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姬松茸多糖对大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响
目的:观察姬松茸多糖对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱发大鼠胸腺细胞凋亡和线粒体膜电位的影响.方法:Wistar大鼠随机分为4组:正常组,模型组,姬松茸多糖低、高剂量组,每组10只.正常组和模型组灌胃(ig)生理盐水,姬 松茸多糖低、高剂量组ig姬松茸多糖溶液(60,120 mg·kg-1),1次/d,连续7d.模型组和姬松茸多糖低、高剂量于第7日腹腔注射DEX(0.02 g·kg-1).3h后处死各组动物,迅速无菌取胸腺,采用显微观察、流式细胞技术观察胸腺细胞形态学改变,胸腺细胞凋亡、脱氧核糖核酸(DNA)断裂百分率及线粒体膜电位变化,胸腺组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化.结果:与模型组比较,姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体嵴肿胀明显减轻；姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞凋亡率[低、高剂量(5.96±1.14)％,(5.07±1.02)％],DNA断裂率[低、高剂量(3.67±0.49)％,(3.24±0.45)％]及胸腺组织MDA含量[低、高剂量(1.87±0.25),(1.72±0.23)μg·mg-1]均明显低于模型组[(7.14±1.62)％,(4.25±0.86)％,(2.16±0.38) μg·mg-1]；姬松茸多糖组大鼠胸腺细胞线粒体膜电位(荧光指数:低剂量38.57±6.29,高剂量41.36±7.18)及胸腺组织SOD活性量[低、高剂量(25.78±3.94),(27.36 ±4.21)U.mg-1]明显高于模型组(32.76 ±5.48)荧光指数,(21.45±3.52) i g· mg-1.结论:姬松茸多糖可阻断胸腺细胞DNA断裂和线粒体膜电位的下降,有效抑制DEX诱导的胸腺细胞凋亡,其作用机制与姬松茸多糖提高胸腺组织抗氧化功能有关.
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大鼠拟"衰老"胸腺细胞功能退化的机制探讨及左归丸的作用
目的:探讨皮质酮致大鼠胸腺细胞功能退化可能的机制及左归丸的药理作用.方法:大鼠胸腺细胞体外培养,分正常对照组、模型组、左归组.MTT法检测细胞增殖情况,PI染色结合FCM分析周期分布,Real time PCR和Western blotting法检测相关因子表达变化.结果:皮质酮显著抑制细胞增殖,细胞阻滞于G_1期,p16表达显著升高(P<0.01),cdk4、IL-2、IL-2Rα蛋白表达降低(P<0.05).与模型组比较,左归组G_1期细胞数减少,p16表达降低,IL-2、IL-2Rα蛋白表达升高(P<0.05).结论:左归丸通过抑制p16表达,促进细胞增殖,延缓皮质酮致胸腺依赖性免疫功能退化的进程.
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加味玉屏风汤对小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用
目的:研究不同浓度的加味玉屏风汤对地塞米松磷酸钠(Dex-p)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡和胸腺细胞自发凋亡的影响.方法:通过体外细胞培养,采用琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜检测手段,观察加味玉屏风汤作用前后对胸腺细胞凋亡程度的影响.结果:胸腺细胞既可发生自发凋亡,又可由Dex-p诱导凋亡,细胞凋亡率与Dex-p呈浓度依赖关系,佳诱导浓度为10-7mol/L.加味玉屏风汤(200～400μg/ml)可不同程度地抑制由Dex-p(10-7mol/L)诱导的胸腺细胞凋亡(P＜0.01);而低浓度(＜100μg/ml)的加味玉屏风汤则对Dex-p(10-7mol/L)诱导的胸腺细胞凋亡无明显影响(P＞0.05);加味玉屏风汤200、400μg/ml可使胸腺细胞的自发凋亡率明显降低(P＜0.01).结论:不同浓度加味玉屏风汤(200～400μg/ml)可不同程度抑制胸腺细胞的自发凋亡及由Dex-p(10-7mol/L)诱导的凋亡.
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TCR抗体诱导不成熟胸腺细胞亚群凋亡的敏感性研究
为比较小鼠不同胸腺细胞亚群对抗TCR抗体诱导凋亡的敏感性, 用体外抗TCR抗体刺激分离胸腺细胞, BALB/c小鼠体内注射抗TCR抗体, FACS检测胸腺细胞.结果显示, CD4+CD8+DP胸腺细胞和CD4-CD8+CD3-TCR-细胞对抗TCR抗体诱导的凋亡敏感, 但CD4-CD8-CD3-TCR-胸腺前体细胞自发凋亡率低,且抗TCR抗体诱导的凋亡, 表明胸腺细胞对凋亡的敏感点产生于CD4-CD8+CD3-TCR-细胞表达后, 胸腺细胞的凋亡敏感性受发育调节.
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胸腺温度场预测及加热增强人体免疫力的可行性分析
提出通过提高胸腺温度增强人体免疫能力的方法.考虑生物组织热物性的非均匀性,建立胸部组织多层传热模型,对胸部组织在不同加热条件下的温度响应进行理论分析.结果表明,表面加热可使胸腺温度升高0.2～0.5℃,微波加热可使胸腺温度升高0.7～1.9℃,有利于增强胸腺产生成熟T细胞的能力,可望为提高人体免疫能力提供一种新的技术思路.
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松果体及其褪黑素影响胸腺T细胞发育周期
目的探讨松果体对胸腺分化发育时细胞周期的影响. 方法选用清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7.5mg/kg组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15mg/kg组.术后4、8周取材.用ABC法染胸腺cyclinA、cyclinE阳性细胞,计算机图像分析仪测量各阳性细胞面积及其染色强度.以碘化丙啶(PI)一步插入性DNA定量荧光染色法,流式细胞术测定胸腺T淋巴细胞不同细胞周期的分布状况.以RT-PCR法检测褪黑素对胸腺细胞周期依赖性激酶1β表达的影响. 结果松果体摘除对胸腺cyclinE表达的影响甚于对cyclinA的影响,促进cyclinE的合成,松果体摘除后胸腺细胞周期的变化表现为G1期减少,S期和G2+M期百分比增多.补充褪黑素后上述改变有所恢复,但与剂量不成线性关系,且对皮髓质影响有所不同.褪黑素能促进胸腺细胞表达细胞周期依赖性激酶1β. 结论松果体摘除能显著影响胸腺细胞分化发育,补充褪黑素能缓解相关影响.
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热应激对小鼠胸腺细胞凋亡的影响
目的 探讨热应激对小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期情况的影响.方法 1月龄雄性小鼠随机分为6组(A～F),每组5只,A为对照组,B～F为实验组.对照组不进行热应激处理,实验组热应激(37℃)处理2h后恢复室温饲养,于恢复室温后0、2、6、10、20h依次取每组小鼠的胸腺.透射电子显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞术、苏木素-伊红(HE)染色分析热应激后不同时间点小鼠胸腺细胞的凋亡及细胞周期情况;免疫组织化学染色检测各时间点小鼠胸腺细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和热休克蛋白70(HSP70)的表达情况.结果 热应激后2 ～10h电镜观察均可见典型的凋亡细胞形态;热应激后6h,胸腺细胞的凋亡率及S期细胞数量达到高,而G0/G1、G2/M期细胞均降至低,此时间点PCNA表达量较高.HSP70在热应激结束后0h即开始表达,2～6h表达量高.结论 热应激能够诱导小鼠胸腺细胞的凋亡,而HSP70则在凋亡过程中发挥保护作用.
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葡萄糖转运体GLUT1对CD4 T细胞激活和功能发挥至关重要
CD4T细胞激活后会增殖分化为效应性T细胞和调节性T细胞，进而介导免疫反应的发生。在离体状态下，不同亚型的T细胞，其代谢方式对糖酵解和氧化磷酸化的侧重不同，对于T细胞葡萄糖摄取和代谢的在体调控机制目前尚不清楚。尽管在T细胞上有诸多葡萄糖转运体的表达，但是GLUT1缺失选择性损伤胸腺细胞和效应性T细胞的代谢和功能。而静息T细胞在未激活之前都处于正常状态。GLUT1的缺失抑制T细胞葡萄糖摄取和糖酵解，生长和增殖，降低效应性T细胞存活和分化能力。更重要的是，Glut1缺失抑制效应性T细胞扩增以及诱导炎症免疫反应疾病发生的能力。相反的，调节性T细胞的数量并未减少，并且能够正常发挥对效应性T细胞的抑制作用，并不受Glut1表达的影响。这些结果提示在体调控CD4 T细胞激活和效应性T细胞扩增于存活中，对于Glut1的选择性需要。
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实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平
目的了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除 DNA环(sjTRECs)的含量,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能. 方法利用实时定量PCR和TaqMan方法检测11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平. 结果正常人中sjTRECs含量分别为:8.83±4.81/1000个外周血单个核细胞;27.31±3.23/1000个成人胸腺细胞和170 .29 ±59.52/1000个儿童胸腺细胞. 结论 sjTRECs水平与年龄有关,正常人外周血中每1000个单个核细胞中约含4.5个幼稚T细胞.
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CCL20抑制小鼠胸腺CD4+CD25+天然调节性T细胞的发育
本研究探讨趋化因子CCL20对小鼠胸腺CD4+CD256双阳性调节性T细胞发育的影响.为天然调节性T细胞调控的研究提供基础数据.采用14.5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺CD4+CD25+细胞的改变,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化.结果表明:体外胸腺培养的第1-6天胸腺细胞比例、细胞数量的变化趋势与胸腺体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例、细胞数量的变化趋势相似;在胸腺体外培养的第1-6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%,这一发育趋势与体内结果具有一致性.在4μg/ml的CCL20干预下,胸腺体外培养的第3、6天CD4+CD25+胸腺细胞分别从3.24±0.18、3.96±0.24下降至1.27±0.11、1.76±0.22(p值均＜0.001).结论:体外培养的CD46CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,CCL20明显下调胸腺CD4+CD25+的表达,这将为天然调节性T细胞的调控研究提供有效的参考依据.
关键词： 胸腺细胞 CD4 CD25 CCL20 CD4+CD25+T细胞 -
T细胞中TCR Vα40与TCR Dδ3,Jδ1和ψJα重排的特点
利用巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞、4例分选的外周血CD3+细胞和7例心胸外科手术的非免疫性疾病和非肿瘤病人的正常胸腺细胞DNA的TCR Vα40基因与Jδ1,Dδ3和ψJα重排的情况,从对不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果显示,TCR Vα40分别与Jδ1,Dδ3和ψJα的重排均可见于多数外周血T细胞和胸腺细胞中,对不同含量DNA的PCR分析显示TCR Vα40重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.研究结果提示,TCR Vα40-ψJα的重排常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR Vα40-Dδ3则在未成熟T细胞中发生频率更高.
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G-CSF对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞的细胞周期、增殖细胞及分化的影响
本研究探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞周期、凋亡及各细胞亚群增殖、分化的影响.6 Gy照射BALB/c小鼠制造中重度急性辐射损伤模型,随机分为对照组及重组人G-CSF治疗组[rhG-CSF 100μg/(kg·d)×14天].用PI法检测照后72小时内胸腺细胞周期及凋亡变化,流式细胞仪检测照后7至28天不同时间点胸腺CD4- CD8-细胞4阶段及C134+ CD8+、CD8+ C134-、CD8- CD4+细胞比例.结果显示.G-CSF在照后6小时即可使胸腺细胞出现G0/G1期阻滞G-CSF组vs对照组为(82.0±5.O)%vs(75.9±2.8)%(p＜0.05),S期下降G-CSF组vs对照组为(10.2±4.8)%vs(15.7±2.3)%(p＜0.05),但对G2/M期细胞比例影响不大.胸腺细胞受照后6小时即出现明显调亡,12小时达高峰.G-CSF组在照后6小时及12小时胸腺细胞凋亡率分别为(11.5±2.4)%、(15.5±3.3)%,对照组则分别为(16.5±2.2)%、(22.6±0.7)%,两时间点统计学差异明显(p＜0.05).胸腺CD4- CD8-(double negative,DN)细胞成熟分4个阶段(DN1-4),G-CSF组照后7天DN1细胞比例明显高于对照组(p＜0.05),照后21天DN3、DN4细胞比例高于对照组(p＜0.05),提示G-CSF 可促进DN1细胞增殖,并使其向DN3、DN4阶段分化.G-CSF对胸腺CD4+ CD8+细胞的影响主要在于减轻其恢复过程中的二次下降的程度,使其在照后28天接近正常,并明显高于对照组[(71.0±6.3)%vs(25.5±6.3)%](p＜0.05).结论:G-CSF可调节急性辐射损伤胸腺细胞周期,减少胸腺细胞凋亡,促进胸腺CD4- CD8-及CD4+CD8+细胞增殖、分化,加快急性辐射损伤后中枢免疫恢复.
关键词： 急性辐射损伤综合征 重组人粒细胞集落刺激因子 胸腺细胞 -
CD4+CD25+Treg细胞对肿瘤免疫影响的研究进展
系统可以保护机体遭受生物的侵袭,但也可以导致反应过度或错误反应,对自身正常组织发生攻击,从而引起自身免疫性疾病或攻击移植的组织器官,引发排斥反应,因此研究免疫耐受机制具有重大的理论意义和应用价值.早期研究认为免疫耐受机制主要包括自身反应性胸腺细胞及前B 细胞在中枢免疫器官的克隆清除和免疫忽视两种机制.近年来随着研究的逐步深入,人们发现除了以往的"被动"机制外,还存在着"主动"机制.这一机制主要通过调节性T 细胞的选择抑制性作用维持免疫耐受.
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血管内皮细胞生长因子促进成年小鼠胸腺细胞的增殖与分化
目的研究血管内皮生长因子(VEGF121)在免疫系统的表达及其对小鼠胸腺细胞的作用,为了解VEGF在免疫系统中的功能提供实验依据. 方法构建pCDI-VEGF真核表达载体,转染COS-7细胞,收获上清检测其对小鼠胸腺细胞的促增殖效应和CD4、CD8分子表达,用抗VEGF单克隆抗体及不同信号转导抑制剂进行阻断实验.通过RT-PCR方法检测人VEGF mRNA在胸腺、脾脏等免疫器官的表达. 结果实验证明VEGF mRNA可以在多种免疫组织中表达.VEGF121真核表达蛋白可明显促进小鼠胸腺细胞增殖和分化,此作用可被VEGF的单克隆抗体所封闭;不同的信号转导抑制剂具有不同的效应. 结论 VEGF参与了免疫系统的功能,对小鼠胸腺细胞的增殖分化有促进作用,可能是内源性的免疫系统的调节因子.
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双歧杆菌表面分子对LPS在小鼠体内调节胸腺细胞凋亡的观察
目的 研究双歧杆菌表面分子细胞壁肽聚糖(WPG)、脂磷壁酸(LTA)对LPS体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡的调节. 方法 用DNA凝胶电泳、TUNEL法检测WPG、LTA对LPS体内诱导小鼠胸腺细胞凋亡的影响,并分别用生物活性法和Griess反应测定WPG、LTA、LPS体外诱生TNF-α、NO2-的含量. 结果 WPG、LTA可显著抑制LPS体内诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡.WPG、LTA单独刺激巨噬细胞时所诱生的TNF-α、NO的量显著低于LPS刺激时所产生的这两种活性介质的量,而WPG、LTA与LPS共同应用时可显著降低LPS诱导巨噬细胞产生的TNF-α、NO的量;诱生型一氧化氮合成酶抑制剂S-甲基异硫脲硫酸盐体外可抑制巨噬细胞产生的NO的量,在体内可部分抑制LPS诱导的小鼠胸腺细胞的凋亡. 结论 WPG、LTA与LPS共同应用时,可抑制LPS诱导的巨噬细胞产生的TNF-α、NO的量,从而下调LPS体内诱导小鼠胸腺细胞的凋亡.
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小鼠肺炎克雷伯菌感染对血清肿瘤坏死因子-α和胸腺细胞凋亡的影响
目的研究在肺炎克雷伯菌脓毒血症时,血清肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的动态变化及与胸腺细胞凋亡的关系. 方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)动态检测感染24 h内血清TNF-α的含量,同时用电镜观察胸腺细胞凋亡的形态和TUNEL法染色观察胸腺细胞凋亡量. 结果小鼠腹腔注射肺炎克雷伯菌后TNF-α呈单峰样显著增加,峰值出现在感染后6 h,为10.09ng(P＜0.01).胸腺细胞凋亡在感染后逐渐增高,至24 h达高峰45.74%(P＜0.01). 结论肺炎克雷伯菌感染可激活多种炎性介质和诱导胸腺细胞凋亡,胸腺细胞的凋亡不完全受TNF-α控制.
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CD4+CD25+调节性T细胞研究的意义
以往的免疫学理论认为,实现自身免疫耐受的主要机制是胸腺细胞及前B(pre-B)细胞在中枢免疫器官中的克隆清除(clonal deletion).其次,进入外周的成熟淋巴细胞如果表达针对自身抗原的识别受体(TCR或者BCR),通常被诱导进入免疫无能(anergy)状态而不表现任何自身反应性.另外尚有部分淋巴细胞对自身抗原的免疫忽视(ignorance)也被认为是外周免疫耐受的机制之一.上述三种途径均以"被动"的方式实现自身免疫耐受(recessive tolerance).近年积累的大量实验证据表明,机体可能更主要地是通过CD4+CD25+调节性T(Tr)细胞以"主动"的方式维持自身免疫耐受(dominant tolerance).这一发现将改变我们对自身免疫耐受及免疫调节机制的认识,并将对免疫学基本理论的发展产生重大影响.
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肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机(随机数字法)分为对照组和感染组,每组24只.采用气管穿刺注入感染法制作大鼠肺炎克雷伯菌肺炎模型.分别于接种后的第2,4,6天分批处死动物,分别采用TUNEL法检测大鼠胸腺细胞凋亡及免疫组化法检测凋亡相关基因Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Fas的表达.结果 与同时间点对照组相比,感染组胸腺细胞凋亡增加,凋亡指数和胸腺细胞Cleaved Caspase-3和Fas表达水平升高,Bcl-2表达水平下降.感染组随着接种时间的延长凋亡指数和胸腺细胞Cleaved Caspase-3表达水平持续增加,胸腺细胞Fas表达水平在第4天达到高峰,胸腺细胞Bcl-2表达水平持续下降,而对照组上述各指标无明显动态变化.结论 肺炎克雷伯菌肺炎可诱导胸腺细胞凋亡增加,其机制可能与Bcl-2表达减少和Fas表达增多有关.不同凋亡调控途径在肺炎不同时期对凋亡的影响亦有所不同,Fas的作用在肺炎第4天后开始减弱而Bel-2的作用继续增强.
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完全弗氏佐剂恢复NOD鼠胸腺细胞对凋亡信号地塞米松的敏感性
1型糖尿病主要是T细胞介导的自身免疫性疾病.非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠是一种广泛用于1型糖尿病研究的啮齿类动物模型,其临床特征、病理形态学和免疫学的表现与人类1型糖尿病相似.
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环孢素与钙通道拮抗药相互作用的临床研究
环孢素(Ciclosporin,CsA)1976年由瑞士山德士药厂首次发现并报告有免疫抑制作用,同年剑桥大学Calne在动物器官移植上应用取得成功,1983年被FDA批准用做肾、肝和心脏移植的抗排异药物.CsA选择性抑制细胞免疫,对胸腺细胞及辅助T细胞(Th细胞)具有很强的抑制作用,包括抑制胸腺因子分泌,阻断胸腺内T细胞成熟和Th细胞分化增殖;抑制抗原刺激T细胞的分化增殖;抑制IL-2、IL-3、IL-4、IFN、TNFα、TNFβ等淋巴因子的分泌从而抑制排异反应.
