脑内酪氨酸羟化酶(TH)活性的测定方法.方法:应用脑微透析技术收集经6-羟基多巴胺(6-OHDA)预处理的大鼠,在L-芳香族氨基酸脱羧酶抑制剂3-羟苄肼·盐酸(NSD1015)灌流下,脑纹状体细胞外的透析液;用高效液相色谱-电化学检测方法测定透析液内多巴(DOPA)水平,来反映脑内TH的活性.并观察TH抑制剂以及多巴胺受体的抑制剂和激动剂对其的影响.结果:预先用 6-OHDA处理导致大鼠纹状体透析液内DOPA缺失,用NSD1015阻断DOPA向多巴胺(DA)转化,可测得DOPA的水平,且DA的代谢产物3,4-二羟基苯乙酸水平逐步下降.但在TH抑制剂α-甲基ρ-酪氨酸作用下DOPA又可消失,说明测定的DOPA是来自多巴胺神经末梢.另外,腹腔内给予多巴胺受体激动剂盐酸阿朴吗啡后,脑透析液中DOPA水平减少;而给予多巴胺受体抑制剂氟哌啶醇后,微透析液中DOPA水平增加.本研究测得在0.01 mmol*L-1 NSD1015灌流下,经6-OHDA预处理的,插入探针24 h SD大鼠纹状体中DOPA水平为(0.39±0.12)pmol*min-1(x±s,n=5).结论:在脱羧酶抑制剂NSD 1015灌流期间,测得预先用 6-OHDA处理大鼠纹状体透析液中DOPA水平可以认为是脑组织TH活性的指数,经工具药验证,在体监测脑TH活性的方法是可靠的.
关键词： 酪氨酸羟化酶 清醒大鼠 脑微透析 高效液相色谱-电化学检测法 -
冰片单用及合用西药地西泮后对大鼠脑纹状体4种氨基酸类神经递质含量的影响
目的:探索开窍药冰片单用及合用西药地西泮后对大鼠脑纹状体区兴奋性及抑制性神经递质含量的影响,以期从神经药理学角度探讨冰片对中枢神经系统的作用,观察冰片是否可以协助西药人脑,增加其疗效.方法:利用脑微透析技术采集给药后不同时间段大鼠脑纹状体区的脑脊液样品,运用邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法,磷酸盐梯度洗脱结合荧光检测器检测样品中兴奋性神经递质天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)及抑制性神经递质甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GA-BA)的含量,并进行统计分析.结果:与单用地西泮组相比,合用冰片后大鼠脑纹状体区兴奋性神经递质Asp及Glu含量变化不明显,抑制性神经递质Gly及GABA明显升高.结论:冰片对地西泮透过血脑屏障有一定的促进作用.
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青藤碱对SSNI模型大鼠镇痛效应和纹状体细胞外液单胺类递质的影响
目的:观察青藤碱对部分坐骨神经损伤(SSNI)诱导的神经病理性疼痛大鼠模型镇痛效应,并探讨其对纹状体细胞外液中单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法:雄性SD大鼠,随机分为假手术组、SSNI模型组、加巴喷丁组(100mg·kg-1)、青藤碱高、低剂量组(40,20mg·kg-1),采用Von Frey hairs和Cold Spray法评价机械痛敏和冷痛敏的程度.纹状体微透析采样,高效液相色谱-电化学法检测细胞外液中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)等神经递质及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量.结果:SSNI模型大鼠的机械痛阈、冷痛敏显著改变,脑内NE显著降低,DA,5-HT及其代谢产物明显升高.与模型组相比,青藤碱高剂量组在腹腔给药30～120min时机械痛阈显著提高(P＜0.01),在30～240min冷痛敏分值明显降低(P＜0.05)；在45～135 min内明显上调纹状体细胞外液NE含量(P＜0.05),45,75,135 min明显降低DA的含量(P＜0.05),45～135 min显著减少5-HT的含量(P＜0.01),并在45～135m in显著降低DOPAC(P＜0.01),45～75 min明显降低5-HIAA的含量(P＜0.05).结论:青藤碱对SSNI模型大鼠神经源性疼痛有干预作用,其机制可能与调节纹状体细胞外液单胺类神经递质紊乱相关.
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脑微透析与自动采血技术联用研究丹参素的药动学特性
通过微透析法联合自动采血技术研究丹参素在大鼠体内的药动学特性.微透析探针植入大鼠侧脑室,连续收集静脉注射丹参素后的透析液样品及血液样品,采用LC-MS/MS测定丹参素浓度,经回收率校正后,用WinNonlin药动学软件计算主要药动学参数.静脉注射丹参素后,丹参素在血液中、脑内的K分别为0.04,0.018 min-1,t1/2为16.64,58.76 min,AUC0-t为812.59,51.19 min·mg·L-1,MRT为15.28,79.97 min.建立的LC-MS/MS方法简便、高效、无干扰,可进行丹参素生物样品的检测;微透析技术与自动采血技术联用,较好的反映了丹参素在血液及大脑中的动力学特征,为药物药动学研究提供一个新视角.
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针刺神门穴及命门穴对大鼠中缝背核5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸含量的影响
目的 研究针刺神门和命门穴后大鼠中缝背核5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量变化,探讨针刺治疗失眠症的作用机制.方法 将SD雄性大鼠18只随机分为对照组、针刺神门组、针刺命门组各6只,采用立体定位法将微透析探针置人大鼠中缝背核,运用微透析法收集大鼠针刺前40min,针刺后20、40、60、80、100、120min中缝背核细胞外液,用高效液相-电化学法(HPLC-ED)检测其5-HT和5-HIAA含量的变化.结果 与针刺前相比,针刺大鼠神门和命门穴20min后中缝背核5-HT的水平显著下降(P＜0.01),在其后2h维持在低水平;与对照组相比,大鼠针刺后2h各时相点中缝背核5-HT的水平也显著下降(P＜0.01).与针刺前的基础值及与对照组相比,针刺神门和命门穴均显著降低中缝背核5-HIAA含量(P＜0.01).结论 针刺神门和命门穴能通过调节中缝背核组织中5-HT和5-HIAA含量从而起到调节睡眠的作用.
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谷氨酸受体对大鼠海马兴奋性氨基酸的调节作用
谷氨酸(glutamate)和天冬氨酸(asparte)在正常的学习、记忆及癫癎发作和神经退行性疾病的病理过程中均起着很重要的作用.海马中含有大量谷氨酸和天冬氨酸,且与学习记忆关系密切,同时它对缺血、缺氧和某些化学致害剂等致病因素较为敏感 [1-2].为了探讨脑内谷氨酸和天冬氨酸释放的调节机制,特别是了解海马内兴奋性氨基酸的释放过程,我们于2004年8月至2005年4月采用脑微透析技术结合高效液相色谱技术研究N-甲基-D-天冬氨酸(N-metlyl-D-asparte,NMDA)受体对大鼠海马谷氨酸和天冬氨酸释放的调节作用,报道如下.
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微透析技术在中枢神经系统药物转运体研究中的应用
中枢神经系统(CNS)的定量微透析研究证实了转运体的存在,该转运体与多种药物在脑中的分布有关.存在药物转运体的证据包括:脑液中游离药物浓度低于血浆中相应浓度;通过血脑屏障的转运清除率具有饱和性;抑制剂对转运有调节作用.另外,通过建立模型,将观测药物在CNS血浆或血液中的浓度联系起来,找到了主动转运过程或载体中介过程存在的证据.本文对"因为脑脊液中药物浓度低的事实而推断出存在主动输出过程"的结论提出了质疑.若化合物极性相对较大,跨越血脑屏障的通透性又较小,则脑中化合物的低浓度也可能是由脑液的更新所引起的稀释作用造成的.
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银杏叶提取物对大鼠海马缺血再灌注时兴奋性氨基酸释放的影响
目的观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba,EGb)对清醒大鼠脑缺血-再灌注时,海马细胞外液EAA释放的影响,探讨其对缺血-再灌注损伤的保护机制.方法在大鼠Pulsinelli"四血管"阻断脑缺血-再灌注模型,用HPLC-荧光检测法测定全脑缺血EAA含量,观察再灌注30min时,海马细胞外液EAA含量的变化和EGb对EAA释放的影响.设计假手术组作本底试验,乙醇做对照组(单纯缺血-再灌注组),EGb三个剂量(100、150、200mg*kg-1).结果对照组中的EAA较假手术组明显增高(P<0.01);EGb三个剂量组较对照组EAA含量明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性趋势.结论大鼠脑缺血后,谷氨酸和天冬氨酸明显升高,缺血越重EAA释放越多;再灌注后,EAA进一步提高.而EGb能明显减少缺血-再灌时脑细胞EAA的释放,这可能是EGb对脑缺血-再灌损伤的又一保护机制.
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应用微透析技术和高效液相色谱法测定川芎嗪对大鼠脑内多巴胺释放量的影响
利用脑内微透析技术与现代分析方法,考察了不同剂量川芎嗪对大鼠脑内多巴胺释放的影响.采用脑内微透析技术进行在体动态取样,建立了高效液相-电化学检测方法测定脑透析液中的多巴胺含量.结果显示川芎嗪皮下给药能够剂量相关性地增加大鼠脑内不同脑区中多巴胺的释放.该方法能够在不影响动物正常生理活动的情况下准确反映药物对大鼠脑内多巴胺释放量的影响,与传统神经递质研究方法相比,具有明显的优势.
关键词： 川芎嗪 脑微透析 高效液相-电化学检测 多巴胺 -
脑微透析技术在脑内研究中的应用
脑微透析技术可用于采样脑内神经递质、神经蛋白和激素,并结合高灵敏度的微量化学分析技术对其进行定量分析,从而研究与中枢神经递质相关的疾病、病理及治疗方法等.本文介绍了脑微透析技术的基本原理和过程,并对其在中枢神经递质如兴奋性氨基酸、乙酰胆碱、多巴胺、五羟色胺等及相关药物如选择性五羟色胺再摄取抑制剂、自由基清除剂研究中的应用进行综述.
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葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸水平的影响
目的研究葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸水平的影响.方法大脑中动脉栓塞(MCAO)60 min建立大鼠局部脑缺血模型.给药组在缺血前30 min和再灌注开始时分别腹腔注射Pur(50,100 mg·kg-1,ip).用脑微透析仪收集缺血前后和再灌注过程纹状体的细胞外液,高效液相色谱分析其兴奋性和抑制性氨基酸水平;缺血再灌注24 h取脑用TTC染色法测算脑梗死体积和水肿率.用流式细胞仪结合Annexin-V荧光标记法检测Pur(40,100μmol·L-1)对体外培养海马神经细胞谷氨酸(0.5 mmol·L-1)诱导细胞凋亡的保护作用.结果缺血开始后,纹状体的天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)水平快速升高,高时分别达缺血前的8.92,14.15,9.07和4.84倍.再灌注开始后,氨基酸水平迅速下降,120 min后接近正常.100 mg·kg-1 Pur在减小脑梗死体积和脑水肿的同时,显著降低脑缺血过程纹状体氨基酸水平,其高值分别比缺血组降低35.7%(Asp)、43.2%(Glu)、28.5%(GABA)和31.8%(Tau)(P<0.01);GIu/GABA比值明显低于缺血大鼠.流式细胞检测结果显示,100 μmol·L-1 Pur明显抑制谷氨酸兴奋毒作用,分别使海马神经细胞的凋亡率和坏死率降低33.1%和35%(P<0.01).结论 Pur可有效抑制脑缺血诱导的细胞外氨基酸水平升高和谷氨酸兴奋毒作用,该机制可能与Pur的抗脑缺血作用有关.
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脑微透析技术及其在脑内药动学中的应用
目的介绍脑微透析技术及其在脑药动学中的应用.方法检索近年来国内外有关对脑微透析技术和脑药动学的研究性文献,并进行分析、归纳.结果综述了脑微透析技术的特点及其近几年的发展,并介绍了脑微透析技术在脑药动学方面的应用.结论脑微透析技术在脑药动学研究中具有不可替代的作用,随着该技术发展,应更有助于脑药动学发展.
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重型创伤性脑损伤救治多模态监测的研究进展
重型创伤性脑损伤(TBI)是世界范围内导致患者死亡和重度残疾的主要疾病.当前TBI救治的监测手段以体格检查、影像检查为主,其并不能及时、有效地发现、诊断、干预TBI的病理生理过程,缺乏明确的、个体化的治疗目标,不能改善患者的临床转归.颅内压监测、脑组织氧监测、脑微透析技术、脑电监测以及脑血流监测是监测TBI的重要方法.多模态监测是对这些孤立监测手段的整合,其能够从不同角度评估TBI程度,相应的目标导向治疗能够指导临床医师采取个体化、精准化的治疗方案,进而改善重型颅脑损伤患者的临床转归.
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酸枣仁皂苷A对小鼠前额叶皮层腺苷释放及核苷转运体的影响
目的 研究酸枣仁皂苷A(JuA)(40、80 mg/kg)对小鼠前额叶皮层腺苷释放的影响.方法 采用在体脑微透析观测JuA对前额皮质细胞外腺苷含量的影响,并同时观察小鼠的自主活动;Western blot考察JuA对平衡型核苷转运蛋白(ENT)和浓度型核苷转运蛋白(CNT)2种蛋白质表达.结果 JuA腹腔注射能在90 min内剂量依赖性地增加小鼠前额叶皮层细胞外腺苷含量,并降低其自主活动.对CNT1和ENT1蛋白表达无显著性影响.结论 JuA可以促进小鼠前额叶皮层腺苷的释放,但可能与核苷酸转运蛋白无关.
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微透析技术在脑靶向中应用
微透析技术作为一门新兴的技术,近年来多用于靶向分布和体内代谢等方面,尤其是在药物的脑部研究方面,该技术显得尤为重要.如今,随着新型探针的不断出现,以及微量、快速、灵敏的分析检测手段的发展,微透析技术已日益成为药物脑部研究的重要工具.现通过检索近十年来的相关文献,对脑微透析技术的概况、原理、脑微透析探针以及其应用作一综述,希望能为从事该方面研究的药学工作者提供相关参考.
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脑微透析法研究大鼠脊髓损伤后脑内兴奋性氨基酸的动态变化
目的 研究大鼠脊髓损伤后大脑中枢兴奋性氨基酸水平的变化,探讨微透析技术在脊髓损伤中的应用,以及脊髓损伤与大脑中枢反应的关系.方法 将Wistar大鼠分为损伤组、对照组和正常组,损伤组定位脑内纹状体,运用微透析技术检测大鼠脊髓损伤前1 h,损伤后0.5 h,2 h,6 h,24 h,72 h其脑细胞外液(ECF)兴奋性氨基酸含量的变化,选取谷氨酸含量([Glu]d)和天门冬氨酸含量([Asp]d)为兴奋性氨基酸的主要参考值.结果 大鼠脊髓损伤0.5 h后脑内[Glu]d和[Asp]分别为损伤前基础值的(402±10)%、(642±7)%(P＜0.01),然后逐步回落,于伤后24 h大致恢复正常.结论 由于谷氨酸,天门冬氨酸是大脑内重要的兴奋性氨基酸递质,因此脊髓损伤后脑内兴奋性氨基酸水平的一过性升高提示大脑皮质、脑干网状结构正常状态对脊髓易化作用在脊髓损伤后所依赖的神经递质水平受到显著影响,而且微透析技术可以较好地检测其动态变化.
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脑微透析技术在神经精神疾病中的研究进展
脑微透析是一种可对采集样品进行连续、在线、实时定量分析的技术,近年来在脑内神经递质的检测中应用广泛,在神经精神疾病的研究中有广阔的发展前景,但因其操作复杂、价格昂贵、耗时长、个体差异大、探针重现性不良等而受到限制.进一步优化实验设计、发展多位点微透析是下一步的方向,神经精神疾病脑内微环境代谢状态变化的监测是微透析技术用于此的另一前景.文章就脑微透析技术的原理、特点及操作要点,神经递质与神经精神疾病之间的关系,以及脑微透析在神经精神疾病中的研究进展进行综述.
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HPLC同时测定大鼠脑微透析液氧化苦参碱和苦参碱的含量研究
目的:建立同时测定大鼠脑微透析液中氧化苦参碱、苦参碱含量的HPLC分析方法.方法:采用ODS C18柱(250mm×4.6mm,5m),以0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.6):甲醇:乙腈:三乙胺=65:15:25:0.1为流动相,流速为1.0ml/min;检测波长为220nm.结果:脑微透析液中氧化苦参碱在0.083~25mg/L线性关系良好(r=0.9999),苦参碱在0.032~20mg/L线性关系良好(r=0.9999).脑微透析液中氧化苦参碱、苦参碱的回收率不低于95.16%,日内、日间精密度分别在0.80%、1.01%内.结论:本方法简便、灵敏、准确,适用于脑微透析液中氧化苦参碱、苦参碱的分析.
