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肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨肺炎克雷伯菌肺炎对大鼠胸腺细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 48只Sprague-Dawley大鼠随机(随机数字法)分为对照组和感染组,每组24只.采用气管穿刺注入感染法制作大鼠肺炎克雷伯菌肺炎模型.分别于接种后的第2,4,6天分批处死动物,分别采用TUNEL法检测大鼠胸腺细胞凋亡及免疫组化法检测凋亡相关基因Cleaved Caspase-3、Bcl-2和Fas的表达.结果 与同时间点对照组相比,感染组胸腺细胞凋亡增加,凋亡指数和胸腺细胞Cleaved Caspase-3和Fas表达水平升高,Bcl-2表达水平下降.感染组随着接种时间的延长凋亡指数和胸腺细胞Cleaved Caspase-3表达水平持续增加,胸腺细胞Fas表达水平在第4天达到高峰,胸腺细胞Bcl-2表达水平持续下降,而对照组上述各指标无明显动态变化.结论 肺炎克雷伯菌肺炎可诱导胸腺细胞凋亡增加,其机制可能与Bcl-2表达减少和Fas表达增多有关.不同凋亡调控途径在肺炎不同时期对凋亡的影响亦有所不同,Fas的作用在肺炎第4天后开始减弱而Bel-2的作用继续增强.
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膀胱癌细胞Cx43对顺铂抗肿瘤作用影响研究
目的 连接蛋白43(connexin43,Cx43)在人体正常组织及肿瘤组织中广泛表达,并且参与细胞的生长控制和组织分化.本研究探讨采用RNA干扰技术沉默膀胱癌5637细胞株Cx43蛋白表达对顺铂化疗敏感性的影响.方法 体外培养膀胱癌5637细胞和正常尿路上皮SV-HUC-1细胞,采用蛋白质印迹法检测膀胱癌5637细胞系和正常尿路上皮SV-HUC-1细胞中Cx43蛋白表达,应用免疫荧光技术检测膀胱癌5637细胞系中Cx43蛋白的定位.采用RNA干扰技术沉默膀胱肿瘤5637细胞株Cx43蛋白的表达并用顺铂(3μg/mL)处理SiRNA-Cx43组(实验组)和SiRNA-Control(对照组)后,通过CCK-8检测实验组、对照组及野生型5637细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测两组癌细胞的凋亡;采用蛋白质印迹法检测顺铂处理后野生型5637细胞后细胞中Cx43、Cleaved Caspase-3的表达及实验组和对照组中Cx43、Cleaved Caspase-3和Bcl-2的表达.结果 膀胱癌5637细胞中Cx43表达较正常尿路上皮细胞高,相对蛋白表达量分别为1.013±0.102和0.556±0.054,两细胞系比较差异有统计学意义,t=3.789,P=0.019;免疫荧光检测Cx43主要定位于细胞质中.CCK-8结果显示,膀胱癌5637细胞随着顺铂药物的浓度(0.75、1.5、3和6μg/mL)和时间(0、1、2、3 d)的增加,细胞的增殖减少,采用重复测量方差分析,各组间比较,差异有统计学意义,F=153.634,P＜0.001;实验组增殖较对照组明显减少,差异有统计学意义,F=9.949,P=0.02.流式细胞仪检测结果显示,实验组和对照组凋亡率分别为(63.00±4.58)％和(34.33±6.03)％,差异有统计学意义,t=7.457,P＜0.01.蛋白质印迹法结果显示,5637细胞随着药物(顺铂3 μg/mL)作用时间增加,Cx43蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义,F=178.868,P＜0.001;而CleavedCaspase-3逐渐升高,差异有统计学意义,F=21.643,P＜0.001.顺铂(3μg/mL,4h)处理实验组和对照组后,CleavedCaspase-3蛋白相对表达量分别为0.740±0.092和0.373±0.091,差异统计学意义,t=6.394,P=0.001;BclL-2蛋白相对表达量分别为0.260±0.066和0.817±0.068,差异统计学意义,t=4.814,P=0.005 结论 沉默膀胱癌5637细胞中Cx43蛋白表达能提高顺铂的敏感性,可能与反常定位于细胞质中的Cx43参与线粒体介导的凋亡途径有关.
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缝隙连接蛋白43在X射线诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及机制研究
目的 研究缝隙连接蛋白43(Cx43)在X射线致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中的作用并探讨其机制.方法 采用流式细胞术检测10 Gy X射线照射后48 ～96 h以及不同剂量X射线照射后72 h HUVEC细胞凋亡的变化.Western blot检测0、5、10、20Gy X射线照射后72 hHUVEC中Cx43和cleaved caspase-3蛋白的表达.采用RNA干扰技术使细胞Cx43表达沉默,或转染Cx43高表达质粒使Cx43过表达.流式细胞术和Western blot分别检测Cx43沉默和过表达对受照HUVEC凋亡的影响以及cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化.结果 X射线照射后48～96 hHUVEC凋亡增加并且呈现剂量依赖性.在0～20 Gy范围内,Cx43表达随剂量增加而降低,cleavedcaspase-3表达随剂量增加而增高.Cx43沉默组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显高于无意义序列组(t =3.674、6.375,P＜0.05);Cx43过表达组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显低于空载体组(￡=9.399、11.190,P＜0.05);Cx43沉默组较无意义序列组cleavedcaspase-3表达增强,而过表达组低于空载体组.结论 Cx43通过调控cleaved caspase-3活化,抑制HUVEC细胞凋亡,从而对X射线照射的HUVEC细胞发挥保护作用.
关键词： X射线 HUVEC细胞 Cx43 凋亡 Cleaved Caspase-3 -
贝母素乙增强阿霉素对胃癌多药耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制研究
目的 研究贝母素乙逆转胃癌细胞多药耐药性(MDR),增强化疗药物对胃癌多药耐药裸鼠移植瘤的抑制作用,探讨其作用机制.方法 制备胃癌耐药SGC7901/VCR细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,随机分组后,ip给药,每2天给药1次,共给药6次.治疗期间观察裸鼠体质量,游标卡尺测量移植瘤体积.治疗结束后处死裸鼠,称取肿瘤质量,计算抑瘤率;Western blotting检测药物治疗后移植瘤耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、Cleaved Caspase-3表达水平.结果 治疗期间联合用药组移植瘤体积小于模型组,差异显著(P＜0.01).治疗结束后处死裸鼠,称取移植瘤的质量,联合用药组移植瘤质量和抑瘤率显著低于模型组(P＜0.05).Western blotting结果显示联合用药组P-gp表达水平较模型组降低,Cleaved Caspase-3表达升高.结论 贝母素乙可以增强胃癌耐药细胞移植瘤对阿霉素的敏感性,能够显著抑制胃癌耐药移植瘤的生长,其机制可能与降低肿瘤组织中P-gp表达和升高Cleaved Caspase-3的表达相关.
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葛根素与三氧化二砷协同作用通过Akt/p38途径促进人胶质瘤细胞凋亡
目的:研究葛根素(PRN)是否通过Akt/p38途径协同三氧化二砷(As2O3)促进人胶质瘤细胞的凋亡.方法:MTT检测细胞的存活率,流式细胞仪(FCM)技术检测细胞的凋亡状态,蛋白免疫印迹(Immunoblotting)检测细胞phosphorylated Akt和p38-MAPK,Cleaved Caspase-3蛋白的表达,PCR检测Caspase-3的mRNA的表达.结果:PRN协同As2O3降低人胶质瘤细胞U87的存活.与对照组相比,PRN(16μM)组,As2O3(2μM)组显著增加细胞内钙水平(1.13±0.015),(1.18±0.33).此外,PRN能够协同As2O3增加细胞内钙(1.34±0.72),下调蛋白phosphorylated Akt,上调phosphorylated p38-MAPK和Cleaved Caspase-3蛋白及Cleaved Caspase-3 mRNA表达水平.结论:PRN协同As2O3增加胶质瘤细胞内钙水平,抑制细胞存活.此外,PRN联合As2O3下调phosphorylated Akt,增强phosphorylated p38-MAPK和Cleaved Caspase-3的表达,进而促进肿瘤细胞凋亡.PRN可能成为临床上辅助As2O3治疗肿瘤中的潜在的辅助治疗药物.
关键词： 胶质瘤 P-AKT pp38-MAPK Cleaved Caspase-3 凋亡 -
Nec-1在小鼠脑出血中通过抑制程序性坏死发挥神经保护作用
目的 研究程序性坏死的特异性抑制剂Nec-1对小鼠脑出血神经功能的保护作用,并探讨其机制.方法 选取健康雄性ICR小鼠,体重25～ 30 g,采用在纹状体部位注射胶原酶Ⅳ或生理盐水的方法建立小鼠脑出血组或者脑出血对照组,在脑出血前15 min分别在侧脑室注射Nec-1溶液或vehicle溶液.将实验随机分为:对照组、脑出血+ vehicle处理组、脑出血+Nec-1处理组.分别利用干湿重法测定脑水肿程度,神经功能评分检测神经运动功能,Western blotting检测cleaved caspase-3,Bcl-2蛋白表达情况.结果 脑出血加剧脑水肿程度,而Nec-1处理组减轻脑水肿程度(P＜0.05).经Nec-1处理后,可以提高小鼠脑出血神经运动功能(P＜0.05).脑出血可以增加cleaved caspase-3蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达,经Nec-1处理后,抑制cleaved caspase-3的表达水平(P＜0.05),增加Bcl-2的表达(P＜0.05).结论 Nec-1对脑出血发挥重要神经保护作用,这种保护作用可能是通过抑制凋亡通路实现的,提示程序性坏死在脑出血中具有重要作用,将为脑出血的治疗提供新的思路.
关键词： Nec-1 脑出血 程序性坏死 Cleaved Caspase-3 Bcl-2 -
SIRT3在氧糖剥夺再灌注损伤小鼠神经元中的表达及意义
目的:通过建立体外脑缺血模型,探讨沉默信息因子3(SIRT3)在小鼠皮层神经元氧糖剥夺再灌注(OGD瓜)损伤后的表达和意义.方法:C57BL/6J小鼠皮层神经元原代培养7天后,以氧糖剥夺不同时长(2h、4h、6h、8h)再灌注24 h作为观察时间点,利用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞活力;小鼠乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH释放;蛋白印迹法(Western blot WB)观察微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)、活化凋亡蛋白3(Cleaved caspase-3)、以及SIRT3的表达变化;免疫荧光下进一步观察LC3-Ⅱ、SIRT3表达.结果:与正常组比,随着氧糖剥夺时间的延长,LDH释放量呈台阶式升高(P＜0.01),而神经元活性进展性下降(P＜0.01);蛋白印迹结果发现在缺血损伤后LC3-Ⅱ整体上调,并于OGD4h达峰值,SIRT3分子表达趋势与LC3-Ⅱ相似均呈抛物线状,而Cleaved caspase-3整体上调;相应的,细胞免疫荧光结果显示缺血损伤后神经元胞体和突起中LC3呈点状高表达,与此同时SIRT3荧光强度亦增高.结论:神经元缺血时间越长损伤越重;LC3-Ⅱ和SIRT3表达呈现相似性;SIRT3可能通过调控线粒体自噬参与了拮抗神经元缺血损伤的作用.
关键词： Sirt3 LC3 Cleaved Caspase-3 自噬 凋亡 -
生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 Cleaved caspase-3蛋白表达的影响
目的 研究生长激素(Growth hormone, GH)对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia reperfusion,I/R) 后心肌细胞凋亡及相关基因Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达的影响.方法 24只大鼠随机分为三组,假手术组(sham-operated group,n=8,仅手术24 h)、心肌缺血/再灌注(I/R)组(n=8)、GH组(n=8),后两组均缺血30 min,再灌注24 h,GH组于建立模型前7 d每天给予人重组生长激素(reconbination human growth hormone,rhGH)针剂皮下注射(1 U/kg体质量),其他二组等量生理盐水注射.以TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况, DAB免疫组化法检测心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达并进行心肌组织病理学检查.结果 大鼠心肌I/R 24 h后心肌细胞凋亡指数明显上升(对照于假手术组,P<0.05),心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显升高(P<0.05),心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死灶,缺血心肌间有炎症细胞浸润,心肌排列不整齐(HE染色),而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3蛋白表达呈阳性染色指数明显好于I/R组(P<0.05),心肌细胞炎症细胞也明显减少,坏死灶也少于I/R组.结论 GH可以减少心肌I/R后心肌细胞凋亡及细胞Caspase-3、Cleaved caspase-3染色阳性指数,说明GH对I/R后的心肌具有保护作用.
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人参皂苷Rh2调控PI3 K／AKT／GSK-3β信号通路诱导人结肠癌细胞凋亡
目的：探究人参皂苷Rh2（ginsenoside Rh2，Rh2）诱导人结肠癌细胞SW480凋亡作用机制。方法 CCK-8法检测Rh2对SW480细胞增殖的影响；流式细胞术（Flow cytoMe-try，FCM）检测 Rh2对 SW480细胞凋亡的影响；Ho-echst33258染色观察Rh2对SW480细胞凋亡形态学的影响；Western blot检测经Rh2诱导 SW480细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53、cleaved caspase-3，PI3K／AKT／GSK-3β信号通路相关蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化；LY294002、Rh2单独及联合诱导 SW480细胞后，蛋白PI3K、AKT、P-AKT、GSK-3β、P-GSK-3β表达量变化。结果CCK-8结果显示 Rh2呈时间浓度依赖抑制 SW480细胞增殖。FCM结果显示细胞早期凋亡率由正常对照组的（0.70±0.09）％增至（11.06±1.04）％（P ＜0.05）。Ho-echst33258结果显示，Rh2诱导SW480细胞48h后呈现典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示，经Rh2诱导的SW480细胞，凋亡相关蛋白 Bcl-2表达降低，Bax、p53、激活型胱天蛋白酶3（cleaved caspase-3）蛋白表达增加；PI3K／AKT／GSK-3β信号通路蛋白PI3K、P-AKT、P-GSK-3β表达量与对照组比较明显减少，AKT、GSK-3β表达量无明显变化；LY294002、Rh2和 LY294002与 Rh2联合诱导 SW480细胞后，总 AKT 蛋白和总 GSK-3β蛋白表达量基本一致， LY294002与Rh2联合用药对SW480细胞中PI3K、P-AKT和P-GS K-3β的表达抑制作用较单独用药更加明显。结论Rh2可能是通过抑制PI3K／AKT／GSK-3β通路，激活p53信号通路，激活caspase-3，破坏Bcl-2／Bax比例，诱导结肠癌细胞SW480凋亡。
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Livin、cleaved caspase-3在尖锐湿疣中的表达
目的:确定livin和 cleaved caspase-3在尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)组织中的表达及意义.方法:采用免疫组化SP法检测livin和cleaved caspase-3在34例CA组织和15例正常皮肤组织中的表达.结果:正常皮肤中livin与cleaved caspase-3均无表达,CA组织中二者表达的阳性率分别为82.4%和38.2%;两种蛋白在CA组织中的表达呈负相关(r=-5.25,P＜0.001).结论:Livin抑制caspase-3的激活,两者共同参与CA的发病过程,可能与CA的发生、发展相关.
关键词： Livin Cleaved Caspase-3 尖锐湿疣 -
蛇床子素体外对人肝癌细胞的杀伤效应及机制
目的 探讨蛇床子素体外对人肝癌细胞的杀伤效应及机制.方法 将人肝癌细胞系HepG2和Huh7用蛇床子素治疗后,采用MTT法检测蛇床子素对这2种肝癌细胞系的抑制率,采用流式细胞术检测蛇床子素对HepG2细胞凋亡的影响,采用Western blot法检测蛇床子素对HepG2细胞Cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的表达.结果 MTT试验结果表明,不同浓度的蛇床子素均能抑制HepG2细胞的细胞活力;流式细胞实验结果表明,高、低剂量的蛇床子素均能诱导HepG2细胞发生凋亡,且高、低剂量蛇床子素组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05);与相同剂量蛇床子素组比较,zVAD-fmk可有效抑制蛇床子素对HepG2细胞的凋亡诱导效应,差异有统计学意义(P＜0.05);蛇床子素能显著降低HepG2细胞Bcl-2的表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05),但对Bax表达无影响.结论 蛇床子素诱导肝癌细胞进入Cleaved caspase-3依赖的凋亡过程,其机制可能为蛇床子素可显著降低Bcl-2表达,从而降低Bcl-2/Bax比例.
关键词： 肝癌 蛇床子素 凋亡 Cleaved Caspase-3 Bcl-2 -
功能未知基因C6orf120对大鼠肝脏功能的影响
目的 观察功能未知基因C6orf120敲除后对大鼠表型变化的影响,初步探究该基因的功能.方法 将雄性野生型( wild type,WT)大鼠作为对照组,C6orf120基因敲除(C6orf120 --)大鼠作为实验组,称量子代大鼠20 d体质量及观察子代生长情况.利用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription PCR, RT-PCR)技术检测大鼠肝组织TNF-α的转录水平.利用Western blotting技术分析6~8周WT大鼠和C6orf120 -/-大鼠肝脏组织 TNF-α和Cleaved caspase-3的表达情况.结果 与WT大鼠相比,C6orf120 -/-子代大鼠出生20 d体质量显著降低(t=5. 292,P<0. 0001).成年C6orf120 -/-大鼠TNF-α、Cleaved caspase-3在肝组织中的表达水平显著高于WT大鼠(P=0. 0172、0. 0301).结论 基因C6orf120可能对大鼠肝功能具有一定的保护作用,其保护机制可能与抗炎和抗凋亡有关.
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补体1抑制剂抑制缺血心肌细胞凋亡及其机制
目的:探讨补体1抑制剂(C1INH)对缺血再灌心肌细胞凋亡的影响及作用机制.方法:复制大鼠缺血再灌注模型,C1INH进行干预,实验分为假手术组、NaCl组及C1INH组.TUNEL法检测心肌组织的心肌细胞凋亡情况.Western blot检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cleaved caspase-3的表达情况.同时测定血浆Caspase-3的活性.结果:与对照组比较,C1INH干预组心肌细胞的凋亡明显减少(P＜0.05).同时C1INH干预组Bcl-2和Bax的表达比例更趋于正常化,Caspase-3及Cleaved caspase-3的表达及活性则明显减少(P＜0.05).结论:在心肌的缺血再灌中,C1INH,除了抑制补体激活,抑制炎症反应而对心肌细胞具有保护作用外,还能通过通过平衡Bcl-2和Bax的表达,抑制Caspase-3的活性及裂解而对抗心肌细胞的凋亡.
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BMS-345541对人骨肉瘤细胞MG63凋亡及其作用机制
目的 研究BMS-345541对人骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响及其可能的机制.方法 以0、2、4、6、8、10 μmol/L BMS-345541处理MG63细胞24、48 h后,用CCK-8法检测细胞存活率.用0、2、4、8 μmol/L药物作用细胞24 h后,以PI染色法观察细胞凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡.以同样浓度作用细胞48 h,Western-blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达情况.结果(4-10)μmol/L的BMS-345541均可抑制MG63细胞的增殖,其抑制效应呈剂量-时间依赖性,48 h低存活率只有(0.412±0.024)(P<0.05).PI染色荧光显微镜观察结果发现:随药物浓度增高,相同视野下正常细胞数逐渐降低,凋亡细胞数逐渐增高.流式细胞仪分析:0、2、4、8 μmol/L的作用BMS-345541 24 h后,凋亡率分别为(5.2±0.78)％、(5.82±0.82)％、(8.86±1.71)％、(11.01±2.69)％,与对照组相比,8 μmol/L组差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示MG 63细胞中的cleaved caspase-3蛋白表达量上调,与对照组相比,2、4、8 μmol/L组差异均有统计学意义(P<0.05).结论 BMS-345541可抑制MG63细胞增殖,并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与cleaved caspase-3表达上调有关.
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二吲哚甲烷诱导荷鼻咽癌裸鼠肿瘤转归及对MDA、SOD和GSH-Px的影响
[目的]探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-diindolylmethane,DIM)对荷鼻咽癌裸鼠肿瘤体积、丙二醛(Malondiadehycle,MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力及凋亡相关蛋白-半胱天冬酶-3信号分子的影响.[方法]采用完全随机的方式将48只BALB/C裸小鼠分为DIM低、中、高(0.004 g/kg.b.w、0.02 g/kg.b.w、0.1 g/kg.b.w)剂量组和溶剂对照组(体积分数为0.5%的羧甲基纤维素钠溶液),分别经口灌喂给予实验动物相应剂量的DIM或对照溶液10 d后,于其背部靠腋窝皮下接种人鼻咽癌细胞株CNE1,继续经口灌喂给予实验动物相应剂量的DIM或对照溶液.实验第30天时处死动物,计量肿瘤体积、留取肿瘤组织进行MDA含量、SOD和GSH-Px活力测定、活化型半胱天冬酶-3活性检测.[结果]DIM各剂量可不同程度地抑制肿瘤生长.与对照组比较,高剂量组SOD活力明显升高(P<0.05)、MDA含量明显降低(P<0.05)、GSH-Px活力明显升高(P<0.05).细胞凋亡的关键执行者活化型半胱天冬酶-3(Cleaved Caspase-3)表达随染毒剂量的增加逐渐增强(P<0.05).[结论]3,3-二吲哚基甲烷可抑制肿瘤生长,其机理可能与通过降低MDA含量,提高SOD活力、GSH-Px活力等途径降低氧化应激程度及通过Caspase-3信号分子诱导凋亡的作用相关.
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辣椒素对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及机制探讨
目的 观察辣椒素对脑缺血再灌注模型大鼠的影响并对其机制进行初步探讨.方法 将75只健康雄性SD大鼠随机分为5组:空白组、模型组、辣椒素高剂量组、辣椒素中剂量组和辣椒素低剂量组,每组15只.除空白组外,线栓法建立大鼠右脑缺血再灌注模型.辣椒素高、辣椒素中和辣椒素低剂量组分别灌胃辣椒素100、50、25 mg/(kg.d),其他两组灌胃相应剂量的CMC-Na溶液,连续7d.随后进行神经功能学评分、干湿重法检测大鼠脑含水量、TUNEL法测定神经元的凋亡、Western blot法测定cleaved Caspase-3蛋白表达情况.结果 辣椒素高、辣椒素中和辣椒素低剂量组均显著降低了神经功能评分、脑含水量、神经元凋亡数量和cleaved Caspase-3蛋白的表达(P＜0.01).结论 辣椒素对脑缺血再灌注有一定的保护作用,其机制可能与抑制cleaved Caspase-3蛋白的表达有关.
关键词： 脑缺血再灌注 辣椒素 Cleaved Caspase-3 -
癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性及cleaved caspase-3表达检测
目的 研究海人酸诱导癫痫大鼠海马组织硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性及cleaved caspase-3表达变化.方法 Sprague-Dawley大鼠随机分为癫痫对照组(NS组)和癫痫组(KA组).采用脑室注射海人酸制作大鼠癫痫模型.海人酸注射6 h取海马组织匀浆,应用5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)还原法对海马TrxR活性进行测定,采用western blotting法检测cleaved caspase-3表达.结果 NS组、KA组TrxR活性分别为:(71±19)、(116±40)U/mg;KA组cleaved caspase-3的表达较NS组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 癫痫大鼠海马组织TrxR活性明显增加,引起caspase-3裂解,导致神经元凋亡.
关键词： 癫痫 海人酸 硫氧还蛋白还原酶 Cleaved Caspase-3 -
电针耳穴防治大鼠老年性耳聋的实验研究
目的 探讨电针对大鼠老年性聋的防治作用及机制.方法 3 6 只 Wistar大鼠按月龄分为三组:青年组(3~4 月龄);老年组(20~22 月龄);电针干预老年组(20~22 月龄),电针刺"翳风"、"听会"两穴位.通过检测听性脑干反应(ABR)阈值,观察各组听力变化;采用耳蜗基底膜铺片,显微镜下观察毛细胞形态学的变化;免疫组织化学方法检测活化型半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)在耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)中的表达.结果 老年组大鼠 ABR阈值明显高于青年组(P﹤0.05),电针干预老年组 ABR 阈值明显低于老年组(P﹤0.0 1 ).显微镜下显示青年组耳蜗内外毛细胞排列整齐有序,无明显毛细胞缺失;老年组毛细胞破坏严重,细胞间边缘不清楚,有明显外毛细胞缺失;电针干预老年组耳蜗外毛细胞损伤及缺失现象较老年组轻.免疫组化结果显示:青年组大鼠耳蜗螺旋神经节细胞未见明显冬氨酸蛋白酶-3 阳性染色,老年组的耳蜗螺旋神经节细胞可见明显冬氨酸蛋白酶-3 阳性染色,电针干预老年组的耳蜗螺旋神经节细胞冬氨酸蛋白酶-3 表达较老年组显著降低.结论 针刺听会和翳风两穴位可减轻大鼠耳蜗毛细胞损伤,缓解细胞的凋亡,在一定程度上可起到防治大鼠老年性耳聋的作用.
关键词： 电针 翳风 听会 老年性耳聋 Cleaved Caspase-3 -
佩兰乙醇提取物对结肠癌RKO细胞的抑制作用研究
目的: 研究佩兰乙醇提取物对结肠癌RKO细胞的体外抗肿瘤作用.方法: SRB法检测细胞的生长抑制率; 倒置显微镜观察细胞形态的变化; 免疫印迹法检测结肠癌RKO细胞中Bcl-2蛋白、 Cleaved Caspase-3蛋白的表达情况.结果: 佩兰乙醇提取物在3 μg/ mL时对结肠癌RKO细胞已具有抑制生长作用, 而且随着浓度的增加其抑制率也逐渐升高, 到20 μg/ mL浓度时表现为完全抑制.形态学观察结果显示佩兰乙醇提取物处理后结肠癌RKO细胞后, 细胞明显皱缩变圆.免疫印迹法检测到佩兰乙醇提取物能降低结肠癌RKO细胞中Bcl-2的表达、增加Cleaved caspase-3的表达.结论: 佩兰乙醇提取物对结肠癌RKO细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用.
