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遗传霉素(G418)纯化许旺细胞过程中成纤维细胞胞浆空泡化的光镜观察
背景:以往研究应用遗传霉素(G418)联合差速贴壁及差速分离法除去成纤维细胞用于许旺细胞的纯化,对纯化过程中成纤维细胞形态变化的描述及可能其原理的推测很少.目的:利用光学显微镜采集纯化的不同时期成纤维细胞和许旺细胞形态学照片,描述成纤维细胞病理学变化.方法:利用差速贴壁、差速分离法结合遗传霉素抑制来纯化大鼠坐骨神经来源的许旺细胞.将传代培养的细胞分2组,实验组:细胞重复一次差速贴壁后转移到另一六孔培养板,每2 d更换新鲜纯化培养液,用差速分离法传代.对照组:差速分离纯化1次后转移到另一六孔培养板,每2 d更换新鲜基础培养液,用差速分离法传代.在纯化的不同时期,利用光学显微镜观察成纤维细胞病理学变化.结果与结论:在纯化的早期,光学显微镜下不能观察到成纤维细胞的病理变化,但成纤维细胞的增殖速度减慢,持续纯化经过3代(三四周)之后,光镜下可观察到逐渐加重的细胞病理变化,直至细胞空泡化.结果表明,应用遗传霉素纯化许旺细胞过程中,成纤维细胞增殖受限较早,但是胞浆的空泡化延迟至第3次传代及以后发生.
关键词： 遗传霉素(G418) 成纤维细胞 细胞空泡化 许旺细胞 光学显微镜 -
幽门螺杆菌VacA真核表达载体的构建及其诱导细胞空泡化和凋亡
目的:研究幽门螺杆菌空泡毒素作为单一毒力决定簇对真核细胞的作用.方法:用PCR扩增vacA基因片段,克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-vacA,转染HeLa细胞,通过相差显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化.结果:重组质粒转染HeLa细胞24 h,10%～20%细胞的胞质内出现明显空泡,其中少数细胞发生凋亡改变.结论:成功构建了用于真核表达的重组vacA质粒,转染真核细胞后,观察VacA作用导致的细胞形态结构的变化,为研究VacA作为单一毒力决定簇对真核细胞的作用奠定了基础.
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邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露导致性发育期子代大鼠睾丸细胞凋亡和空泡化
目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)孕期暴露对性发育期子代大鼠睾丸细胞凋亡的影响. 方法:受孕SD大鼠10只,随机分为空白对照组和DBP染毒组,妊娠12 ～ 19 d,空白对照组和DBP染毒组分别给予橄榄油1 ml/d和DBP 500 mg/(kg·d)灌胃,于性发育期(PND45)取出睾丸标本,透射电镜观察睾丸细胞结构,HE染色观察各级生精细胞发育情况,TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况,免疫组化和Western印迹观察凋亡调控蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bax和p53的表达. 结果:电镜观察见DBP染毒后性发育期子代大鼠睾丸细胞凋亡增加和细胞空泡化,HE染色见各级生精细胞明显减少,TUNEL检测结果显示DBP染毒组细胞凋亡指数明显高于空白对照组(12.00±5.22vs3.17±1.47,P＜0.01),免疫组化和Western印迹提示DBP染毒组促凋亡蛋白Bax和p53的表达较空白对照组显著升高(P＜0.05). 结论:DBP孕期染毒导致性发育期雄性子代大鼠睾丸生殖细胞和支持细胞凋亡增加及细胞空泡化,促凋亡蛋白Bax和p53的表达明显增高.
