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FMR1基因CGG重复序列多态性与不明原因早期自然流产的相关性研究
目的 探讨脆性X智力障碍基因1(FMR1)基因CGG重复序列与不明原因早期自然流产发病机制的相关性.方法 收集2015年5月1日至2018年4月1日在北京妇产医院计划生育科就诊的难免流产或需行清宫操作的2000例患者为自然流产组;同期在北京妇产医院产科就诊的1480例顺利分娩女性为对照组.两组患者均于孕早期或孕中期抽取外周血,提取基因组DNA,应用FMR1基因Amplide X检测技术进行FMR1基因CGG重复序列数检测.比较两组CGG重复序列情况并加以分析. 结果 (1)所有对象的FMR1基因检测未检出全突变病例;自然流产组中CGG重复大频率等位基因n=30(32.95％),其后依次是29(31.15％)、36(15.60％)、31(5.85％);对照组CGG重复大频率等位基因为n=30(33.24％),其后依次为29(25.47％)、36(14.73％)、31(8.38％).自然流产组及对照组CGG重复位点均数比较无显著性差异[(29.33±5.19) vs.(28.73±6.37)](P＞0.05).(2)自然流产组FMR1基因中间型携带率为1∶ 222,对照组1∶247,组间比较无显著性差异(P＞0.05).自然流产组的脆性X综合征前突变携带频率(1∶400)显著高于对照组(1∶740)(P＜0.05). 结论 FMR1基因CGG重复序列前突变与不明原因早期自然流产可能存在相关性.
关键词： FMR1基因 脆性X综合征 CGG重复序列多态性 自然流产 -
脆性X智力低下蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
目的:在大肠杆菌中对脆性X智力低下蛋白(FMRP)进行重组表达,获得高产量及高纯度的可溶性重组蛋白.方法:以人脑cDNA文库为模板,PCR扩增FMR1基因后将其克隆至融合表达载体pGEX - 6P -1中,重组载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3) pLysS,并用IPTG进行诱导表达.应用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和层析纯化GST - FMRP融合蛋白,并以SDS - PAGE电泳和Western blot对融合蛋白的表达进行检测.结果:亲和纯化后的融合蛋白经FMRP及GST单抗分别进行Western blot鉴定为GST - FMRP融合蛋白.结论:大肠杆菌中FMRP ISO10的重组表达产量高,纯化得到可溶性重组蛋白,为FMRP抗体的制备及FXS检测试剂盒的开发奠定基础.
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脆性X综合征的产前基因筛查与诊断
目的 对脆性X综合征进行产前基因筛查与诊断.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对32例孕妇及其胎儿的脆性X基因(CGG)n重复序列进行检测,同时采用PCR扩增牙幼基因对胎儿性别进行鉴定.结果 在32例孕妇及其胎儿中,检出1例孕妇为前突变携带者,1例男性胎儿为脆性X综合征患者.结论 采用PCR扩增脆性X基因(CGG)n重复序列,结合扩增牙幼基因进行性别鉴定,可对脆性X综合征进行产前筛查与诊断.
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一种脆性X综合征新检测方法的应用及探讨
目的 建立一种更快捷、准确、简便的检测脆性X综合征的方法.方法 用传统的基因组酶切-PCR法与TP-PCR法同时对26例可疑患儿进行基因检测.结果 基因组酶切PCR法共检测4例男性患者,其余均未见异常;TP-PCR法不仅检测出4例男性患者,且检测出1例女性携带者.结论 TP-PCR法是一种准确、快速、简便和相对价廉的方法,可以快速筛查脆性X综合征的基因诊断方法.
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氯化锂对FMR1基因敲除小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用
目的 探讨糖原合成酶激酶3( GSK3)抑制剂氯化锂对FMR1基因敲除(KO)小鼠的高架十字迷宫行为的干预作用及机制. 方法 给90只30日龄FMR1基因敲除小鼠连续5d腹腔注射不同剂量的氯化锂,用药第6天进行高架十字迷宫行为学实验,通过录像机录像,然后用Smart软件分析录像,观察能否改善KO鼠的高架十字迷宫的表型；同时通过免疫印迹技术检测KO及野生型(WT)鼠的海马和皮层中GSK3β和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的变化. 结果 在高架十字迷宫实验中,与WT组小鼠比较,KO组小鼠的运动性、兴奋性、探索性明显增强,且KO组小鼠在开放区域的活动时间、次数以及路程均明显高于WT组.KO鼠用氯化锂后,在开放区域的活动时间、次数以及路程均减低,差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫印迹实验结果显示,KO鼠p-GSK3β表达比WT鼠少；用氯化锂后,KO鼠p-GSK3β表达增加.WT鼠用氯化锂后,开放区域活动时间、次数以及路程有较少改善,p-GSK3β表达也有增加.未使用氯化锂的KO鼠与WT鼠相比,总GSK3β表达无明显差异,KO鼠和WT鼠使用氯化锂后,总GSK3β无明显改变,P＞0.05. 结论 GSK3β的抑制剂氯化锂能改善KO鼠的高架十字迷宫表型,对KO鼠有治疗作用,其机制可能与氯化锂导致的p-GSK33表达增加有关.
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FMR1基因敲除小鼠海马组织中microRNA-125b和microRNA-132的表达
目的 检测FMR1基因敲除小鼠海马组织中microRNA-125b(miR-125b)和miR-132表达水平,探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)缺失是否通过改变其转录后表达影响树突棘发育.方法 取FVB近交系雄性1周龄FMR1基因敲除型(K0)和同龄野生型(WT)小鼠各3只,取海马组织标本,应用microRNA芯片技术和荧光定量实时PCR检测miR-125b和miR-132的表达.结果 microRNA芯片检测显示,1周龄WT与KO小鼠海马组织miR-125b和miR-132的荧光值比较,差异无统计学意义(miR-125b:4 919.295±431.981比4 997.578±141.402;miR- 132:244.289±31.125比238.517±62.275,均P＞0.05)；荧光定量实时PCR检测显示,miR-125b和miR-132的相对表达量差异亦无统计学意义(miR-125b:11.45±0.32比11.55±0.43；miR- 132:18.28±0.34比18.50±0.40,均P＞0.05).结论 脆性X综合征树突棘发育不良与miR-125b和miR-132的转录后表达水平无关.
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氯化锂改善脆性X染色体智力低下基因1敲除小鼠的旷场行为
目的 观察氯化锂是否可以改善脆性X染色体智力低下基因1(FMR1)敲除小鼠的旷场异常行为及探讨其可能机制.方法 4周龄FMR1基因敲除小鼠(KO)和野生型小鼠(WT)各90只,按随机数字法各分为对照组(生理盐水)、氯化锂30、60、90、120、200 mg/kg组共6组,每组15只.氯化锂组小鼠连续5d腹腔注射氯化锂.观察对照组和氯化锂组KO与WT小鼠总运动长度、总跨格次数、中央区活动时间以及中央区进入次数等旷场实验行为的差异.采用免疫印迹观察氯化锂对KO与WT小鼠海马和皮层的糖原合酶激酶(GSK)3β和磷酸化(P)-GSK3β的影响.结果 对照组中KO小鼠的总运动长度、总跨格次数、中央区活动时间、中央区进入次数均比WT小鼠多(均P＜0.05).与对照组比较,氯化锂5个剂量组KO小鼠旷场实验总运动长度、总跨格次数、中央区活动时间、中央区进入次数均有明显减少(均P＜0.05);而WT小鼠用药后总运动长度和中央区活动时间在氯化锂90、120、200 mg/kg剂量组低于对照组(均P＜0.05),总跨格次数在氯化锂达到200 mg/kg剂量时才较对照组减少[(75.73±5.12)次比(125.73±9.24)次,P＜0.05],中央区进入次数则在氯化锂5个剂量组均低于对照组(均P＜0.05).对照组KO小鼠皮层和海马的GSK3β表达量与WT小鼠比较差异没有统计学意义;而P-GSK3β表达量比WT小鼠少(均P＜0.05).氯化锂组KO小鼠皮层和海马GSK3β表达与对照组比较差异没有统计学意义,而皮层P-GSK3β的表达在氯化锂120、200 mg/kg组高于对照组(均P＜0.05),海马P-GSK3β的表达在氯化锂30 ～ 200 mg/kg 5个剂量组均高于对照组(均P＜0.05).氯化锂组WT小鼠皮层和海马GSK3β和P-GSK3β的表达与对照组比较差异均没有统计学意义.使用相同剂量氯化锂的KO小鼠皮层和海马P-GSK3β表达比WT小鼠少(均P＜0.05),而GSK3β表达差异没有统计学意义.结论 氯化锂可以改善FMR1基因敲除小鼠的旷场异常行为,其机制与氯化锂导致的P-GSK3β的表达增加有关.
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30日龄脆性X基因敲除小鼠的被动回避行为观察
目的 观察30日龄的脆性X基因(Fmr1)敲除小鼠(KO鼠)的被动回避行为.方法 选取Fmr1基因敲除型(KO)纯合子(-/-)及其野生型(WT)纯合子(+/+)FVB近交系小鼠30日龄各15只,采用PCR鉴定实验动物KO鼠和WT鼠的基因型,进行2d的被动回避行为的避暗和跳台实验,比较2组小鼠电击次数和潜伏期时间.结果 避暗实验中,第1天KO鼠的电击次数为(8.28±0.50)次,与WT鼠(7.10±0.46)次相比显著增多(P＜0.05)；潜伏期时间虽增加但差异无统计学意义.第2天KO鼠的电击次数及潜伏期时间与WT鼠相比,差异均无统计学意义.KO和WT鼠第1天与第2天的潜伏期和电击次数相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).跳台实验中,第1天KO鼠的潜伏期为(94.96±10.56)s,比WT鼠(135.73±12.17)s明显缩短(P＜0.05)；而电击次数为(1.81±0.31)次,比WT鼠(0.67±0.13)次明显增多(P＜0.05).第2天KO鼠的电击次数及潜伏期时间与WT鼠相比,差异也无统计学意义.第1天WT鼠的电击次数与第2天相比,差异无统计学意义,潜伏期则低于第2天(P＜0.05)；而第1天KO鼠的潜伏期和电击次数与第2天相比,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 30日龄Fmr1基因敲除小鼠存在认知功能障碍.
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Fmr1基因敲除小鼠海马组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的表达
目的 检测4周龄Fmr1基因敲除(KO)小鼠海马组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达.方法 使用PCR技术选取4周龄Fmr1 KO小鼠和野生型(WT)小鼠各20只,免疫印迹法检测小鼠海马组织中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达.结果 免疫印迹显示,Fmr1 KO小鼠海马组织mTOR、p-mTOR相对表达量较WT小鼠均显著增加,差异具有统计学意义(均P<0.05).结论 海马组织mTOR表达增加可能与Fmr1 KO小鼠的脆性X综合征发病有关.
关键词： 脆性X综合征 基因敲除 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 FMR1 -
采用高分辨多重聚合酶链反应方法对四个脆性X综合征家系的产前基因诊断和遗传咨询
目的 对疑有脆性X综合征(fragile X syndrome,FXS)家族史的孕妇家系成员进行脆性X智力障碍1(fragile X mental retardation,FMRI)基因诊断,进而对FXS高风险孕妇进行产前诊断和遗传咨询. 方法 对2014年8月至2016年6月在北京大学第一医院妇产科遗传咨询门诊就诊的4例孕妇及其家系中拟诊或确诊为FXS的4例患者和2例携带者取静脉血,提取DNA,用Amplide X试剂盒检测FMR1的CGG重复次数.对3例FXS高风险孕妇,行绒毛膜或羊膜腔穿刺后,行染色体核型分析和FMR1的CGG重复次数分析. 结果 4个家系中均有FMR1CGG重复扩增突变引起的FXS患者.孕妇1、3和4为前突变携带.孕妇2不携带CGG异常扩增的等位基因,但其表兄一条X染色体FMRI CGG重复次数＞200次.孕妇l和4羊膜腔穿刺羊水染色体检查结果示胎儿不携带CGG异常扩增,继续妊娠.孕妇2的胎儿不存在FXS高风险,继续妊娠.孕妇3行绒毛膜穿刺后,绒毛染色体检查显示胎儿染色体核型为47,XY,+21,同时FMR1基因CGG全突变,经遗传咨询后引产. 结论 有FXS高风险的孕妇应进行产前基因诊断和遗传咨询,避免患儿出生.有FXS家族史的家族成员应进行FMR1携带者检测.
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脆性X综合征二例CGG重复序列及甲基化分析
目的 比较脆性X综合征男性胎儿不同组织中CGG重复扩增和甲基化情况.方法 分别于2013年8月、2012年5月采集1例全突变和1例前突变/全突变嵌合23周终止妊娠男性胎儿的不同组织样本,并提取基因组DNA.联合高GC含量PCR和甲基化敏感Southern印迹技术,测量各组织中CGG重复数、分析甲基化水平,并通过实时PCR和Western印迹分析FMR1表达情况.结果 两例胎儿各组织间CGG重复数目一致,但嵌合胎儿各组织中CGG重复甲基化情况不同,1例脑、皮肤、睾丸和肾组织,均有1个约为540个CGG重复的主要全突变条带,完全甲基化.另1例脑区、皮肤、睾丸、肺、胃、肠道、肝、肾、心脏以及外周中血均检测到160、470和1 100个CGG重复的3条主要条带.检测出脑组织中前突变比例低,相应FMPR表达少.结论 明确了CGG重复扩增和甲基化的组织异质性.基于嵌合胎儿母亲为全突变,推测母源全突变CGG重复在三胚层分化前缩减.
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代谢性谷氨酸受体在脆性X综合征树突棘发育中的作用
目的 探讨代谢性谷氨酸受体-Ⅰ(mGluR-Ⅰ)在脆性X综合征发病中的作用和mGluR-Ⅰ拮抗剂治疗的机制.方法 培养FMR-1基因敲除小鼠(KO)和野生(WT)小鼠海马神经元,给予mGluR-Ⅰ激动剂和拮抗剂进行处理,Western-Blot法检测处理前后脆性X智力低下蛋白(FMRP)和微管相关蛋白1B(MAP1B),共聚焦显微镜观察树突棘的长度和密度. 结果 KO小鼠海马神经元树突棘长度(1.32±0.79)和MAP1B含量显著高于WT小鼠(1.00±0.62).mGluR-Ⅰ激动剂干预后,KO和WT小鼠树突棘长度(1.60±0.88和1.33±0.80)和MAP1B均显著增加.mGluR-Ⅰ拮抗后,KO小鼠树突棘长度(0.95±0.57)和MAP1B均显著降低,在WT小鼠未见明显变化. 结论 脆性X综合征模型鼠由于缺乏FMRP的负性调节作用,导致mGluR-Ⅰ激活的MAP1B过度表达,可能是树突棘异常的主要原因.mGluR-Ⅰ拮抗剂逆转树突棘缺陷可能参与治疗机制.
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脆性X综合征的发病机制及诊治研究进展
随着中国二孩政策的全面放开,高危妊娠日益增多,出生缺陷发生率也随之升高.除环境因素外,遗传因素是导致出生缺陷的另一常见原因,尤其是染色体异常.脆性X综合征是一种X染色体连锁不完全显性遗传疾病,发病率仅次于唐氏综合征,常表现为遗传性智力障碍和自闭症等多系统疾病.作为导致智力障碍的第二大原因,其主要由脆性X染色体智力低下基因1中三核苷酸重复序列(CGG)n结构扩展的动态突变,导致其编码的脆性X智能低下蛋白表达缺失或严重减少引起.脆性X综合征的诊断主要依靠临床表现和基因检测,目前尚无有效治疗方法,未来应进一步研究其靶向治疗.
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家族性智力低下蛋白的研究进展
脆性X综合征是一种发病率仅次于唐氏综合征的人类遗传性智力低下疾病,其发病率在男性群体为0.04%～0.08%,在女性群体为0.02%～0.06%.
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脆性X综合征基因型和表型关系的研究
脆性X综合征在遗传性智力低下中是常见的一种.其表型复杂多变,包括认知障碍、体格异常、以及精神行为异常等.本文对脆性X综合征的基因型与表型之间的关系及其基因影响认知功能的基础研究进行综述.
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脑灵汤及其萃取物对脆性X综合征的作用及机制的研究
目的:研究脑灵汤及其萃取物对脆性X综合征的作用.方法:选择Fmr1基因敲除小鼠50只,其中空白组、溶媒组、挥发油组(A组)、皂甙组(B组)、水溶物质组(C)组各10例,空白组使用健康的Fmr1基因敲除小鼠,其他四组选用抑制GSK-3建模,A、B、C组分别使用脑灵汤萃取的挥发油、皂甙和水溶物进行颈后肌肉注射治疗.比较五组小鼠的行为学结果.结果:水迷宫、AGS test及旷场实验中观察组3组小鼠表现虽然比对空白组有一定的差距,但较溶媒组出现了较明显的改善.结论:脑灵汤及其萃取物对小鼠抑制GSK-3模型的脑功能恢复有一定的疗效.
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脆性X综合征产前诊断研究现况
脆性X综合征(FXS)属X连锁半显性遗传,女性携带者无临床症状,发病风险逐代递增,目前没有理想治疗方法,产前诊断是遏制该病在人群中扩散的有效措施.对母儿传递机制的深入研究可能为产前诊断、优生优育开辟一条新途径.
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脆性X智力低下蛋白致病机制研究进展
脆性X智力低下蛋白(FMRP)是X染色体长臂脆性X智力低下1(fmr1)基因编码的一种多功能mRNA结合蛋白,其结合并调控神经元胞质内多种mRNA的靶向转运与翻译过程,调控突触部位多种功能蛋白的表达.
关键词： 脆性X综合征 脆性X智力低下蛋白质 综述文献 -
脆性X综合征一家系报道
患者,男,7岁,因智力低下和语言障碍就诊.患儿系第2胎,足月顺产,发音能力与同龄儿童相比明显落后,只能说简单语言,头大,脸长,大耳廓,厚唇,行为异常、多动,注意力不集中,易冲动,脾气暴躁,打人毁物,不愿与其他小朋友相处,胆小.父母非近亲结婚.
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伴癫痫发作脆性X综合征1例
1 临床资料患者,男,23岁,因重度智力低下来我院就诊.体格检查:身高168 cm,体重65 kg.长脸,嘴厚唇,鼻梁下部隆起,额弓高,大耳,耳轮延伸至耳廓部,下额突出,阴茎和睾丸大,无腋毛.行为异常,注意力不集中,性情孤僻,眉头紧缩,面目呆板,不合作,常外出游走.发音缺陷,语言障碍,答非所问,缺乏与人交往的能力,在监护下可简单劳动.有间断性癫痫发作.父母非近亲结婚,三代家系中未发现类似患者.
