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上消化道出血患者中幽门螺杆菌毒株分型分析
目的探讨上消化道出血患者的Ⅰ型幽门螺杆菌感染状况.方法对341例上消化道出血患者行胃镜检查,ELISA法测定患者血清幽门螺杆菌(Hp)CagA和VacA抗体进行毒株分型.结果上消化道出血患者的Ⅰ型幽门螺杆菌检出率70.09%(239/341).胃溃疡71.43%(40/56),十二指肠溃疡80.22%(146/182),胃癌78.57%(11/14)与急性胃粘膜病变Ⅰ型幽门螺杆菌检出率44.90%(22/49)相比差异有显著性(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.05).结论上消化道出血患者的Ⅰ型幽门螺杆菌感染率高,胃、十二指肠溃疡、胃癌Ⅰ型幽门螺杆菌感染显著高于急性胃粘膜病变.
关键词： 上消化道出血 幽门螺杆菌 细胞毒素相关基因蛋白 空泡毒素 -
浙江地区幽门螺杆菌临床菌株空泡毒素基因的变异及其表达活性分析
目的了解浙江地区消化性溃疡(PU)和慢性胃炎(CG)患者感染幽门螺杆菌(Hp)vacA基因的变异及其空泡毒素表达情况.方法从70株Hp中选择部分菌株测定其vacA基因的s区和m区核苷酸序列.用细胞培养的方法检测Hp菌株的空泡毒性.结果6株s1a型Hp菌株的s区扩增产物与报道的s1a型60190株核苷酸序列相似性为93 2%～98.3%,4株m2型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m2型87-203株核苷酸序列之间相似性为93.8%～97.6%.1株m1b型Hp菌株的m区扩增产物与报道的m1型60190株相应序列相似性为87.3%,与m2型87-203株相应序列之间相似性为71.7%.所有5株s1a/m1型Hp对HeLa、RK-13和SGC-7901三种细胞均有明显的空泡毒作用;仅27.9%(12/43)的sla/m2型菌株对HeLa细胞表现为空泡毒作用,但分别有65.1%(28/43)和62.8%(27/43)的菌株对RK-13细胞和SGC-7901细胞有空泡毒作用.所有s1a/m1b和s1a/m1b-m2型Hp菌株对三种细胞均有明显的空泡毒作用,以RK-13细胞计,81.0%(17/21)的s1a/m1b型Hp菌株和1株s1a/m1b-m2型有空泡毒性.PU组感染的Hp菌株空泡毒性(84.4%)强于CG组(60.5%),差异有统计学意义(P＜0.05).结论浙江地区患者感染的Hp菌株vacA基因变异主要在于m区.vacA基因空泡毒性的表达在HeLa细胞中低毒性的s1a/m2型菌株在RK-13和SGC-7901细胞中仍有较高的空泡毒性.m1b型Hp空泡毒性强度介于m1和m2型之间.PU患者感染的Hp菌株其空泡毒性明显强于CG组.
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幽门螺杆菌空泡毒素基因克隆、表达及其重组蛋白免疫学特性的鉴定
已发现幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)疫苗具有预防和治疗Hp感染的效果[1].大多数Hp菌株均能产生空泡毒素(vacuolating cytotoxin, vacA),其前体蛋白在分泌过程中只有相对分子质量(Mr)约87×103的VacA被转运到细胞外,Mr为4×103氨基末端信号肽和50×103羧基末端多肽分别留于细菌内、外膜中[2].Hp感染者血清中可出现VacA抗体,重组VacA在Hp SS1株小鼠感染模型中有80%的保护率[3].我们构建了vacA原核表达系统,所表达的重组VacA可作为Hp基因工程疫苗的候选抗原.
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中性红摄入法检测幽门螺杆菌空泡毒素活性
空泡变性细胞毒素(VacA)是幽门螺杆菌(H. pylori)分泌的一种重要毒素,其相对分子质量(Mr)约为(87～95)×103,初发现该毒素与哺乳动物细胞共同孵育后可导致细胞内产生大量的空泡.既往多采用光学显微镜下直接计数空泡形成细胞的比例来评价VacA活性,我们采用中性红摄入法(Neutral red uptake assay, NRU)对Hp菌株VacA进行定量检测,评价该方法检测VacA活性的应用价值.
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幽门螺杆菌vacA基因变异性研究
目的探索幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, 简称Hp)vacA基因(vacuolating cytotoxin gene A)的变异性及其与产生空泡毒素活性的关系. 方法用自行设计的两两配对的4条引物对17株Hp的vacA基因进行PCR扩增. 结果每株细菌均可扩增出包括vacA基因不同区域的4条产物,但每种产物在不同菌株间长度有差异;对产毒株与非产毒株的扩增产物长度比较,未发现与产毒有关的区域. 结论 Hp vacA基因的变异性相当大,变异部位不仅仅局限于某一区域,尚不能确定与产毒有关的基因区域.推测Hp表达VacA活性与否可能与分泌的量有关.
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幽门螺杆菌VacA通过激活NF-kB诱导巨噬细胞分泌及凋亡
目的 研究幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)空泡毒素(VacA)单一毒力决定簇对THP-1巨噬细胞分泌和凋亡的影响,以及核因子KB(nuclear factor KB,NF-KB)在调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞功能中的作用.方法 将pDsRed-Monomer-Cl/vacA转染THP-1巨噬细胞,ELISA法检测巨噬细胞培养上清IL-1β、TNF-α含量;Griess试剂分析培养上清的一氧化氮(NO)水平;荧光探针DCFH-DA检测培养上清的活性氧(ROS);流式细胞仪检测细胞的凋亡率;凝胶阻滞试验(electro-phoretic mobility gel shift assay,EMSA)检测NF-kB的核转位.结果 重组质粒转染后6 h,重组质粒组培养上清中TNF-α、IL-1β含量明显高于阴性对照组(P<0.05);且分别于转染后6 h或24 h到达峰值;转染后6 h或12 h,重组质粒组培养上清中NO、ROS含量明显高于阴性对照组(P<0.05),且于转染后24 h达到高峰.转染后16 h,重组质粒组的凋亡率明显升高,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).重组质粒组加NF-kB的特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)后,IL-1β、TNF-α、NO、ROS的分泌量和细胞的凋亡率明显降低,与重组质粒组相比差异有统计学意义(P<0.05).EMSA试验显示,转染后3h细胞核内有活化的NF-kB,且于转染后12h活性强.结论 VacA蛋白瞬时高表达上调THP-1巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α、NO和ROS;VacA蛋白瞬时高表达诱导THP-1巨噬细胞凋亡;NF-kB可能参与调节VacA诱导的THP-1巨噬细胞的分泌和凋亡.
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儿童幽门螺杆菌相关霉素的检测及临床意义
目的 探讨不同H.pylori菌株类型与小儿胃十二指肠黏膜疾病的关系,了解本地区儿童感染的H.pylori菌株类型.方法 胃镜下活检及快速尿素酶试验诊断H.pylori感染及观察胃十二指肠黏膜病理变化,用免疫印迹法测定153例H.pylori阳性患儿血清多种H.pylori毒素抗体.结果 胃炎患儿I型H.pylori菌株为14例(27%),十二指肠球部溃疡患儿I型H.pylori菌株为43例(74%),两组检出率比较差异有显著性.CagA抗体阳性者黏膜中重度炎性反应58例(92%),CagA抗体阳性者黏膜轻度炎性反应21例(35%),两组检出率比较差异有显著性.结论 本地区儿童感染的H.pylori为Ⅰ型和Ⅱ型毒力菌株,CagA抗体阳性能引起胃十二指肠黏膜较重的炎性反应.
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三种幽门螺杆菌疫苗候选抗原的蛋白制备与复性研究
幽门螺杆菌(H. pylori,Hp)与胃十二指肠疾病关系密切,人群中感染率达50%以上[1],疫苗是在大规模人群中预防感染性疾病为经典和有效的方法.热休克蛋白(HspA)、尿素酶B(UreB)和空泡毒素(VacA)都是Hp疫苗的主要候选抗原,含上述3种蛋白的多组分疫苗免疫效果可能更强.
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幽门螺杆菌培养及抗原蛋白的分离纯化
幽门螺杆菌(H pylori)是一种生存于人胃中的弯曲状菌,能导致人的慢性胃炎,消化性溃疡和胃癌,其治疗多用抗生素治疗,但其副作用较大.给奶牛免疫H pylori疫苗后,其分泌的牛奶中含抗H pylori的免疫球蛋白,能够预防和治疗人类H pylori感染.且没副作用.在生产免疫乳时,Hpylori疫苗制备是基础性工作,并且在亚单位疫苗中,抗原蛋白的制备和分离纯化又为关键.本文就H pylori的培养(固体和液体培养)和抗原蛋白(尿素酶、空泡毒素、毒素相关蛋白和脂多糖)的理化性质、重组表达以及分离纯化方法进行比较研究.
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幽门螺杆菌毒力致病因子研究进展
幽门螺杆菌( Helicobacter pylori, H pylori)感染是一种世界范围内常见的慢性感染, 可致多种疾病, 如: 慢性胃炎, 十二指肠溃疡, 胃黏膜相关的淋巴样组织淋巴瘤及胃腺癌. 不同疾病是由H pylori和宿主之间复杂的致病机制导致. 近年来, 学者们对H pylori毒力致病因子的研究取得了长足进展, 为揭开H pylori感染的致病机制奠定了基础. 本文就H pylori毒力致病因子CagA、VacA、BabA、SabA、OipA、DupA等的新研究进展进行了综述.
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幽门螺杆菌VacA重组蛋白对SGC7901胃癌细胞的作用
目的:研究幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)编码基因在大肠杆菌中的表达产物对SGC7901胃癌细胞的作用.方法:常规培养pET32a-vacA-E.coliBL21(DE3)工程菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,产物纯化后作用于胃癌细胞,倒置显微镜及电镜等检测细胞生长情况.结果:重组蛋白作用于胃癌细胞后,倒置显微镜下观察,细胞生长受抑制,其细胞空泡毒作用减弱甚至消失,电镜下可见10%-20%左右细胞呈现轻度空泡变,仅少数细胞空泡变明显,细胞表面微绒毛消失,少量细胞体积减小,并出现了早期核着边固缩等凋亡改变.结论:重组VacA蛋白对胃癌细胞的生长具有抑制作用,空泡毒作用减弱.
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胃十二指肠疾病对Hp ClgA,vagA基因产物的体液免疫应答
目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染患者中Hp CagA,VacA抗体在消化性溃疡和功能性消化不良的发生率,评估Hp感染的CagA,VacA状态对胃窦粘膜炎症活动、萎缩、肠化生等病变的作用方法对106例消化不良合并Hp感染患者应用免疫印迹法测定血清中CagA,VacA抗体,同时评估胃窦粘膜的炎症程度、活动性、萎缩、肠化病变.结果 74%的Hp感染者中出现CagA抗体,53%Hp感染者中出现VacA抗体,但CagA或VacA抗体在不同病种中的分布无显著差异(P＞0.05).患者胃窦粘膜炎症活动程度,萎缩、肠化生和Hp CagA,VacA状态相关联.血清CagA和VagA抗体同时阳性的患者和CagA和VagA抗体同时阴性相比,胃窦粘膜萎缩的发生率分别为20/27(74%)和4/13(30%),高于CagA和VagA抗体同时阴性组明显增高(P＜0.05)结论Hp CagA和VacA状态在消化性溃疡和功能性消化不良患者之间无显著差异,不能作为判断胃十二指肠疾病的单一指标.针对Hp CagA和VagA的抗体和胃窦粘膜的萎缩病变相关,在诱导胃粘膜组织学改变并发展为胃腺癌过程中可能起重要作用.
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幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白及空泡毒素研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是定植在人胃黏膜上的一种革兰阴性杆菌,多在儿童时期通过胃-口途径传播[1].有学者在慢性胃炎或胃溃疡患者的口腔和胃黏膜活组织中同时发现了空泡毒素(vacuolating cytotoxin A,VacA)的s1m1或s1m2基因型,证明唾液可能是Hp传播及重复感染的载体[2].大多数Hp感染者无临床症状,约10.0％～15.0％的感染者则发展成为严重的胃部疾病.Hp还可导致胃外疾病,包括心血管疾病、特发性血小板减少性紫癜、胆管癌,以及影响糖尿病的胰岛素治疗等[3-5].研究发现,Hp感染及其临床后果是细菌和宿主复杂的相互作用的后果,致病相关因素包括致病岛、多种细胞毒素相关蛋白和酶及黏附因子等[6],其中细胞毒素相关基因蛋白(cytotoxin associated gene A,CagA)和VacA是主要的致病相关因素,现就其研究进展作一综述.
关键词： 幽门螺杆菌 毒力因子 细胞毒素相关基因蛋白 空泡毒素 -
幽门螺杆菌空泡毒素通过线粒体途径诱导细胞凋亡相关研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一类定植在人类胃黏膜的革兰阴性杆菌,主要通过“人-人”、“粪-口”等途径进行传播.H.pylori感染主要始于儿童期,其自发性清除非常少见,如不进行抗微生物治疗,H.pylori可在人类胃黏膜上持续定植几十年.全世界有超过50％的人口感染了H.pylori.自发现以来,大量研究表明,H.pylori感染与慢性胃炎、消化性溃疡、黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤和胃癌的发生、发展密切相关[12].空泡毒素(vacuolating toxin,VacA)是H.pylori 主要毒力因子之一,除了引起上皮细胞发生空泡化外还主要介导了该类细胞的凋亡.研究已证明,VacA引起的凋亡部分归因于与线粒体的相互作用,认识该过程对胃肠疾病的认知和防治有着重要的价值.
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幽门螺杆菌空泡毒素VacA致病机制研究
VacA是幽门螺杆菌分泌的一种蛋白毒素,它是幽门螺杆菌的一个重要毒力因子.可作为单一致病因子使胃上皮细胞发生多种明显的细胞病变效应.如VacA进入细胞后可启动细胞内发生广泛的rab7依赖的融合及晚期包裹小泡腔隙的渗透性肿胀,终导致细胞空泡化;Vac A 能引起线粒体去极化,从而引起胃上皮细胞凋亡;Vac A亦可影响或干扰细胞骨架各成分,引起肌动蛋白重排,致使微管结构发生紊乱.但VacA引起细胞病变和结构异常的确切机制尚未完全阐明.
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生物微矩阵(芯片)方法检测100例幽门螺杆菌抗体的临床分析
目的 生物微矩阵芯片技术检测患者血清中幽门螺杆菌(Hp)毒素相关蛋白(CagA)、空泡毒素(VacA)及尿素酶抗体(Ure),快速提供胃十二指肠疾病诊断的依据.方法 对100例胃病患者留取血清,用生物微矩阵芯片方法检测.结果 CagA阳性为55%,VacA阳性为29%,Ure阳性为16%.结论 芯片法在幽门螺杆菌感染的诊断、筛查和防治中具有重要意义.
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幽门螺杆菌感染与胃外疾病相关性研究
幽门螺杆菌(HP)是慢性胃炎的重要病原菌,与消化性溃疡、胃癌关系密切.临床上将HP菌株大体分两类:Ⅰ类:高毒力株,含有细胞毒素相关基因A(Cag A),表达Cag A蛋白和空泡毒素(Vac A)蛋白;Ⅱ类:低毒力株,含Vac A基因,但不表达Cag A蛋白和Vac A蛋白.
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幽门螺杆菌Vac A与Cag A在胃癌形成过程中的作用
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种微需氧的、螺旋状的革兰氏阴性杆菌.大量研究证实Hp与胃的癌前疾病、癌前病变及胃癌的发生发展密切相关,近年来研究的热点是Hp菌株的2个重要基因:空泡毒素基因(vacuoIating toxin gene A,vac A)和细胞毒素相关基因(cytotoxin associated gene A,cag A)及其相应表达产物空泡毒素(Vacuolating toxin,Vac A)和细胞毒素相关蛋白(Cytotoxin associated protein,Cag A).本文现就cag A与vac A基因及其相应蛋白在胃癌形成过程中的作用的研究进展综述如下.
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幽门螺杆菌的致病因子及其致病机制
幽门螺杆菌是人胃、十二指肠等相关疾病的重要致病菌,但其诱导疾病发生发展的具体分子机制目前还不清楚,本文对Hp部分相关致病研究及其机制作一简要综述,旨在为Hp致病机制的进一步研究及疫苗研究和感染防治等提供一些理论资料.
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幽门螺杆菌VacA真核表达载体的构建及其诱导细胞空泡化和凋亡
目的:研究幽门螺杆菌空泡毒素作为单一毒力决定簇对真核细胞的作用.方法:用PCR扩增vacA基因片段,克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-vacA,转染HeLa细胞,通过相差显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化.结果:重组质粒转染HeLa细胞24 h,10%～20%细胞的胞质内出现明显空泡,其中少数细胞发生凋亡改变.结论:成功构建了用于真核表达的重组vacA质粒,转染真核细胞后,观察VacA作用导致的细胞形态结构的变化,为研究VacA作为单一毒力决定簇对真核细胞的作用奠定了基础.
