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2种骨切片硫堇-苦味酸染色法的比较
骨切片的染色法有多种,其中硫堇-苦味酸染色法是比较常用的染色方法,但书中及各实验室的染液配制及染色方法不尽相同[1~4],因此我们对2种硫堇染液和2种脱水、透明方法做了一些比较和探讨,以便选择一种效果较好的染色方法.
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台盼兰染色小鼠胚泡着床点的观察研究
本实验探讨用硫堇和台盼兰染料对妊娠4~5d小鼠进行活体染色以显示胚泡着床位点的可能性.研究结果:1.台盼兰可用作胚泡着床点的染色反应,具体方法是:尾静脉注射0.5%台盼兰0.3ml,10min后观察,而硫堇则无效;2.着床点数目在两侧子宫角内的分布有显著差别,左右子宫角内分别为6.40±1.64和4.80±2.40个;3.着床点的间距为2.25±0.87mm.
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水中微量锑(Ⅲ)的阻抑动力学光度测定法
目的 建立一种新的测定环境水样中微量锑的方法 .方法 在pH=10.50的NH3-NH4Cl缓冲溶液中,微量Sb3+对H2O2氧化硫堇的褪色反应具有强烈的阻抑作用,据此建立微量Sb3+的阻抑动力学光度测定法.结果该方法 的线性范围为0.004~0.40μg/ml,r=0.999 2,检出限为1.71×10-3μg/ml,RSD为1.4%~2.1%,回收率为96.2%~101.9%.结论 该方法 灵敏度高,操作简便快速,用于环境水样中微量锑的测定结果满意.
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疏松结缔组织铺片显示肥大细胞的一种新方法
疏松结缔组织铺片显示肥大细胞一直是组织学技术的难点之一.近年来我们通过反复探索实践,终于成功摸索出"肥大细胞硫堇-甲苯胺蓝染色法",结果十分理想.现报告如下.1 材料取小白鼠一只,断头放血,打开腹腔取出肠系膜,将其均匀地平铺在载玻片上,稍干燥后入甲醛-酒精(F-A)液固定24 h.F-A液配方:甲醛(37~40%)10 ml,无水乙醇80 ml,蒸馏水10 ml.
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脱钙骨冷冻切片硫堇-苦味酸染色方法
传统制作骨切片的方法是采用骨组织经过脱钙后进行火棉胶包埋切片,硫堇-苦味酸染色.火棉胶切片存在程序繁琐、周期长、切片较厚等缺陷[1].笔者采用冷冻切片法对脱钙骨进行切片,然后硫堇-苦味酸染色.结果显示,冷冻骨切片制作染色方法操作程序简便,制作周期短,染色效果理想,适用于组织学实验教学中切片的大量制作.在与骨相关的科学研究领域也有一定的应用价值.
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一种应用冷冻切片显示骨细胞的Schmorl氏硫堇-苦味酸染色法
骨组织切片制作方法可分为硬骨磨片、石蜡包埋切片、冷冻切片等几种方法[1].硬骨磨片由于骨质坚硬,磨制费时,不适宜大量制作教学切片,石蜡包埋切片,该法存在过程复杂、费时(1个月左右),而且切片染色背景深浅不一,从而影响结果的观察和分析.
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人类X染色质标本制备实验方法的改进
人类X染色质标本制备的实验是<医学遗传学>教学中的一个重要实验内容.在临床应用中较广泛,可用于检查人的性染色体是否正常及胎儿性别鉴定.为了简化实验操作、缩短实验时间、提高实验成功率.我们进行了改进:(1) 实验过程由原来的间接滴片改为现在的直接涂片;(2) 染色材料由原来用硫堇染色改为现在的甲苯胺兰染色.经过几年来的实验教学证明教学效果良好,现报告如下:
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基于碳纳米管修饰的无酶型新型甲胎蛋白安培免疫传感器研究
目的 构建新型甲胎蛋白安培免疫传感器.方法 首先在玻碳电极(GCE)表面修饰一层羧基化碳纳米管(CNTs).然后利用带负电荷的DNA分子和带正电荷的硫堇之间的静电作用,层层自组装修饰硫堇以增强检测信号,然后利用硫堇的氨基固定纳米金,以便固定抗体,后利用牛血清白蛋白封闭未结合位点.结果 修饰的碳纳米管能够显著地提高电极的导电性,利用层层组装技术修饰了5层硫堇.在优化的条件下(pH 7.0,温浴时间25 min),制作的甲胎蛋白免疫传感器线性范围在0.5~25 ng/ml内,检测限0.02 ng/ml.结论 成功利用层层自组装技术构建新型基于碳纳米管修饰的无酶型甲胎蛋白安培免疫传感器,该传感器灵敏度高,特异性好,有望成为原发性肝癌早期诊断的新方法.
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NF-κB在脑缺血预处理上调GLT-1表达和诱导脑缺血耐受中的作用
目的:本实验旨在观察NF-κB在脑缺血预处理( CIP)上调GLT-1表达和诱导脑缺血耐受中是否发挥作用。方法:应用Western blot观察GLT-1和NF-κB p50蛋白表达;免疫共沉淀观察NF-κB p50/p65二聚体复合物的表达;电泳迁移率变动分析( EMSA)观察NF-κB DNA结合活性的变化;硫堇染色进行神经病理学评价。结果:在CIP诱导脑缺血耐受过程中,GLT-1表达上调。同时,NF-κB被激活,表现为NF-κB p50蛋白表达上调;NF-κB发生二聚体化,并由胞浆转位至胞核;NF-κB的DNA结合活性增强。 NF-κB的特异性抑制剂BAY 11-7082通过抑制NF-κB的活化来阻断CIP所诱导的脑缺血耐受及GLT-1表达上调。结论:NF-κB在脑缺血预处理上调GLT-1表达和诱导脑缺血耐受中发挥作用。
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自由基在肢体缺血预处理脑保护和p38 MAPK和ERK表达上调中的作用
目的:我们前期研究证实,肢体缺血预处理( limb ischemic preconditioning, LIP)能诱导大鼠的脑缺血耐受并且上调海马CA1区p38 MAPK和ERK的表达。然而,进行缺血预处理的肢体与遭受缺血打击的大脑相隔较远,由LIP启动的内源性保护信号如何作用于大脑尚不完全清楚。本研究旨在探讨自由基在LIP诱导的大鼠脑缺血耐受和p38 MAPK和ERK表达上调中的作用。方法:采用大鼠全脑缺血模型,硫堇染色观察神经病理学变化,免疫组化和Western blot观察p38 MAPK和ERK的表达。结果:硫堇染色结果表明,自由基清除剂DMTU能部分逆转LIP的脑保护作用, DMTU也部分阻断了LIP引起的p38 MAPK和ERK表达的上调。结论:自由基在肢体缺血预处理脑保护及p38 MAPK和ERK表达上调中发挥着重要的作用。
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尿胰蛋白酶原-2电流型免疫生物传感器的研究
目的:研制一种检测尿胰蛋白酶原-2 (Urinary Trypsinogen-2,TSG-Ⅱ)的新型电流型免疫生物传感器.方法:将Nafion吸附到玻碳电极表面,并通过静电吸附和共价键合作用将硫堇和纳米金进行层层自组装,然后通过形成的纳米金单层吸附TSG-Ⅱ抗体,后用辣根过氧化物酶封闭电极上的非特异吸附位点.结果:该免疫生物传感器对TSG-Ⅱ的响应特性良好,其线性检测范围为6.0~100μg/L;检出限为3.5μg/L.结论:该电流型免疫生物传感器具有灵敏度高、特异性好等优点,为建立一种检测TSG-Ⅱ新方法奠定了基础.
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大鼠中枢神经系统连续切片显示神经核团
大鼠中枢神经系统(CNS)连续切片是神经生物学教学重要的实习标本,它能显示大鼠神经传导通路、位置、走向及其上下左右邻里关系,尤其通过CNS连续切片的观察和思维联想,有助于学员建立完整的直观的CNS 的立位体形象.目前此类工作国内外研究较少,开展的工作也不多,有一些介绍连续切片制作方法,但多数局限于火棉胶切片,其过程相当繁琐,难以大量制作,且连续切片有一定困难.为此我室申请了一项校管理题,专门对制作方法进行研究,现就目前完成的工作介绍一下.材料和方法:1.健康成年Wistar大鼠,1%戌巴比妥钠腹腔注射麻醉,心脏穿刺10%Formalin灌注固定.取嗅脑至脊髓尾段,10%Formalin浸泡固定3d以上.2.按30%蔗糖比例加入蔗糖,浸泡3d,Leica恒冷箱切片机切片, 厚30μm.3.切片入蒸馏水,30min两次,入0.2%硫堇水溶液染5~10mi n,蒸馏水分化,室温自然干燥,二甲苯透明,Dpx封固.结果:大鼠CNS各段面切片神经元尼氏体呈紫蓝色,神经胶质细胞和其它细胞胞核呈淡蓝色.讨论:制片方法方面我们同时进行了石蜡包埋切片,切30μm厚片,效果不甚理想,进行火棉胶包埋切片,由于连续切片方面的问题也做得不好,唯有冰冻切片进行得很顺利,而且染色不掉片.染色方面我们选择硫堇染色,尼氏体呈鲜蓝色,背景对比好.要注意载玻片用蛋白甘油处理,稍稍多涂一些;冰冻切片放室温自然晾干,染色时间不宜过长.
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硫堇块染色法显示神经元尼氏体的体会
尼氏体也常被称为嗜染质,主要成分是核糖核酸(RNA)和蛋白质,易被碱性苯胺染料所染,硫堇就是常用的一种,但缺点是易褪色,给大量回顾性研究及教学都带来许多不便.为了解决这一问题,本实验用硫堇块染色法,经多次实验可免去脱水过程,使标本不易脱色,而且结果也很理想,适合制作大量的教学切片,制作简便,方法简单,而且可长期保存不易脱色.具体步骤介绍如下:选用猫脊髓、鼠大脑组织厚2mm,入4%多聚甲醛(0.1molPB 配制 pH7.4)固定液内固定一周.0.01molPBS(pH7.4)洗三次,各取3块脊髓、大脑组织块分别放入0.2%、0.5%、1%、2%、4%的硫堇水溶液内 ,50℃温箱内染色,分别于3d、5d、10d取出,入95%酒精脱色30min,入 100%酒精2次各1hr,二甲苯透明15min,入软蜡2hr,入硬蜡2hr,硬蜡包埋.切片5μm,展片后,二甲苯脱腊,中性树胶封片.结果:猫脊髓前角神经元胞质内的尼氏体及核仁清晰可见,呈紫蓝色.大脑皮质锥体细胞,海马齿状回锥体细胞及颗粒细胞胞质均呈紫蓝色.体会:1.几组实验结果对比发现用2%的硫堇水溶液浸泡5d,效果好.2.脱水时间必须短,可直接入95%酒精脱水,分色.3.脊髓切片5μm,大脑切片 6μm实验结果理想.4.此方法的优点是制作简便,石蜡切片后不需再染色,直接二甲苯脱蜡封片,所以同时也解决了脱水不干净,产生褪色的问题.
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初生牛脊髓神经细胞尼氏体硫堇——伊红染色法
尼氏体又称虎斑,是神经细胞的一种特殊结构,具有嗜碱性的特点易被碱性染料,如甲苯胺蓝、硫堇等着染.受染后呈块状(形如虎斑)或粒状.尼氏体分布在神经细胞除轴突之外的细胞质中,核周围颗粒较大 , 近边缘处较小而细长.尼氏体还可因生理状态的改变而变化,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映出神经细胞旺盛的功能状态;在神经元受损伤时尼氏体的数量可减少甚至消失 .因此取材时应尽量获取新鲜材料才能制作出满意的标本.材料与方法:1.取初生小牛脊髓,10%福尔马林固定24hr.2.流水冲洗12~24hr.3.常规脱水,石蜡包埋、切片.4.切片脱蜡到水,进入0.5%的硫堇水溶液中,染15~30min(37℃),冷却.5.蒸馏水洗.6.70%酒精分色(镜下控制),0.5%伊红(醇溶)复染.7.酒精脱水(95%,100%各2次).8.二甲苯透明,中性树胶封片.结果尼氏体呈紫红色,位于神经元胞体及树突中.讨论此染色法使脊髓灰质中神经元内的尼氏体清晰可辨.起到即可辨认器官又可同时观察细胞中特殊结构的效果,是一种显示尼氏体的优良方法.
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溴酸钾氧化硫堇催化褪色光度法测定痕量亚硝酸根
亚硝酸根广泛存在于水,土壤和蔬菜中,进入人体的胃后能与胺类反应生成致癌物质,在血液中与血红素生成正铁血红蛋白而使血红素失去运氧功能,对人体健康产生危害,因此,其分析方法的研究已受到高度重视.天然水和食品中亚硝酸根的测定主要用分光光度法,较经典的是重氮化偶联反应[1,2]和亚硝化反应[3,4],但灵敏度均不高;基于亚硝酸根对某些反应的催化作用还提出了一系列测定亚硝酸根的催化光度法[5,6],催化光度法是一种测定亚硝酸根的较灵敏方法.2005年10月试验发现,在稀盐酸介质中,溴酸钾氧化硫蓳的褪色反应因受亚硝酸根的催化而明显加快,建立了新的测定痕量亚硝酸根的方法.
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紫外分光光度法测定微量亚硝酸根
目的: 研究硫堇与亚硝酸根的反应,建立一个简单、灵敏、选择性高的微量NO-2的测定方法.方法: 用紫外分光光度法测定微量NO-2.结果: 在盐酸介质中,硫堇在近紫外区有一强吸收峰位于284 nm,与NO-2反应后284 nm处吸收峰下降,吸光度的变化与溶液中NO-2的浓度成正比,其线性范围在0~0.8 mg/L NO-2,摩尔吸光系数为ε284=2.9×104 L/(mol*cm).研究了反应的适宜条件,共存物质的影响,表明该测定方法具有良好的稳定性和选择性.结论: 用紫外分光光度法测定环境水中微量NO-2,结果满意.