电针对炎症痛大鼠痛阈及中缝大核、中缝背核和导水管周围灰质c-fOS表达的影响

越来越多的研究均表明,不同类型的伤害性刺激可诱发c-fos在大鼠、小鼠、猫和豚鼠的脊髓和不同脑区中表达.本实验观察了大鼠在角叉菜胶致炎后,在痛觉调制密切相关的中缝大核、中缝背核和导水管周围灰质c-fos表达的变化,及电针镇痛作用对c-fos表达的影响.实验分成正常对照组、角叉菜胶致炎组和电针+角叉菜胶致炎组.大鼠脚掌注射角叉菜胶(2%,0.1 mL)造成大鼠炎症痛模型,测定大鼠的痛阈变化.

电针对足底切口痛大鼠下丘脑及脊髓β-内啡肽的影响

目的:观察电针对足底切口痛大鼠痛阈、下丘脑和脊髓内β-内啡肽(β-EP)、中缝背核(DRN)内5-羟色胺(5-HT)的影响,探讨电针对足底切口痛大鼠的镇痛作用机制.方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针穴位组、电针非穴位组,每组8只.采用足底切口复制痛模型.电针穴位组选取右侧“足三里”“昆仑”穴,电针非穴位组选择两穴位旁开3 mm非穴位处,每天电针1次,每次20 min,治疗3次.观察各组大鼠痛阈变化,采用酶联免疫分析法、免疫组化法测定下丘脑、脊髓内β-EP以及DRN内5-HT的表达水平.结果:模型组大鼠机械痛阈及热痛阈均较正常组明显降低(P＜0.05);下丘脑β-EP含量较正常组明显升高,β-EP阳性细胞数明显增多(P＜0.05);DRN内5-HT表达水平较正常组明显升高(P＜0.05).治疗后,电针穴位组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显高于模型组和电针非穴位组(P＜0.05);下丘脑β-EP含量和阳性细胞数较模型组与电针非穴位组明显升高(P＜0.05);DRN内5-HT表达水平较模型组和电针非穴位组明显升高(P＜0.05).各组脊髓内β-EP含量的变化差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针对大鼠足底切口疼痛的镇痛作用可能是通过提高下丘脑β-EP含量进而激活DRN内5-HT的表达介导.

针刺神门穴及命门穴对大鼠中缝背核5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸含量的影响

目的 研究针刺神门和命门穴后大鼠中缝背核5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量变化,探讨针刺治疗失眠症的作用机制.方法 将SD雄性大鼠18只随机分为对照组、针刺神门组、针刺命门组各6只,采用立体定位法将微透析探针置人大鼠中缝背核,运用微透析法收集大鼠针刺前40min,针刺后20、40、60、80、100、120min中缝背核细胞外液,用高效液相-电化学法(HPLC-ED)检测其5-HT和5-HIAA含量的变化.结果 与针刺前相比,针刺大鼠神门和命门穴20min后中缝背核5-HT的水平显著下降(P＜0.01),在其后2h维持在低水平;与对照组相比,大鼠针刺后2h各时相点中缝背核5-HT的水平也显著下降(P＜0.01).与针刺前的基础值及与对照组相比,针刺神门和命门穴均显著降低中缝背核5-HIAA含量(P＜0.01).结论 针刺神门和命门穴能通过调节中缝背核组织中5-HT和5-HIAA含量从而起到调节睡眠的作用.

痛抑郁二联征模型大鼠中缝背核不同水平5羟色胺表达差异

目的 探讨痛抑郁二联征模型大鼠中缝背核(DRN)5羟色胺(5-HT)阳性细胞的分布特点.方法 20只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组.模型组大鼠连续3d皮下注射利血平,每日1次,以诱发痛抑郁二联征模型.模型制作后第1天和第2天检测左后足机械缩足阈观察大鼠痛阈变化,模型制作后第2天旷场实验和高架O迷宫实验检测大鼠情绪变化,免疫荧光技术观察DRN前囟后6.8mm、7.3mm和7.8mm水平的5-HT表达.结果 模型组大鼠经利血平注射后机械痛阈显著下降,并产生抑郁样行为.对照组的DRN前囟后6.8mm、7.3mm和7.8mm水平的5-HT阳性细胞表达量分别为106.00±10.21、96.67±24.50和195.67±2.33.模型组相应的表达量分别为61.67±14.53,72.33±34.35和53.67±26.77.除前囟后7.8mm水平模型组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)之外,其他两个水平5-HT阳性细胞表达量模型组和对照组之间差异无显著性(P＞0.05).结论 利血平诱导的痛抑郁二联征大鼠模型以及中缝背核5-HT表达的降低,可能主要与DRN前囟后7.8mm水平的5-HT阳性细胞数变化有关,而与前囟后6.8mm和后7.3mm水平无关.

鱼藤酮致帕金森大鼠脑内5-羟色胺和5-羟色胺转运体的表达改变

目的 通过观察鱼藤酮处理大鼠脑内相关脑区5-羟色胺(5-HT)和5-羟色胺转运体(SERT)的表达变化,探讨鱼藤酮对5-HT能神经元的影响.方法 选用健康成年雄性Wistar大鼠42只,背部皮下注射鱼藤酮制作帕金森病大鼠动物模型,以免疫组织化学染色、免疫印迹法及流式细胞术显示大鼠脑内相关脑区5-HT和SERT的表达变化.结果 1.5-HT:免疫组织化学染色显示,鱼藤酮组大鼠中脑中缝背核5-HT免疫反应阳性神经元数量明显少于对照组(P＜0.01),中缝背核和尾壳核5-HT免疫反应强度明显减弱(P＜0.01);流式细胞术(间接免疫荧光法)检测显示,鱼藤酮组大鼠5-HT的表达量比对照组明显降低(P＜0.01).2.SERT:免疫组织化学染色显示,鱼藤酮组大鼠中缝背核和尾壳核SERT免疫反应强度明显减弱( P＜0.01);免疫印迹法检测发现,鱼藤酮组大鼠中缝背核及尾壳核的SERT与β-actin吸光度比值与对照组相比明显降低(P＜0.05).结论 鱼藤酮对5-HT能神经元具有明显的神经毒性.

乙状结肠痛对大鼠中缝背核Fos-LI和NADPH-d阳性神经元表达影响的实验研究

目的:探讨中缝背核还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)阳性神经元是否参与调控大鼠乙状结肠痛.方法:采用Fos免疫组织化学、NADPH-d组织化学及Fos/NADPH-d双标技术,观察乙状结肠痛大鼠中缝背核NADPH-d阳性神经元和Fos样免疫反应蛋白(Fos-LI)的变化.结果:乙状结肠痛刺激后,中缝背核内NADPH-d阳性神经元个数和染色深度增加;中缝背核Fos-LI明显增加;中缝背核内有Fos-LI/NADPH-d双标神经元的表达,约占NADPH-d神经元的11%,与生理盐水对照组相比有显著性差异.结论:中缝背核NADPH-d阳性神经元可能参与对乙状结肠痛刺激的信息传递.

与听觉、前庭系统相关的中缝背核神经通路研究进展

中缝背核(dorsal raphe nucleus,DRN)是中缝核中8个缝核之一,对听觉和前庭刺激可以做出反应,投射到大脑皮质广泛区域、基底核和间脑,并可以与听觉和前庭通路的许多部分组成神经纤维联系.本文将近年来中缝背核与听觉、前庭相关神经通路研究综述如下.

大鼠中缝背核与前额皮质间甘丙肽能纤维联系的研究

目的 观察中缝背核与前额皮质间甘丙肽(Gal)能神经元的纤维投射.方法 参照Paxions-Waston大鼠脑立体定位图谱,确定中缝背核、前额皮质的坐标,将逆行追踪剂荧光金(FG)分别注入各坐标点后,结合免疫荧光组织化学染色,在共聚焦荧光显微镜下观察中缝背核与前额皮质Gal/FG双标神经元的分布状况.结果 将FG注入腹侧和背侧前额皮质后,可见Gal/FG双标神经元主要分布于中缝背核腹侧,尤其集中在内侧纵束周围;将FG注入中缝背核喙侧,可见Gal/FG双标神经元主要分布于腹侧前额皮质,尤其集中在边缘下皮质(IL)和前边缘皮质(pL);将FG注入中缝背核中间部和尾侧,可见Gal/FG双标神经元均匀分布于前额皮质各区.结论 在中缝背核与前额皮质间存在Gal能双向神经通路.

中缝背核参与大鼠吗啡依赖和戒断的形成机制研究

目的 观察大鼠脑内神经核団中缝背核(DRN)在一氧化氮(N0)介导的吗啡依赖和戒断形成的作用机制.方法 雄性成年SD大鼠随机分为5组:戒断组(腹腔注射吗啡+纳洛酮)；依赖组(注射吗啡+生理盐水)；生理盐水组(注射生理盐水)；纳洛酮组(注射生理盐水+纳洛酮)；抑制剂组(注射吗啡加NOS抑制剂+纳洛酮).戒断组和依赖组,用剂量递增法经腹腔注射吗啡10 ～ 100mg·kg-1,每天3次,连续5天,建立吗啡依赖与戒断模型,并进行行为学观测与评分后,用神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组织化学标记,计数各组动物相同层面脑片上nNOS标记细胞的表达情况.结果戒断组,戒断症状及总评分较对照组和依赖组均差异显著(P＜0.01)；NOS抑制剂组,戒断症状评分较戒断组明显降低(P＜0.05).于中缝背核相应区域计数到部分nNOS标记神经元,生理盐水组及纳洛酮组比较无显著性差异；而依赖组与戒断组,其神经元计数明显增加(P＜0.05)；而NOS抑制剂组,神经元数量较戒断组明显减少(P＜0.05).结论脑内中缝背核可能通过一氧化氮信号通路参与了大鼠吗啡依赖与戒断的形成.

中缝背核5-HT在创伤后应激障碍发病机制中的研究

中缝背核是位于脑干正中缝两侧的中缝核细胞群中的一员，其存在多种神经递质和神经肽，参与多种生理活动。本文主要叙述中缝背核中的5-羟色胺及其相关的神经递质和神经肽在中缝背核神经精神调节中的主要作用机制，及在创伤后应激障碍发病机制中的作用。

毁损大鼠中缝背核内触液神经元对吗啡依赖和戒断的影响

目的:探索脑内远位触液神经元在吗啡依赖和戒断形成过程中的作用.方法:化学性神经元毁损、侧脑室引入霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)神经示踪、TMB-ST呈色反应,Western blot、nNOS免疫组织化学.结果:毁损大鼠中缝背核内远位触液神经元后,纳洛酮催促的戒断症状明显减弱,戒断症状评分较戒断未毁损组降低约38%(P＜0.05);给予溶媒和毁损触液神经元旁侧的大鼠戒断症状与戒断组比较未见明显变化(P＞0.05).毁损组脑片触液神经元密集区局部细胞损坏明显,仅在其毁损区边缘观测到少量CB-HRP阳性细胞.未毁损组CB-HRP标记细胞位置及数量恒定,形态清晰.毁损触液神经元后,脊髓背角nNOS阳性神经元计数及nNOS蛋白表达较戒断未毁损组减少明显(P＜0.05),而较正常组和依赖组增加仍显著(P＜0.01).结论:毁损大鼠中缝背核内部分远位触液神经元可减弱吗啡戒断症状和脊髓背角神经元型一氧化氮合酶的表达,提示中缝背核内部分远位触液神经元可能参与了吗啡依赖和戒断的形成,NO介导脑内触液神经元与脊髓水平对吗啡依赖和戒断的调节.

中缝背核5-羟色胺能神经元在睡眠调节中的作用研究

目的:研究中缝背核(DRN)5-羟色胺(5-HT)能神经元在睡眠中的调节作用.方法:运用脑立体定位、核团微量注射和多导睡眠描记(PSG),观察DRN 5-HT能神经元对大鼠睡眠的影响.结果:DRN微量注射谷氨酸钠(LGlu),大鼠睡眠减少,特别是深慢波睡眠(SWS2)明显减少,觉醒(W)增加;DRN微量注射海人酸(KA)和对氯苯丙氨酸(PCPA),大鼠SWS2和异相睡眠(PS)增加,W减少.结论:DRN 5-HT能神经元参与睡眠的调节,兴奋DRN5-HT能神经元睡眠时间减少,抑制DRN 5-HT能神经元则具有促进睡眠的作用.

疼痛刺激对大鼠脊髓上水平神经元NADPH-d和Fos表达的影响

目的: 研究一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元在中脑导水管周围灰质(PAG)和中缝背核(DR)内的分布,探讨脊髓上水平一氧化氮(NO)与外周痛的关系.方法:SD大鼠20只,随机分为2组,每组10只.实验组大鼠单侧后肢足底皮下注射5%福尔马林0.1 ml,对照组大鼠于相同部位注射生理盐水0.1 ml.2 h后常规灌注、固定、取材大鼠中脑所在段、切片.切片按序分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三套.全部切片先作NADPH-d组织化学反应,镜检阳性切片,Ⅰ套继续作中性红染色,Ⅱ、Ⅲ套作c-fos免疫细胞化学反应,其中Ⅲ套用0.01 mol/LPBS代替c-fos抗体.封片后镜下观察.结果:NADPH-d阳性神经元主要分布于PAG腹外侧核(CGLV)、背外侧核(CGLD)和DR;大鼠足底注射福尔马林后可在上述部位发现NADPH-d、Fos和NADPH-d/Fos三种标记的阳性神经元.结论:脊髓上水平NO可能在PAG和DR的痛觉调制中起作用.

外周痛刺激诱导大鼠中缝背核内触液神经元Fos蛋白表达

实验应用CB-HRP逆行追踪和c-fos免疫细胞化学相结合的方法研究了大鼠足底注射福尔马林后中缝背核内触液神经元Fos蛋白的表达,以探讨大鼠中缝背核内触液神经元与外周痛的关系.

5-羟色胺通过5-HT2型受体在中缝背核的含5-羟色胺细胞引起自发抑制性突触后电流的增加

p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax在PTSD大鼠中缝背核的表达

目的 从蛋白和基因水平上观察PTSD大鼠中缝背核神经元p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达量变化.方法 采用国际上公认的的单一延长应激(single-prolonged stress,SPS)的方法建立PTSD大鼠模型;采用Morris水迷宫测试SPS刺激后大鼠的空间记忆和学习能力;采用Western blot及Real TimePCR检测PTSD大鼠中缝背核神经元p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA水平表达.结果 模型组大鼠平均逃避潜伏期显著高于正常对照组,而在目标象限停留的时间百分比明显低于正常对照组.SPS刺激后,PTSD大鼠中缝背核神经元p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax在蛋白和基因水平阳性表达比正常对照组增多.结论 SPS刺激使PTSD大鼠中缝背核神经元的p38-CHOP细胞凋亡信号通路激活,诱发了下游的级联反应,导致了中缝背核神经元的凋亡.

内质网应激跨膜蛋白IRE1α及下游信号分子ASK1、JNK在PTSD大鼠中缝背核应答URP的分子机制

目的 从蛋白和基因水平上观察PTSD大鼠中缝背核神经元IRE1 α、ASK1及其下游信号分子JNK表达量变化.方法 采用国际上公认的单一延长应激(single-prolonged stress,SPS)的方法建立PTSD大鼠模型;采用Morries水迷宫测试SPS刺激后大鼠的空间记忆和学习能力;采用免疫组化、Western blot及Real TimePCR检测PTSD大鼠中缝背核神经元IRE1α、ASK1、JNK蛋白及mRNA水平表达.结果 模型组大鼠平均逃避潜伏期显著高于正常对照组,在目标象限停留的时间百分比明显低于正常对照组.经SPS刺激后,PTSD大鼠中缝背核神经元IRE1α、ASK1、JNK在蛋白和基因水平上阳性表达增多.结论 SPS刺激激活PTSD大鼠中缝背核神经元的IRE1α-ASK 1-JNK细胞凋亡信号通路,诱发下游的级联反应,导致中缝背核神经元的凋亡.

PTSD样大鼠中缝背核神经元细胞凋亡及其TMP活性表达变化的研究

目的 研究创伤后应激障碍(PTSD)样大鼠中缝背核神经元细胞凋亡及三偏磷酸酶(TMP)活性的表达变化.方法 采用SPS刺激方法,建立PTSD样大鼠SPS模型,随机分为SPS刺激后1d、7d、14 d和正常对照组,应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术、透射电镜和酶组化方法,分别对各组中缝背核神经元细胞凋亡及其TMP活性变化的观察和定量检测.结果 SPS刺激后1d、7d、14 d中缝背核神经元出现了细胞凋亡的特征性形态学改变、其凋亡率明显增加、TMP活性表达明显比正常对照组增强,并于7d达到高峰.结论 PTSD样大鼠中缝背核神经元细胞出现凋亡,凋亡率增加的同时TMP活性增强,提示TMP参与了中缝背核神经元细胞的凋亡产物的降解与处理过程,脑桥体积缩小可能与中缝背核神经元细胞凋亡有关.

5-HT7受体对帕金森病模型大鼠中缝背核5-HT能神经元电活动的调控作用

目的:探讨5-羟色胺-7(5-HT7)受体对正常和帕金森病(PD)模型大鼠中缝背核(DRN)5-羟色胺(5-HT)能神经元电活动的调控作用,阐明5-HT7受体的性质及PD状态下该受体性状的改变.方法:28只雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=12)和PD组(n=16).PD组大鼠黑质致密部内注射6-OHDA,假手术组大鼠注射同等剂量生理盐水.2组大鼠静脉注射多个剂量(40～640 μg·kg-1,i.v.)的5-HT7受体激动剂AS19后,采用体细胞外电生理学记录观察大鼠DRN中5-HT能神经元放电频率的变化;静脉注射5-HT7受体拮抗剂SB269970后,观察PD组大鼠对激动剂和拮抗剂的敏感性,并与假手术组进行比较.结果:在假手术组中,与基础放电频率比较,5-HT7受体激动剂AS19(40～640 μg·kg-1,i.v.)能够明显增加大鼠5-HT能神经元的放电频率,放电频率增加到2.35±0.16 (P＜0.01);这种作用可以被SB269970(200 μg·kg-1,i.v.)完全反转,使大鼠5-HT能神经元的放电率恢复为0.37±0.03.在PD组中,相同剂量AS19 (40～640 μg·kg-1,i.v.)对5-HT神经元的放电频率无兴奋效应(P=0.218).结论:5-HT7受体对PD模型大鼠中缝背核5-HT能神经元的调控作用减弱.

中缝背核与缰核间功能联系的电生理学

目的:验证中缝背核与缰核间的电活动及其功能联系.方法:分别在中缝背核和缰核埋置套管,采用微量注射、电刺激及细胞外记录的方法,观察缰核及中缝背核细胞单位放电.结果:阻断中缝背核,外侧缰核神经元放电频率增加(58%),内侧缰核神经元放电频率减少(56%);电刺激中缝背核,外侧缰核神经元放电频率减少(61%),内侧缰核神经元放电频率增加(52%).阻断缰核,中缝背核神经元放电频率以兴奋为主(53%单位自发性放电频率增加);电刺激缰核,中缝背核神经元放电频率以抑制为主(62%单位自发性放电频率减少).结论:缰核与中缝核之间存在密切的功能联系.