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电针对老龄大鼠脑缺血再灌注脑组织核转录因子NF-κB和氨基酸递质的影响
目的:从观察脑组织谷氨酸(GLU)、天门冬氨酸(ASP)、甘氨酸(GLY)含量和核转录因子(NF-κB)表达的变化,揭示针刺穴位抗老年脑缺血再灌注I/R损伤的保护机制.方法:采用大脑中动脉闭塞方法造成老龄大鼠脑缺血动物模型,大鼠随机分组为假手术组、模型组、非穴位组、穴位治疗组.每组又根据缺血及再灌注时间不同分为缺血3h后再灌注1、3、7、12d 4个时间点观察.观察各时间点大鼠神经症状积分、脑组织含水量、病理变化、高效液相色谱法测定脑组织GLU、ASP、GLY;免疫组织化学方法测定脑组织NF-κB表达.结果:与假手术组比较,模型组各时间点大鼠神经症状积分、脑组织含水量、GLU、ASP含量和NF-κB表达明显升高,GLY含量无明显变化.与模型组比较,穴位治疗组各时间点大鼠神经症状积分、脑组织含水量、GLU、ASP含量和NF-κB表达显著降低(P<0.05),GLY含量无明显变化;与模型组比较,非穴位组各时间点大鼠神经症状积分、脑组织含水量、GLY、GLU、ASP含量和NF-κB表达无明显变化.结论:脑缺血可增强大鼠脑组织兴奋性氨基酸释放和NF-κB表达;针刺穴位抗脑缺血再灌注损伤的机制与其降低脑组织兴奋性氨基酸神经毒性和抑制NF-κB表达有关.
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葛根素对雌激素剥夺小鼠学习记忆行为的影响
目的研究葛根素对雌激素剥夺小鼠学习记忆功能的影响.方法卵巢摘除(Ovx)或假手术(sham)后一周,雌性小鼠给予4周的葛根素(Pur,50,100mg·kg-1,ip)或苯甲酸雌二醇(EB,1,5μg·d-1,ip)治疗.分别用Y-迷宫和水迷宫检测小鼠的分辨学习记忆和空间记忆行为;高效液相色谱分析大脑前皮层和海马组织的谷氨酸(Glu)和y-氨基丁酸(GABA)含量.结果Ovx小鼠经50或100mg·kg-1Pur治疗后,在Y-迷宫达到学会标准所需训练次数分别下降11.8%和17.8%(P＞0.05和P＜0.05),记忆保持率分别提高23.3%和28.3%(P＜0.05).因Ovx而延长的水迷宫平台搜寻潜伏期缩短15.5%和23.8%(P＜0.05).同时,100mg·kg-1Pur使Ovx小鼠海马组织的Glu和GABA水平恢复正常,Glu从Ovx小鼠的(24.1±4.5)mg·g(pro)-1回升到(27.9±3.5)mg·g(pro)-1(P＜0.05),而GABA则从(5.64±1.06)mg·g(pro)-1回调到(4.73±0.85)mg·g(pro)-1(P＜0.05).结论长期Pur治疗可通过影响海马谷氨酸能和GABA能递质系统改善雌激素剥夺引起的记忆损伤,该作用可能与Pur的植物雌激素样活性有关.
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葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸水平的影响
目的研究葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠纹状体氨基酸水平的影响.方法大脑中动脉栓塞(MCAO)60 min建立大鼠局部脑缺血模型.给药组在缺血前30 min和再灌注开始时分别腹腔注射Pur(50,100 mg·kg-1,ip).用脑微透析仪收集缺血前后和再灌注过程纹状体的细胞外液,高效液相色谱分析其兴奋性和抑制性氨基酸水平;缺血再灌注24 h取脑用TTC染色法测算脑梗死体积和水肿率.用流式细胞仪结合Annexin-V荧光标记法检测Pur(40,100μmol·L-1)对体外培养海马神经细胞谷氨酸(0.5 mmol·L-1)诱导细胞凋亡的保护作用.结果缺血开始后,纹状体的天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和牛磺酸(Tau)水平快速升高,高时分别达缺血前的8.92,14.15,9.07和4.84倍.再灌注开始后,氨基酸水平迅速下降,120 min后接近正常.100 mg·kg-1 Pur在减小脑梗死体积和脑水肿的同时,显著降低脑缺血过程纹状体氨基酸水平,其高值分别比缺血组降低35.7%(Asp)、43.2%(Glu)、28.5%(GABA)和31.8%(Tau)(P<0.01);GIu/GABA比值明显低于缺血大鼠.流式细胞检测结果显示,100 μmol·L-1 Pur明显抑制谷氨酸兴奋毒作用,分别使海马神经细胞的凋亡率和坏死率降低33.1%和35%(P<0.01).结论 Pur可有效抑制脑缺血诱导的细胞外氨基酸水平升高和谷氨酸兴奋毒作用,该机制可能与Pur的抗脑缺血作用有关.
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磷酸化突触素在神经元囊泡循环与递质释放中作用
目的 探讨磷酸化突触素Ⅰ在微波辐射所致囊泡循环和氨基酸递质释放改变中的作用.方法 采用30 mW/cm2微波辐射原代海马神经元,免疫荧光染色观察辐射后1、6、12h,1、2、3d神经元Ser-62/67及Ser-553位点突触素Ⅰ磷酸化表达改变;高效液相色谱检测辐射后6h海马神经元氨基酸递质释放量变化;time-lapse观察辐射后6h神经元突触囊泡循环改变;给予U0126和roscovitine进行干预,观察上述指标改变.结果 30 mW/cm2微波辐射后海马磷酸化突触素Ⅰ Ser-62/67、Ser-553及磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)、细胞周期素依赖性激酶(Cdk5)表达明显减少,γ-氨基丁酸(GABA)释放明显减少,海马神经元囊泡循环速度减慢;辐射并给予U0126后,神经元p-ERK和Ser-62/67位点突触素Ⅰ磷酸化表达明显减弱,囊泡循环速度减慢;辐射并给予roscovitine后,神经元Cdk5表达减少,Ser-553位点突触素Ⅰ磷酸化表达上调,GABA释放明显增加,囊泡循环速度明显减慢.结论 30mW/cm2微波辐射通过下调海马神经元ERK活性抑制突触素Ⅰ Ser-62/67位点磷酸化而使囊泡循环受抑制,囊泡锚定障碍;通过下调Cdk5促进突触素Ⅰ Ser-553位点磷酸化而利于含GABA的囊泡锚定于突触前膜,但抑制囊泡循环.
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电针对D-半乳糖所致空间记忆障碍大鼠海马氨基酸递质改变的影响
目的 观察电针对D-半乳糖所致大鼠空间学习记忆障碍的影响,从氨基酸递质含量改变探讨电针作用机制.方法 将24只大鼠随机分成三组:正常对照组(n=8),模型组(n=8),电针组(n=8);应用反相高效液相法对各组大鼠海马5种氨基酸递质进行了检测.结果 模型组Asp含量比正常对照组显著降低,电针后增高(P＜0.05);在模型组Glu含量比正常组升高,电针后含量更高,差异有统计学意义(P＜0.05);Gly在模型组有降低趋势,但差异无统计学意义,电针组含量增高,与模型组和正常对照组比差异都有统计学意义(P＜0.05);Tau在模型组含量显著降低,电针后增高,差异有统计学意义(P＜0.05);GABA在模型组含量显著降低(P＜0.05),电针后增高,但差异无统计学意义.结论 电针调节D-半乳糖引起的记忆障碍大鼠可能与海马多种氨基酸含量的改变有关.
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低温对沙土鼠单侧脑缺血的保护作用
目的:观察低温干预对沙土鼠单侧脑缺血后氨基酸递质的影响.方法:16只蒙古沙土鼠随机分为常温[直肠温度(37.0±0.2)℃]和低温[直肠温度(32.0±0.2)℃]组.右侧颈内动脉钳夹30 min,用脑内微透析和高效液相色谱法测定右侧海马CA1区胞外氨基酸递质含量.结果:低温明显抑制了细胞外谷氨酸、甘氨酸浓度的升高,使兴奋毒性指数显著降低.结论:低温对脑缺血的保护机制之一可能是降低了神经细胞的兴奋毒性指数.
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调心方对AD模型鼠脑组织呼吸链氧化酶活性和氨基酸递质含量的影响
为研究调心方(主药:党参、桂枝、茯苓、菖蒲、远志)治疗阿尔茨海默病(AD)的机理,将SD 雄性大鼠脑室内注射 DHF-FeCl3-ADP,造成氧化损伤型类 AD 模型(造模前1周起以调心方灌胃,每日1次,连续4周);采用 Clark 氧电极法观察鼠脑线粒体呼吸链氧化酶活性;HPLC-荧光法观察鼠脑氨基酸递质含量;RT-PCR 法观察大脑皮质 NMDAR(NR1a和NR2a)mRNA 表达,以及调心方对 AD 大鼠上述指标变化的影响,并与 Donepezil 治疗组比较.结果:模型大鼠脑组织氨基酸递质含量和 NMDAR(NR1a和NR2a)mRNA 表达高于正常对照组,而线粒体呼吸链细胞色素氧化酶活性则显著下降;调心方对上述各项指标有不同程度的纠正作用.提示调心方可以通过纠正 AD 模型鼠脑组织呼吸链氧化酶活性和氨基酸递质的异常变化,这可能是该方防治 AD 的机理之一.
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树鼩脑缺血时海马微环境与血脑屏障通透性改变的可能机制
目的 观察树鼩血栓性脑缺血时海马血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的变化,并探讨其与微环境相互作用的可能机制.方法 通过光化学反应诱导树鼩血栓性脑缺血模型,采用单泵等速微灌流系统及荧光分光法检测脑缺血后4、24及72 h海马细胞外液异硫氰基荧光素标记的葡聚糖(fluorescein thiocarbamoyl dextrans,FITC-D)含量及血浆FITC-D的清除率(Clearance rate of FITC-D,Cf),Cf的高低反映海马BBB的通透性.用高效液相色谱技术检测海马灌流液的氨基酸递质水平,并观察缺血海马微血管超微结构.结果 树鼩血栓性脑缺血后4 h海马BBB通透性开始升高,缺血24 h为明显,Cf=(0.526±0.130)μl(P<0.01),72 h通透性有所恢复.脑缺血后24 h海马细胞外Glu及GABA水平明显升高,分别为(5.71±0.39)μmol·L-1和(3.81±0.14)μmol·L-1,均具有统计学意义(P<0.01).海马微血管超微结构观察显示星形胶质细胞肿胀,毛细血管周围水肿形成.结论 脑缺血可导致海马BBB通透性增高,而海马微环境紊乱对BBB通透性具有促进作用.
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舒络粉针对脑缺血大鼠氨基酸及其受体mRNA表达的影响
目的 研究舒络粉针对脑缺血大鼠海马区氨基酸含量和兴奋性氨基酸受体mRNA表达的影响.方法 采用线栓法制成脑缺血模型,按其神经行为学进行分组.应用高效液相检测海马区脑匀浆谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)含量;应用RT-PCR法研究舒络粉针对Glu受体-NMDARI mRNA表达的影响.结果 舒络粉针能降低Glu含量、升高GABA含量,下调NMDAR mRNA的表达.结论 舒络粉针可以抑制兴奋性氨基酸(EAA)的过量堆积、增加抑制性氨基酸(IAA)的含量而发挥抗神经元损伤的作用,其部分机理是与下调NMDAR的mRNA的表达有关.
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孕酮对大鼠吗啡位置偏爱效应及氨基酸递质水平的影响
目的:观察孕酮对吗啡位置偏爱效应及脑内氨基酸类神经递质水平的影响.方法:采用大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型,高效液相色谱一电化学法测定大鼠伏隔核及腹侧被盖区中的谷氨酸(GLU)和7-氨基丁酸(GABA)的含量.结果:吗啡可诱导大鼠产生稳定的CPP效应;孕酮本身不产生CPP效应,但能抑制吗啡诱导的CPP效应.与对照组比较,吗啡诱导的CPP形成时,大鼠伏隔核中的GLU、GABA水平和VTA中的GLU水平均显著降低(P<0.05).与吗啡组比较,合用孕酮均可使大鼠伏隔核中的GABA水平显著升高(P<0.01).结论:孕酮可有效抑制吗啡诱导的CPP效应,其机制可能与阻止吗啡降低伏隔核GABA的水平有关.
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递质性氨基酸在缺血性脑血管病患者血浆中的变化及临床意义
目的 探讨递质性氨基酸变化在老年人缺血性脑血管病患者中的临床意义.方法 应用高效液相色谱法(HPLC)测定66例老年人缺血性脑血管病患者和35名正常老年人血浆中兴奋性和抑制性氨基酸.结果 在脑缺血急性期,血浆兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)水平分别为:(91.71±15.77)和(22.32±9.45)μmol/L,与正常对照组相比明显升高(P<0.01),两者在恢复期降至正常水平.血浆抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)在脑缺血急性期也显著升高(P<0.05),分别为:(3.15±1.21)、(96.33±20.21)和(301.44±58.33)μmol/L,GABA在恢复期有所下降,而Gly、Ala未见明显下降.结论 缺血性脑血管病患者血浆递质性氨基酸的水平可反映脑组织氨基酸递质的变化,与老年人缺血性脑血管病发生、发展、预后相关.
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柴胡桂枝汤挥发油对脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为和氨基酸递质影响
目的 探讨柴胡桂枝汤挥发油对脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为和氨基酸递质的影响.方法 采用不同浓度柴胡桂枝汤挥发油对脆性X综合征基因敲除小鼠小鼠进行处理,分析了柴胡桂枝汤挥发油对小鼠旷场行为和氨基酸递质的影响.结果 未用药的WT组和KO组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显高于WT组小鼠.随着柴胡桂枝汤挥发油浓度的增加,KO和WT小鼠的平均速度、运动轨迹及穿越中央格次数均逐渐降低.WT空白组小鼠脑组织中γ-氨基丁酸水平和甘氨酸明显降低,而谷氨酸水平则明显升高,此差异有统计学意义:与此同时wt空白组小鼠与WT用药组小鼠比较,WT空白组小鼠脑组织中谷氨酸水平明显高于WT用药组(P＜0.05)KO空白组小鼠与KO对照组小鼠比较,KO空白组小鼠脑组织中γ-氨基丁酸水平明显降低,此差异有统计学意义；与此同时KO空白组小鼠与KO用药组小鼠比较,KO空白组小鼠脑组织中谷氨酸水平明显高于KO用药组.结论 柴胡桂枝汤挥发油能够有效地逆转脆性X综合征基因敲除小鼠旷场行为,其机制可能与柴胡桂枝汤挥发油降低兴奋性氨基酸/抑制性氨基酸的比值有关.
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牛磺酸及微量营养素对大鼠视觉感受器氨基酸递质影响的研究
目的:探讨牛磺酸及微量营养素的干预,能否通过调节视觉系统氨基酸类递质的含量变化,进而影响视觉信号传递及视功能.方法:Wistar大鼠随机分为三组,即对照组 (正常饲料组),实验1组(5倍需要量组)和实验2组(10倍需要量组),喂养3周后,每组动物再随机分为光照组和暗适应组(平均照度为3.03LX),以正常饲料喂养72h,大鼠活杀取眼球和外侧膝状体做分析测试.结果:暗适应条件下大鼠眼球苏氨酸、丝氨酸、甘氨酸、色氨酸、脯氨酸及谷氨酸,眼球和外侧膝状体GABA含量较光照条件下明显升高;营养干预后,眼球、外侧膝状体内上述氨基酸含量增加,其中以光照条件下变化为明显.结论:不同光适应状态下,眼球和外侧膝状体内游离氨基酸组成和含量是不同的,提示上述氨基酸可能参与视觉信号传导的调节.营养干预可通过影响眼球、外侧膝状体游离氨基酸含量,进而对视觉信号传导及视功能产生影响.
