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细胞因子佐剂白介素23和佐剂CpG2216对呼吸道合胞病毒重组疫苗免疫原性的影响
目的 研究细胞因子佐剂白介素23(IL-23)和佐剂CpG2216对呼吸道合胞病毒(RSV)重组疫苗G1F/M2免疫原性的影响.方法 将编码IL-23的质粒(简称IL-23)单独作为佐剂以及将IL-23和CpG2216联合作为佐剂与G1F/M2共免疫BABL/c小鼠三次,在每次免疫后10 d取血,分离血清,用间接ELISA法测定三次免疫后的血清IgG抗体效价,观察佐剂对体液免疫的影响.第3次免疫后2周处死小鼠,取脾细胞,用LDH法检测CTL活性、ELISPOT法检测分泌IL-4和γ-干扰素(IFN-γ)的淋巴细胞水平、流式细胞仪检测CD4+、CD8+的效应记忆和中央记忆T细胞,观察佐剂对细胞免疫的影响.结果 ELISA结果表明:除PBS组外,各佐剂组均诱导了高滴度的IgG抗体,其中IL-23+G1F/M2组的IgG水平显著低于PBS+G1F/M2组和IL-23+CpG2216+G1F/M2组,另外,PBS+G1F/M2组与IL-23+CpG2216相比差异无统计学意义;CTL杀伤实验显示:IL-23+CpG2216+G1F/M2组的CTL杀伤活性显著高于其他组;ELISPOT结果显示IL-23+CpG2216+G1F/M2组分泌IFN-γ淋巴细胞数量显著多于其他组,且各组分泌IFN-γ的淋巴细胞数显著多于分泌IL-4的淋巴细胞;流式细胞仪检测结果表明,IL-23和IL-23+CpG2216对G1F/M2诱导产生记忆细胞有明显增强作用.结论 佐剂IL-23和佐剂CpG2216联合使用能够增强RSV重组疫苗的免疫应答.
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乙型肝炎基因重组疫苗与血源疫苗接种易感人群抗体应答比较
比较国产乙肝基因重组疫苗和血源疫苗免疫效果.用乙肝基因重组疫苗接种47人,接种剂量5μg×3,乙肝血源疫苗接种74人,接种剂量10μg×3;均按0,1,2月程序接种;以SPRIA检测免疫对象HBV血清学标志物.结果,两组接种对象均未出现严重的副反应;完成3针免疫接种后6个月时,基因重组疫苗组抗-HBs阳转率(44.7%)显著小于血源疫苗组阳转率(98.7%);基因重组疫苗组抗-HBs S/N值显著小于血源疫苗组.结果提示国产乙肝基因重组苗安全性是好的,但免疫效果较血源疫苗差.
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戊型肝炎病毒重组疫苗的初步实验研究
应用重组大肠杆菌表达的代表HEVORF2 C端约1/3长度基因片段的重组蛋白作为疫苗,进行了猕猴接种及HEV攻击实验.结果显示,猕猴接种疫苗后可产生高效价的抗体;在同株HEV攻击后,疫苗组3只猕猴除1只出现1次粪便标本HEV RNA阳性外,其他未见粪便排毒和HEV血症,而对照组3只猕猴均出现粪便排毒,并持续9～13天;其中2只外周血单个核细胞可检测到HEV RNA,且1只出现ALT异常.上述结果表明,该疫苗可有效地保护猕猴对同株HEV的攻击,可作为HEV的候选疫苗.
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白细胞介素27与自身免疫性疾病的相关性研究进展
IL-27是2002年发现并命名的IL-6/IL-12家族成员,由p28和EBI3两个亚基组成的异源二聚体[1](图1[2]),在固有免疫和适应免疫中发挥广泛的作用.在适应性免疫应答阶段,IL-27与IL-12协同提高CD4、CD8和NKT细胞分泌IFN-γ的产量,同时IL-27是APC活化后的早期产物,可以促进Th0向Th1分化并促进后者增殖.若将IL-27质粒与传统铝盐佐剂Al(OH)3联合使用则能显著增强呼吸道合胞病毒重组疫苗的免疫原性[3];在固有免疫应答中,IL-27能够诱导单核细胞产生IL-1、TNF-α、IL-18和IL-12,诱导肥大细胞产生IL-1和TNF-α.近研究显示,IL-27能够抑制Th17细胞分化[4-6]、诱导调节性T细胞(Regulatory type 1cells,Tr1)增殖活化[7,8].在HIV阳性患者中IL-27能诱导IL-6、TNF-α和IL-10表达下调,并可作为判断肺结核炎症程度的指标[9,10].因此,IL-27是下调器官炎症反应和缓解自身免疫性疾病的重要细胞因子之一.下面就有关IL-27与自身免疫性疾病的研究进展做一简要综述.
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沙门菌减毒基因的研究进展
沙门菌（ Salmonella ）属于肠道致病菌，是一种重要的食物源性病原体，其具有广泛感染的宿主谱，在公共卫生方面具有重要的意义。用沙门菌作为重组疫苗的载体具有安全、免疫方式类似自然感染等无可比拟的优越性。弱毒的沙门菌活疫苗可以经口服途径表达传递重组的抗原到机体的黏膜表面，从而诱导机体产生保护性的免疫应答来对抗病原体的感染。近年来，出现的许多令人振奋的医学新发现和新技术都是以减毒的沙门菌作为载体来实现的。本文结合国内外近年来构建的一些沙门菌减毒菌株进行说明，为进一步研制安全高效的沙门菌弱毒疫苗以及将其用作活载体表达外源基因的研究奠定基础。
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重组疫苗E.coli LLO/OVA对小鼠CD4+CD25+Treg细胞调节作用的研究
目的:探讨重组E.coli LLO/OVA对小鼠CD4+CD25+Treg细胞的调节作用.方法:E.coli LLO/OVA和E.coli OVA分别免疫小鼠后,磁珠分离脾脏CD11c、CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-T细胞,比较两组CD11c细胞对CD4+CD25+Treg细胞分泌IL-10的影响,以及CD4+CD25+Treg细胞抑制CD4+CD25-T细胞增殖的作用;流式细胞术分析荷瘤小鼠OVA特异性CD8+T细胞比率,观察去除CD4+CD25+Treg细胞前后两组黑色素瘤B16-OVA荷瘤小鼠肺转移情况.结果:E.coli LLO/OVA免疫组小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞产生IL-10水平明显低于E.coli OVA免疫组小鼠(P＜0.05),CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T 细胞增殖的抑制作用明显减弱(P＜0.05),且OVA特异性CD8+T细胞数量明显增多(P＜0.05).在去除CD4+CD25+Treg细胞前后,E.coli LLO/OVA免疫的荷瘤小鼠肺转移结节数无明显减少(P＞0.05).结论:重组E.coli LLO/OVA可通过下调小鼠CD4+CD25+Treg细胞数量、抑制其功能而促进机体特异性抗肿瘤免疫.
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狂犬病病毒基因疫苗和精制疫苗诱导小鼠产生的免疫应答
目的比较重组疫苗与精制疫苗诱导小鼠的免疫应答,为研制新型狂犬病疫苗奠定基础.方法应用含狂犬病病毒(RV)糖蛋白基因的重组质粒pcDNA3-RGP(重组疫苗)和精制灭活狂犬病病毒(精制疫苗)分别免疫小鼠后检测细胞免疫和体液免疫水平.结果重组疫苗3次免疫与精制疫苗1次免疫的体液免疫水平相当,重组疫苗2次免疫与精制疫苗1次免疫的细胞免疫水平相当,重组疫苗与精制疫苗免疫小鼠的保护率分别为30%和84.6%.结论重组疫苗诱导小鼠产生的免疫应答水平低于精制疫苗.
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重组(CHO细胞)乙肝疫苗纯化工艺的改进
目的增加重组(CHO细胞)乙肝疫苗生产投量,提高纯化收率.方法增加每批细胞收液的投量,改进纯化工艺及调制样品方法.结果提高了HBsAg终收率,并缩短了纯化时间,减少了设备用量.结论改进后的工艺成本较低,效益提高,适于规模化生产.
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过敏性疾病重组疫苗的研究进展
过敏性疾病是世界范围内严重的卫生问题之一.因多数情况下患者很难做到避免接触过敏原,因此特异性脱敏治疗成为重要的治疗措施.随着人们对过敏原表位认识的深入和蛋白重组表达技术的不断成熟,一种新型用于特异性脱敏治疗的疫苗——重组疫苗被众多学者认可并广泛使用.重组疫苗具有安全、高效、特异等传统过敏原疫苗不具备的优势,并可达到个体化治疗的目的.本文就特异性脱敏治疗(specific immunotherapy,SIT)、重组疫苗及其制备以及疫苗的临床试验作一综述.
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两种重组乙型肝炎疫苗免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性
目的 比较5μg/剂重组乙型肝炎疫苗(酵母)和10μg/剂重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性.方法 1 151和996名6～12岁儿童分别按0,1,6月免疫程序接种14批酵母疫苗和5批CHO疫苗,于第1针免后3(T3)、7(T7)、12(T12)、24(T24)、36(T36)、60(T60)月检测抗-HBs应答,分别对接种10批酵母、5批CHO,4批酵母、4批CHO,2批酵母和2批CHO疫苗的儿童进行首针免疫后T24、T36和T60的随访,采用放免法(RIA)检测抗-HBs水平.结果 首针免疫后12个月内,接种两种疫苗的儿童抗体阳转率和抗体滴度差异均无显著意义;T24、T36时,接种CHO疫苗的儿童抗体阳转率显著高于酵母疫苗.结论 应提高酵母疫苗免疫儿童现用剂量.
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人类免疫缺陷病毒重组载体疫苗的研究进展
重组载体疫苗是目前人类免疫缺陷病毒疫苗的研究热点,近几年来不仅在病毒载体和细菌载体选用的种类方面有了新的突破,而且对载体疫苗的组合免疫策略和佳免疫的选用方面已有全新的认识.本文就用于该病毒重组疫苗的病毒载体(包括痘病毒、α病毒、仙台病毒、甲型流感病毒、腺病毒、狂犬病病毒、疱疹性口炎病毒和单纯疱疹病毒载体)以及细菌载体(包括卡介苗、李斯特单胞菌、沙门菌和布氏杆菌载体)等的研究进展进行综述.
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狂犬病病毒基因重组载体的构建及其在重组疫苗研究中的应用
本文概述了狂犬病病毒(RV)基因重组载体构建的基本原理、该载体的优点、将该载体用于构建人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)重组疫苗的方法,以及所获得的疫苗在小鼠中的免疫效果,后讨论了对该载体系统作进一步研究的可能发展方向.
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严重急性呼吸综合征流行的狙击手--疫苗
严重急性呼吸综合征近半年来肆虐了全球30多个国家和地区,其传染性强,目前尚无特效的治疗药物,主要依靠对症治疗和支持治疗.为了有效预防这一病魔,预防性疫苗的研制已刻不容缓.本文就有望开发的各种抗该病毒疫苗,包括灭活疫苗、重组疫苗、DNA疫苗和减毒活疫苗等的研究作一分析和展望.
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结核病疫苗研究进展
本文从亚单位疫苗、DNA疫苗、重组卡介苗和转基因植物疫苗等方面概括介绍了目前新型结核病疫苗研制的现状.
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合成肽重组疫苗的抗病毒效力
将编码保护性抗原决定簇的合成寡核苷酸插入合适的表位表达基因中能构成合成重组疫苗。本文报道了对表达流感病毒和曼氏血吸虫抗原决定簇的沙门菌疫苗株重组鞭毛的研究结果。将能诱导T、B细胞免疫应答的3个保守的流感病毒血凝素(HA)和核蛋白(NP)抗原决定簇表达在鞭毛上，并用不加任何佐剂的重组鞭毛鼻腔免疫小鼠。结果表明，疫苗能诱生特异性针对流感病毒的体液和细胞免疫应答，并能长期保护杂交株小鼠抵抗流感病毒的感染。老年小鼠也能获得抗感染的能力。为了研制人流感疫苗，应用了可被高加索人群人类白细胞抗原(HLA)识别的抗原决定簇，并在移植了人外周血单个核细胞(PBMC)的人／鼠辐射嵌合型小鼠中评估疫苗。研究表明，攻击后疫苗接种小鼠能有效清除病毒，并能抵抗致死性感染。对于血吸虫病，将表示9B-肽1的14个氨基酸残基肽表达在鞭毛上，在不加佐剂的情况下鼻腔免疫小鼠，获得40％的保护率。
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重组乙肝疫苗的研究进展
乙型病毒性肝炎（简称乙肝）是由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染所致。HBV为嗜肝病毒，通过受感染者的血液或其他体液传播，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。乙肝分急性和慢性2种。急性乙肝在成人中90％可自愈，慢性乙肝可发展成肝硬化，甚至肝癌。乙肝在世界各国均有流行，我国属于高流行区。据统计，全球现有20多亿人感染过HBV，其中（3．5～4）亿人为慢性HBV携带者，我国有1．2亿人，估计每年约有60万人死于急性或慢性乙肝［1］。我们从免疫学和基因学角度阐述乙肝疫苗的研究进展和未来的研制方向。
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弓形虫GRA4和SAG2基因重组BCG疫苗免疫保护性的比较研究
目的 比较弓形虫致密颗粒蛋白4(GRA4)基因和表面抗原2(SAG2)基因的重组卡介苗(BCG)对小鼠的免疫保护效果.方法 108只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分成6组:PBS组、BCG空白菌组、BCG-空白载体组、BCG-SAG2组、BCG-GRA4组和BCG-SAG2+GRA4组,每组18只.每鼠分别注射对应液体/疫苗100μl,共2次,间隔2周.接种前尾静脉采血,接种后4、6、8周每组分别剖杀3只,取脾和眼眶血检测细胞因子、IgG与IgM抗体,T淋巴细胞亚群计数,淋巴细胞转化率等.末次免疫后3周,每组剩余小鼠分别腹腔接种RH株弓形虫速殖子50个进行攻击感染,观察各组小鼠存活时间.结果 弓形虫SAG2和GRA4重组BCG疫苗均能诱导小鼠产生免疫应答.第4周时,BCG-GRA4+SAG2免疫组小鼠的CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值高,为14.06%±1.17%.第6周时,BCG-GRA4+SAG2免疫组小鼠的IgG抗体水平高,为0.18±0.02.第8周时,BCG-SAG2免疫组小鼠的IgM抗体水平高,为0.82±0.05;弓形虫速殖子攻击后,BCG-SAG2组平均存活8.61 d,PBS对照组平均存活7.33 d,3个免疫组小鼠比其他3组的平均存活时间长1 d.结论 弓形虫重组BCG疫苗具有一定的免疫保护性.
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pMAL-C2融合表达幽门螺杆菌HspA-UreB重组蛋白
幽门螺杆菌(Hp)有效保护性抗原有多种,如:热休克蛋白(Hsp)、尿素酶(Ure)、空泡毒素(VacA)、毒素相关蛋白(CagA)及过氧化氢酶等,但单独免疫动物时保护性均不理想,而使用多种抗原成分联合免疫,可使100%的小鼠避免感染Hp[1].本研究将Hp的两个主要抗原成分HspA和UreB的编码基因共同插入一个融合表达载体pMAL-C2,使其融合表达,为Hp基因重组疫苗的研究奠定基础.
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核酸疫苗的作用及我国目前的研究现状
核酸疫苗是一种拥有亚单位疫苗和重组疫苗的安全性和减毒疫苗和重组疫苗诱导细胞免疫应答特点的新型疫苗,近年来,关于核酸免疫的研究在各个领域广泛展开.本文对核酸疫苗的概念、特点、作用机制、疫苗的构建、应用、研究现状及未来发展作一综述.
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抗阿尔茨海默病重组蛋白疫苗的克隆、表达和免疫学鉴定
目的:制备抗阿尔茨海默病的重组蛋白疫苗.方法:将β淀粉样蛋白42肽N端表位Aβ115基因,通过来源于破伤风毒素的辅助性T细胞表位多肽TTP基因片段,与大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(AnsB)基因的C末端融合,构建表达质粒pET28a-AnsB-TTP-Aβ115.转化至E. coli BL-21,TBYE培养基(Kanr)培养,乳糖诱导表达,通过渗透休克、DEAE52-cellulose和Sephadex G-100柱层析制备融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ115,通过酶活力和抗原性测定鉴定融合蛋白.结果:获得的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ115保留了AnsB 71%的催化活力,具有与抗Aβ142抗体特异性结合的能力.结论:获得了在AnsB多聚酶分子表面呈现有Aβ115表位的融合蛋白rAnsB-TTP-Aβ115,为抗阿尔茨海默病疫苗研究奠定了基础.
