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纳米磁珠富集处理临床标本在分枝杆菌培养中的初步应用
目的 以罗氏培养基作为培养检测介质,验证采用PEG600纳米磁珠富集临床标本中分枝杆菌的可行性.方法 采用PEG600纳米磁珠富集法、离心法(3000×g,20 min)和直接接种法3种方式处理94份临床标本(来源于南京市胸科医院2012年12月至2013年3月间门诊和病房的94例肺结核患者),在固体罗氏培养基上进行培养.比较3种方法的培养阳性率、污染率以及平均初生长时间.对于计数资料采用卡方检验进行统计分析,以Kolmogorov-Smirnov法检测正态性,非正态分布的计量资料采用Wilcoxon秩和检验进行分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 直接接种法、离心法、磁珠富集法的阳性率分别为29.79％(28/94)、43.62％(41/94)、41.49％(39/94);污染率分别为2.91％(3/103)、4.85％(5/103)、3.88％(4/103);平均初生长时间[中位数(上下四分位数)]分别为28(21,40)、21 (21,35)、21 (21,35)d.磁珠富集法、离心法阳性率均高于直接接种法,差异均有统计学意义(x2值分别为9.09、11.08,P值均＜0.01).磁珠富集法、离心法的初生长时间均短于直接接种法,差异均有统计学意义(Z值分别为3.983、-3.980,P值均＜0.01).离心法与磁珠富集法之间在阳性率与平均初生长时间上差异均无统计学意义(阳性率比较:x2=0.25,P=0.62;平均初生长时间比较:Z=0.557,P=0.577).结论 磁珠富集法在培养的阳性率与初生长时间上均优于直接接种法,与离心法所得结果相似;由于其对环境的污染概率小,易于批量处理,具备很好的临床应用前景.
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不同痰标本处理方法对结核分枝杆菌罗氏培养检测结果的影响
目的 分析采用简单法和离心法处理痰标本,以及采用离心法处理痰标本时不同离心条件对罗氏培养检测结果的影响.方法 收集2010年9-11月北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室进行细菌学检查的疑似结核病患者痰标本198份,其中涂片阳性的痰标本99份,涂片阴性的痰标本99份.同时应用简单法和离心法对198份痰标本进行罗氏培养；离心法培养时分别采用5种不同的离心条件:3000×g离心15 min、3000×g离心8 min、3000×g离心25 min、2000×g离心15 min、5000×g离心15 min.结果 任何一种方法培养阳性即认定标本培养阳性,198份痰标本中共有126份培养阳性,其中97份来自涂阳痰标本,29份来自涂阴痰标本；简单法的阳性率为93.65％(118/126),离心法高的阳性率为96.03％(121/126).简单法的平均初生长时间为(20±8.56)d,离心法(3000×g离心15 min)的平均初生长时间为(22±9.10)d,两者间差异有统计学意义(Z=-4.81,P＜0.001).在125份离心法培养阳性的标本中,3000×g离心15 min、3000×g离心8 min、3000×g离心25 min、2000×g离心15 min、5000×g离心15 min,5种不同离心条件下的培养阳性率分别为96.03％(121/126)、89.68％(113/126)、95.24％(120/126)、92.06％(116/126)和96.03％(121/126).结论 罗氏培养过程中,简单法的阳性率与离心法接近,但由于简单法操作简单、污染率较低,初生长时间较短,因而可能更符合临床的需要；应用离心法进行罗氏培养时,离心力或离心时间的变化可能会影响培养的阳性率.
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县级运送痰标本到地市开展基因芯片耐药检测的成本分析
目的 分析区县级结核病防治机构(简称“结防机构”)运送痰标本到地市开展基因芯片耐药检测的成本,为完善耐多药结核病患者发现策略提供数据基础.方法 选取中国不同地区3个具有代表性的项目点,包括江苏连云港,河南开封和重庆永川,收集2011年1月至2012年2月期间数据,采用简单法,根据运送次数、单次运输成本及运输标本数计算单位患者标本运输成本;采用简单法和时间-观察法对3个项目地区基因芯片检测成本进行分析.结果 自2011年1月至2012年2月,连云港、开封和永川三地单位患者运输成本分别为72.47元、84.67元和117.00元,其中运输成本与单次运输患者例数相关,其中单次运输患者例数较少的永川(1.71例/次,552/323)单位患者运输成本高,而单次运输患者较多的连云港(2.76例/次,712/258)单位患者运输成本低.此外,完成基因芯片检测的单位成本为141.56元,其中扩增占全过程总成本的69.0％(97.63元);其次为杂交,占总成本的11.9％(16.79元).在各试验过程中均以试剂、耗材及管理成本所占比例较高,分别占总成本的60.2％(85.26元)、17.5％(24.78元)和12.7％(18.00元).考虑到标本运输和基因芯片检测,完成1例患者检测的总成本约为230.84元,运输频次从每2周4次减少至每2周1次时,标本运输成本占总成本由33.5％降低为11.2％.结论 本研究表明,影响县级机构运送痰标本开展耐药结核病快速检测成本的主要因素包括单次标本运输例数和基因芯片价格.综合考虑运输成本和检测效果,运输频次为2周1次为宜.此外,标本转运开展结核病快速检测模式更适合于人口稠密的中东部地区.
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质量控制小组对提高结核科患者痰标本采集质量的作用
目的 探讨质量控制小组对提高结核科患者痰标本采集质量的作用.方法 2014年11月广州市胸科医院内科成立质量控制小组.质量控制小组采取建立患者痰标本采集流程和相关指引,加强对患者的健康教育,加强医护人员相关知识培训,普及护士对痰标本采集的规范操作和宣传教育要点,责任到人、分工细化、明确职责等措施.2014年8月1日至2014年10月31日质量控制小组成立前收治320例疑似肺结核患者,医嘱留痰2088份;2014年11月1日至2015年2月28日质量控制小组成立后收治的386例疑似肺结核患者,医嘱留痰2417份.比较质量控制小组成立前后痰标本采集率和合格率.应用SPSS 19.0统计软件进行数据分析,计数资料采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 质量控制小组成立前痰标本采集率为84.6％(1767/2088),痰标本合格率为86.3％(1525/1767);质量控制小组成立后痰标本采集率为95.0％(2295/2417),痰标本合格率为96.0％(2203/2295),两者痰标本采集率和痰标本合格率差异均有统计学意义(x2值=6.999和5.361,P值=0.008和0.021).结论 成立质量控制小组,对收集患者痰标本的工作过程进行严格的质量控制,能有效提高结核科患者痰标本的采集质量.
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四县(区)结核病防治机构固体培养能力建设调查
目的 评估固体培养试验在我国县(区)级结核病防治机构(简称“结防机构”)应用的可行性.方法 选取黑龙江省北林区和兰西县及湖南省湘潭县和岳阳县4个县(区)级结核病实验室,自2010年5月至2011年2月连续纳入2059例具有肺结核可疑症状的初诊患者,收集患者痰标本完成分枝杆菌涂片镜检和固体培养试验,按月统计涂阳培阴率和污染率.按照培养试验室内质量控制要求,初诊患者涂阳培阴率要求低于10％,污染率要求控制在2％～5％.结果 (1)全部患者涂片和培养阳性率分别为18.3％(376/2059)和26.6％(547/2059),差异有统计学意义(x2=129.2,P＜0.01).(2)北林区涂阳培阴率为16.5％(23/139),超过正常要求低于10％的水平.湘潭县和岳阳县培养污染率分别为5.6％(157/2800)和9.7％(252/2590),超过正常要求低于5％的水平.其余县(区)涂阳培阴率和培养污染率均处于正常范围.结论 4个县(区)级实验室初步具备了分枝杆菌固体培养试验能力.
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γ干扰素释放试验检测颈部淋巴结细胞悬液辅助诊断颈部淋巴结结核的初步报告
目的 评估γ干扰素释放试验(IGRA)检测颈部淋巴结细胞悬液对颈部淋巴结核的辅助诊断价值.方法 将2015年1月至2016年5月在新疆维吾尔自治区人民医院收治的48例颈部淋巴结肿大患者采用复合诊断标准分为颈部淋巴结结核组(21例),非颈部淋巴结结核组(27例),对48例患者的外周血和颈部淋巴结细胞悬液进行γ干扰素释放试验检测,运用SPSS 19.0软件进行数据分析,两组间斑点形成细胞(SFCs)个数的比较采用Mann-Whitney U检验,样本间率的比较采用χ2检验,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 IGRA检测颈部淋巴结细胞悬液和外周血的敏感度分别为90.48%(19/21)、95.24%(20/21),差异无统计学意义(χ2=0.00,P>0.05),颈部淋巴结细胞悬液和外周血的特异度分别为70.37%(19/27)、92.59%(25/27),差异有统计学意义(χ2=4.43,P<0.05).颈部淋巴结结核组中IGRA检测外周血和颈部淋巴结细胞悬液的SFCs中位数及上下四分位数[M(Q1,Q3)]分别为109(52,186)个、68(30,156)个,不同标本间检测的SFCs中位数差异无统计学意义(U=175.00, P>0.05).非颈部淋巴结结核组中IGRA检测外周血和颈部淋巴结细胞悬液的SFCs M(Q1, Q3)分别为0(0,18)个、0(0,3) 个,不同标本间检测的SFCs中位数差异无统计学意义(U=271.00,P>0.05).颈部淋巴结结核组的淋巴结细胞悬液SFCs明显高于非颈部淋巴结结核组的淋巴结细胞悬液SFCs,差异有统计学意义(U=45.00,P<0.05).结论 γ干扰素释放试验检测颈部淋巴结细胞悬液具有可行性,对颈部淋巴结结核的辅助诊断有一定的价值.
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提高急诊重症监护室患者痰标本送检率和阳性率的管理措施
目的 探讨提高急诊重症监护病房(emergency intensive care unit,EICU)患者痰标本送检率和阳性率的管理措施.方法 选取2015年7月至2016年2月入住新疆维吾尔自治区胸科医院EICU的肺部疾病患者206例.将2015年7月至10月的110例患者作为对照组,留取痰标本786例(份),采用早晨常规集中留取痰标本一次性送检的方法;将2015年11月至2016年2月的96例患者作为观察组,留取痰标本769例(份),通过全科护理人员系统学习留取痰标本知识、制定留取痰标本流程、医务人员(医生、护士、医技、护工)相互配合、护士长加强制度落实和流程监管等措施留取痰标本分次送检.两组均依照患者病情以患者自行咯出、气管插管吸痰、纤维支气管镜(简称“纤支镜”)吸痰3种方式采集痰标本,再依医嘱行痰涂片抗酸染色(简称“痰涂片”)、和(或)MTB培养、和(或)普通细菌培养的检测.实施4个月后,采用SPSS 17.0软件进行资料的统计和分析,两组患者痰标本送检率、不同检测方法采痰方式检出的阳性率、合格率的比较采用x2检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 观察组、对照组的痰标本送检率分别为80.5％(769/955)、55.2％(786/1423),差异有统计学意义(x2=4.86,P=0.027).两组采用痰涂片、MTB培养、普通细菌培养检测的阳性率均有提高[26.6％(115/432),19.7％(114/580);46.7％(50/107),34.1％(46/135);31.7％(73/230),21.1％(15/71)],差异均有统计学意义(x2=3.99,P=0.046;x2=4.48,P=0.034;x2=6.25,P=0.012).观察组和对照组患者不同方法(自行咯出、气管插管后吸出、经纤支镜吸出)采集痰标本的合格率[78.5％(386/492),60.0％ (332/553);97.8％ (175/179),91.7％(132/144);95.9％ (94/98),95.5％(85/89)]和阳性率[24.6％(121/492),14.2％(79/553);38.5％(69/179),37.5％(54/144);49.0％(48/98),47.1％(42/89]比较,患者自行咯出的合格率与阳性率差异均有统计学意义(x2合格率=4.51,P=0.033;x2阳性率=3.99,P=0.046),而气管插管及经纤支镜采集痰标本患者的合格率差异均无统计学意义(x2插管=0.70,P=0.404;x2纤支镜=0.20,P=0.654)和阳性率(x2插管=0.56,P=0.453;x2纤支镜=0.05,P=0.821).结论 在EICU通过实施一系列痰标本留取改进措施,有助于提高痰标本的送检率和检测阳性率.
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两种不同缓冲系统的多聚甲醛对鼠脑组化结果的影响
哺乳动物大脑皮质的发育长期以来都是发育生物学研究的焦点和热点.目前用于研究大脑发育的组织化学技术主要有原位杂交技术和免疫荧光染色,而这些技术均需要前期的标本制备,尤其是取材后的组织固定.组织固定的主要目的是尽可能保持组织内待检测物的原位性、完整性和免疫活性[1],所以组织固定的效果往往决定着组化实验终结果的成败.4％多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)因其优良的理化性质成为目前固定标本组织的常用固定剂之一[2-3],而关于其配制方法,尤其是用于溶解它的溶剂的选择目前还未有定论.本研究以此问题为出发点,比较不同溶剂的4％PFA对鼠脑组织的固定效果,探讨佳的组织固定方法.
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标本制备及切片染色中GS套液的应用体会
随着人类对健康的关注程度不断增加,我国对环保的要求也日趋严格.目前各种实验室的环保问题已经提到了议事日程,其中也包括病理学实验室.尽量减少化学品对人类的危害,直接有效的办法就是使用环保试剂,但目前国内环保产品的种类还很少,能选择的范围也十分有限,而国外环保产品价格很贵,对多数实验室而言非常奢侈.现将我们实验室使用GS套液的体会,报告如下.
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保乳手术标本定位全部取材病理检查的意义
目的 探讨保证保乳手术标本切缘阴性的病理取材诊断方法及意义.方法 (1)术中对145例保乳手术标本进行定位全切片检查,79例进行选择性取材检查;(2)术后对84例保乳手术标本进行定位全切片检查,226例进行选择性取材检查;(3)对两组手术病例进行随访观察.结果 (1)术中定位全切片取材切缘阳性检出率(24.1%,35/145)明显高于选择性取材(6.3%,5/79),差异具有统计学意义(P＜0.01);(2)术后定位全切片取材切缘阳性检出率(29/84,34.5%)亦明显高于选择性取材(12.0%,27/226),差异具有统计学意义(P＜0.01);(3)经2～46个月随访,保乳手术标本选择性取材病例中有3例分别于术后6、15、28个月局部复发,定位全切片取材病例无复发.结论 定位全切片取材和诊断可以降低保乳手术标本切缘阳性的漏诊率,并能够定位切缘阳性的部位,对减小二次手术和术后复发的风险,保证保乳手术的成功具有重要作用.
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靶向二代测序检测结直肠癌肠镜活检标本的可行性分析
目的 评估结直肠癌患者肠镜活检标本中的DNA是否足以进行基于扩增法建库的二代测序(NGS)检测以得到合格、准确的基因分析结果并对甲醛固定石蜡包埋(FFPE)小组织行NGS检测提出质控建议.方法 依据标本纳入标准收集2012年1月至2016年6月四川大学华西医院和北京大学第三医院组织病理学确诊的结直肠癌109例患者的肠镜活检FFPE标本109份,提取DNA,采用OncoAimTMGene Panel在Miseq平台进行基于扩增法建库的靶向NGS检测,分析DNA及文库产量、测序数据质量、检测成功率.利用常规检测方法验证NGS的检测结果.后,比较其中12个内镜活检标本与其相应手术根治石蜡标本的 NGS 检出突变结果以评估检测结果的一致性.结果97.2%(106/109)的肠镜活检FFPE标本可得到足量用于NGS的DNA并产生合格的测序文库,测序深度中位数为848×,均一度中位数为95.7%,测序数据合格率为95.4%(104/109). NGS和临床常规检测的一致性为100.0%. 12对内镜活检与手术根治配对标本结果显示,临床可行性突变( KRAS、BRAF)的检测结果全部一致,而一致突变的变异频率均有明显差异.结论 合理质控的条件下,肠镜活检FFPE标本可用于靶向NGS检测,得到合格、准确的突变检测结果以指导靶向治疗.
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肺腺癌活检组织、胸水及血液中表皮生长因子受体基因突变检测的比较分析
目的 比较活检标本、胸水标本和血液标本在肺腺癌患者表皮生长因子受体( EGFR)基因检测方面的差异,分析EGFR突变与患者临床表征之间的相关性.方法 收集新疆医科大学第一附属医院2015年6 至12 月原发性肺腺癌临床ⅢB 期及Ⅳ期的患者标本100 例.患者中男性43例,女性57例;年龄40~88岁,平均66岁.通过荧光定量PCR方法检测100例肺腺癌肿瘤标本,分为两组,每组50例;其中一组检测活检标本和血液标本;另一组检测胸水标本和血液标本,检测是否具有EGFR基因突变.结果 活检标本的阳性率(54%,27/50)高于血液标本(46%,23/50),但两者差异无统计学意义(χ2=0.640,P=0.424);胸水标本的阳性率(42%,21/50)也高于血液标本(34%,17/50),但两者差异无统计学意义(χ2=0.679,P=0.409).虽然如此,在活检组织与血液对比组中,有2对标本中EGFR基因在血液标本检测为突变型,而在活检标本中检测为野生型.胸水与血液对比组中;有4对标本中EGFR基因在胸水标本检测为突变型,而在血液中检测为野生型.此外,通过分析发现EGFR基因突变频率与患者年龄、民族无显著相关性,而与性别、是否吸烟有相关性(P＜0.05).在指导靶向用药方面,组织EGFR基因突变阳性患者中位无进展生存期为9.5个月,胸水及血液组分别为8.6及8.5个月.3组中位无进展生存期之间差异无统计学意义.结论 血液标本检测具有取样方便、可减轻患者痛苦等优势,也是作为患者可选EGFR基因检测的补充.但是在两组研究中,血液标本的阳性率均比较低,提示荧光定量PCR法检测血液标本中EGFR基因突变仍需进一步的深入研究以提高检测的准确性.
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三维病理大体标本制备及应用
病理学是一门介于基础医学和临床医学之间的桥梁学科,学好病理学对医学生至关重要.实验教学是病理教学的重要内容,通过观察病理大体标本和切片可以加深对疾病发生发展过程及临床症状的理解和认识.
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外周血高分辨染色体制备方法研究
目的 建立一种简易的人外周血高分辨染色体标本制备方法.方法 将30份外周血样本随机分为3组,每组10份:A组采用常规法制备G显带染色体,B组采用过量胸苷(TDR)同步化法制备高分辨染色体,实验组采用低温休克和低浓度的秋水仙胺双重同步处理细胞,再用热蒸气-过氧化氢法制备高分辨染色体.结果 实验组与A组相比,细胞分裂指数差异无统计学意义(P＞0.05),但实验组获得的早期染色体分裂相数较多,两组比较差异具有统计学意义( P＜ 0.01);与B组相比,两组获得早期染色体分裂相数无差异(P＞0.05),但B组的细胞分裂指数较低(P＜0.05).另外,实验组染色体分散较好,G显带清晰.结论该法不需昂贵的试剂,操作简便易于掌握,能获得较多带纹清晰的高分辨染色体,适合于临床检测应用.
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30°倾斜隔板标本存放架在手术室标本存放管理中的应用
目的 探讨30°倾斜隔板标本存放架在手术室标本存放管理中的应用效果.方法 针对目前手术室标本存放于大托盘等平面容器,易造成固定液未浸没标本、固定液外漏等一系列问题,自制隔板呈30°倾斜的标本存放架,并投入临床应用.将改进前(2014年10月)使用大托盘存放的927例手术标本设为对照组,改进后(2015年10月)使用30°倾斜隔板标本存放架的974例手术标本设为观察组,比较两组固定液未浸没标本、外漏及标本袋倾倒的发生率及医生满意度.结果 观察组固定液未浸没标本发生率为0.1%低于对照组的11.1%;标本袋倾倒发生率0.2%低于对照组的9.1%;标本固定液外漏发生率为0.1%低于对照组5.5%;观察组标本存放不合格率为0.4%,对照组为26.0%,差异有统计学意义(χ2=270.595,P<0.05);观察组手术医生对标本存放的满意度为100%,对照组为38%,差异有统计学意义(χ2=42.076,P<0.05).结论 专用标本存放架满足了手术标本存放需求,能有效保障标本浸没于固定液中,解决了固定液外泄现象,控制职业暴露与环境污染,标本存放质量有明显提高.
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血培养6039份标本结果分析
目的 监测和分析郑州市中心医院2010-01-2011-12感染患者中血培养的病原菌分布情况和耐药情况,为诊治菌血症提供参考.方法 对郑州市中心医院6 039例血培养标本进行的细菌培养及药敏检测进行回顾性分析.结果 6 039份血培养标本共分离病原菌616株,总阳性率为10.2％,其中阳性菌249株(40.4％),阴性菌321株(52.1％),真菌46株(7.5％),革兰阳性菌中以凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌居多,对万古霉素、替考拉宁较敏感；革兰阴性菌以大肠埃希菌和铜绿假胞菌占优势,其次为肺炎克雷伯菌,对亚胺培南、头孢哌酮—舒巴坦较敏感.结论 及时对血培养分离株进行监测和耐药性分析,有效地防止抗菌药物滥用及新耐药菌株的产生.
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不合格样本引起生化指标波动原因分析
检验人员在日常工作中经常会遇到同一患者生化检测结果与前一次差别较大时,临床医生常会说"检验结果不准确".我们认为上述说法不够准确.因为造成结果波动的原因很多,不合格标本送检是主要原因之一[1].下面我们从三个方面来说明不合格标本送检与重新送检合格标本进行了对比,结果如下.
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骨髓片的室温干燥存放时间对过氧化物酶染色灵敏度的影响
过氧化物酶(POX)染色对鉴别白血病类型具有很大价值.实际中较常碰到患者已在外院做过骨髓穿刺术,并剩余较多骨髓片可供染色.实验证明,这时可不必再次骨穿,用保存时间不长的骨髓片做POX染色,其染色灵敏度(积分)接近新鲜骨髓片.
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不合格生化标本导致结果波动56例分析
1临床资料1.1仪器 Beckman Lx20全自动生化分析仪.1.2标本来源临床送检标本,不合格采集,送检时的结果与重新送检合格标本的结果相比较.
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不合格血常规检验标本2 314例原因分析
目的:分析血常规标本不合格的原因及对策,提高血常规检验结果的质量.方法:回顾性分析我院2004/2007年2 314份不合格标本的特点、原因及采取的措施.结果:近4 a我院血常规标本不合格率为1.18%(2 314/196100)且呈现明显的递减趋势.结论:通过对血常规不合格标本原因分析并采取相应措施,保证了血常规标本的质量,从而减少了因血常规分析结果的错误导致的临床误诊.
