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人极低密度脂蛋白受体基因CGG重复序列多态性的检测
极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)基因5'非编码区起始密码子上游19bp处存在CGG三核苷酸重复序列.文献报道,一般正常人中该基因CGG的重复次数为5～11次,呈多态性分布,且有民族差异.目前尚无我国人群的资料.为了解中国汉族人群VLDL-R基因CGG重复序列的分布情况,采用聚合酶链反应(PCR)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染等技术,对湖北地区160例正常汉族人的该重复序列进行了分析,共检出重复次数分别为5、8、9及11的4种等位基因和5/5、5/8、8/8、8/9、9/9、5/9、8/11及5/11等八种基因型.VLDL-R基因CGG重复序列在中国汉族人及其他国家人群中的分布不尽相同.
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脆性X综合征二例CGG重复序列及甲基化分析
目的 比较脆性X综合征男性胎儿不同组织中CGG重复扩增和甲基化情况.方法 分别于2013年8月、2012年5月采集1例全突变和1例前突变/全突变嵌合23周终止妊娠男性胎儿的不同组织样本,并提取基因组DNA.联合高GC含量PCR和甲基化敏感Southern印迹技术,测量各组织中CGG重复数、分析甲基化水平,并通过实时PCR和Western印迹分析FMR1表达情况.结果 两例胎儿各组织间CGG重复数目一致,但嵌合胎儿各组织中CGG重复甲基化情况不同,1例脑、皮肤、睾丸和肾组织,均有1个约为540个CGG重复的主要全突变条带,完全甲基化.另1例脑区、皮肤、睾丸、肺、胃、肠道、肝、肾、心脏以及外周中血均检测到160、470和1 100个CGG重复的3条主要条带.检测出脑组织中前突变比例低,相应FMPR表达少.结论 明确了CGG重复扩增和甲基化的组织异质性.基于嵌合胎儿母亲为全突变,推测母源全突变CGG重复在三胚层分化前缩减.
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不同民族人群FMR1基因CGG重复序列检测与分析
目的 检测和分析脆性X综合征致病基因FMR1 CGG重复序列在汉族和壮族人群中的多态性分布.方法 采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对1 060例汉族人(男280人,女780人)和283例壮族人(男85人,女198人)FMR1基因CGG重复序列进行分析,并用Southern印迹技术对结果进行了验证.结果 汉族人群中共检测到33种等位基因,其中CGG重复序列范围为6～43,壮族人群共检测到27种等位基因,CGG重复序列范围为6～57,两类人群中常见的等位基因分别为28和29.结论 应用PCR扩增技术进行了FMR1基因的大面积筛查,中国汉族和壮族人群中FMR1基因CGG重复序列变异分布略有差异.
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FMR-1基因中CGG重复序列扩增条件的优化
目的:优化PCR扩增条件,建立一种有效检测脆性X综合征的方法.方法:在常规PCR的基础上,采用耐高温酶替代法、碱基替代法,同时加入有机溶剂DMSO等,对表型正常的人群进行FMR1基因CGG重复序列检测.结果:改良PCR法可以提高GC富集区扩增效率,并取得了较好的效果.结论:建立了一种扩增FMR-1基因中CGG重复序列的可行方法.
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优化PCR体系结合毛细管电泳技术检测FMR1基因前突变与全突变
目的 通过优化PCR并结合毛细管电泳,建立高扩增效率、高分辨率的FMR1基因CGG重复序列异常扩增检测体系.方法 选择标准样本和经Southern印迹技术确定(CGG)n的正常、前突变、全突变男性和女性样本15例,进行PCR检测体系的优化.优化的PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳等多种方法进行结果比较.结果 经优化的PCR体系可以检测出(CGG)n大于260个拷贝的全突变男性和(CGG)n达到183个拷贝的前突变女性.毛细管电泳能够清晰分辨出相差1个CGG的两个等位基因,结果具有良好的可重复性.结论 该PCR检测体系大幅度提高了普通PCR方法的扩增效率和分辨率,明显降低了对于Southern印迹技术的依赖,可以作为临床筛查FMR1基因突变的首选方法.
