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复方丹参注射液对大鼠肝脏细胞色素P450酶不同亚型的影响
目的:研究复方丹参注射液对大鼠肝脏细胞色素(cytochrome,CY) P450酶不同亚型活性的影响.方法:大鼠随机分为复方丹参注射液高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组.采用反相高效液相色谱(RT-HPLC)测定探针药物在血浆中的质量浓度,利用3P97药动学软件分析数据,计算药动学参数.结果:与对照组比较,复方丹参注射液高剂量组可使咖啡因的消除半衰期(t1/2β)由50.492 min升至54.456 min,药时曲线下面积(AUC)明显升高,清除率(CL)明显降低;高剂量组可缩短氯唑沙宗的t1/2β,降低AUC,显著增加CL;咖啡因和氯唑沙宗的中、低剂量组主要药动学参数无统计学差异;随着给药剂量的增加,甲苯磺丁脲的t1/2β,AUC逐渐增大,CL逐渐降低;而复方丹参注射液各组对咪达唑仑的药动学参数无显著性差异.结论:复方丹参注射液对CYP2C9具有一定的抑制作用,且呈剂量依赖型;复方丹参注射液高剂量组对CYP1A2有较弱的抑制作用,对CYP2E1有较弱的诱导作用,而复方丹参注射液中、低剂量组对CYP1A2和CYP2E1均无影响;复方丹参注射液高、中、低剂量组对CYP3A4的活性无影响.
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Cocktail探针药物法在中药研究中的应用
早在20世纪80年代末,Breimer和Schellens等[1]就首次提出同时使用多个探针药物(Cocktail法)来评价多个细胞色素P450 (CYP450)亚型酶的活性,并对其可行性和用途作了充分的阐述.目前Cocktail法主要用于西药的药物代谢研究,有关中草药对CYP450的影响作用的报道尚不多见,其在中药的药物代谢研究方面还是一个比较新的研究领域,其应用价值和重要意义不容忽视.笔者现就国内外采用Cocktail法在中药代谢研究中的应用进行综述,为该领域的研究工作提供参考.1 关于Cocktail探针药物法Cocktail法是指同时给予多种相对低剂量的探针药物,测定生物样本中每个探针药的代谢率或其他代谢分型指标,以获取多个代谢酶的表型信息,对于那些有多重代谢途径的剂量设计有极为重要的意义.该方法的优点在于多个代谢途径的信息可在单个试验过程中获得,真实地反映出药物对CYP450不同亚型代谢酶的影响,并将个体间影响降至低,此方法简便、快捷、准确、灵敏,适合进行探针药物血清浓度的测定.
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Cocktail探针药物法评价小檗碱对肝微粒体CYP450酶的抑制作用
目的:研究小檗碱对人肝微粒体CYP活性的影响.方法:以苯海拉明为内标,建立LC-MS/MS同时测定5种探针药物:咪达唑仑、非那西丁、右美沙芬、甲苯磺丁脲和氯唑沙宗的含量,采用鸡尾酒(cocktail)法探针药物法评价不同浓度小檗碱对混合人肝微粒体CYP不同亚型活性的影响.结果:与对照组相比,咪达唑仑、非那西丁和甲苯磺丁脲的代谢速率基本没有变化,而氯唑沙宗的代谢速率明显变慢,对于右美沙芬,当小檗碱的质量浓度为50 μg· L-1时,其代谢速率基本没有变化,当小檗碱的质量浓度大于200 μg·L-1时,其代谢速率明显变慢.结论:小檗碱质量浓度在2000μg·L-1以下时对人肝微粒体中CYP3A4,CYP1 A2和CYP2C9活性没有明显影响,但对CYP2E1和CYP2D6有明显的浓度依赖性抑制作用.
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免疫性肝损伤中一氧化氮诱生对CYP2E1表达及代谢活性的影响
目的:研究BCG诱发啮齿类免疫性肝损伤过程中NO诱生对CYP2E1表达及代谢活性的影响.方法:采用尾静脉注射BCG诱发小鼠及大鼠产生免疫性肝损伤,紫外分光光度法测定肝微粒体中CYP450全酶含量,免疫组化法测定肝组织CYP2E1蛋白表达,HPLC法测定经CYP2E1代谢的探针药物氯唑沙宗血药浓度经时变化.结果:BCG刺激可致肝组织炎性细胞浸润形成大量肉芽肿,肝微粒体CYP450全酶含量降低,肝脏CYP2E1蛋白表达下调,CYP2E1代谢底物氯唑沙宗血药浓度-时间曲线右移.选择性iNOS抑制剂氨基胍可逆转BCG所致肝脏CYP450全酶含量降低,增加CYP2E1蛋白表达,增强CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性.结论:NO诱生机制参与了BCG免疫性肝损伤中CYP450全酶含量降低,CYP2E1表达下调及代谢活性的下降.
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细胞色素P450 2D6氧化酶研究的表型分析及探针药物
近年来细胞色素P450酶(CYP450)的多态性已成为研究热点,而作为研究手段的表型分析及探针药物直接关系到研究的价值和意义.现综述CYP450 2D6氧化酶多态性研究的表型分析的影响因素及优缺点,并介绍几种探针药物,包括右美沙芬、美托洛尔、普罗帕酮、可待因、异喹胍、司巴丁的特点及其检测方法.
关键词： 细胞色素P4502D6氧化酶 药物代谢多态性 表型分析 探针药物 -
奥美拉唑为探针分析中国汉族人群细胞色素氧化酶CYP2C19表型多态性
目的:奥美拉唑作为探针药物分析中国汉族人群细胞色素氧化酶CYP2C19表型多态性.方法:采用HPLC建立了测定体内奥美拉唑及其代谢产物的血药浓度的方法;计算羟化指数(给药后3h的血清奥美拉唑和5'-羟基奥美拉唑的浓度比值,C OPZ /C OPZOH ),以C OPZ /C OPZOH 阈值为15作为CYP2C19表型分型的指标,对65例中国汉族健康志愿者进行了表型多态性分析.结果:羟化指数C OPZ /C OPZOH 在中国汉族人群中呈二态分布,在65例受试者中,8例的C OPZ /C OPZOH 大于阈值15,被判定为弱代谢者;57例小于阈值15,被判定为强代谢者;弱代谢者判定率为12.31%,而强代谢者判定率为87.69%.98.46%受试者的表型与其基因型吻合.结论:奥美拉唑是合适的探针药物;中国汉族人群细胞色素氧化酶CYP2C19表型存在多态性.
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Cocktail探针法测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP450亚酶活性的影响
目的 利用Cocktail探针法,测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP1A2、CYP3A4 、CYP2C9和CYP2C19酶活性的影响,从药物相互作用角度探寻二者配伍增毒相反的体内证据.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分组,南沙参组、藜芦组、合用组分别灌胃南沙参煎液(13.5g·kg-1)、藜芦煎液(0.81g·kg-1)、合煎液(14.31g·kg-1),空白组灌胃生理盐水,连续给药7天,于第8天尾静脉注射混合探针药物后于不同时间点采集血样;血样经处理后利用HPLC同时测定不同时间点各探针药物的血药浓度,通过WinNolin5.2软件计算各探针药物的药动学参数,并进行组间比较,进而反映亚酶活性在各组之间的差异.结果 与空白对照相比,藜芦组可降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t),增加其Vz;南沙参组可降低咖啡因的AUC(0～∞),显著降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t)、AUC(0～∞)并使其Vz,CL显著增加,对氨苯砜、奥美拉唑的各药动学参数无明显影响;与藜芦组相比,合用可增加氨苯砜的MRT(0～t),降低奥美拉唑的AUC(0～t),AUC(0～∞)并增加其CL;与南沙参组相比,合用可增加甲苯磺丁脲的AUC(0～t),降低其Vz,CL.结论 与空白组相比,藜芦组对大鼠CYP2C9具有诱导作用,南沙参组对大鼠CYP1A2酶具有诱导作用,对CYP2C9酶具有显著诱导作用,对CYP3A4、CYP2C19无明显影响;与藜芦组相比,合用组对大鼠CYP3A4酶具有抑制作用,对CYP2C19酶具有诱导作用;与南沙参组相比,合用组对大鼠CYP2C19酶具有抑制作用.
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Cocktail探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP1A2,2C11和3A作用的研究
目的 用“cocktail”探针药物法研究单次或多次口服辣椒素对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C11和CYP3A的影响.方法 将雄性SD大鼠随机分组,给予辣椒素25 mg·kg-1,分别灌胃1,3,7d,以0.5％羧甲基纤维素钠作为空白对照组,每组8只,给药后于不同的时间点采集血样.用HPLC测定大鼠血浆中探针药物咖啡因、甲苯磺丁脲和氨苯砜的浓度,血药浓度-时间数据采用DAS2.1.1软件进行药动学分析.结果 与对照组相比,辣椒素灌胃7d后,咖啡因的AUC0-t、AUC0-∞和Pmax显著减小,L/F显著增大；甲苯磺丁脲的AUC0-t显著减小,ρmax极显著减小；氨苯砜的AUC0-t和AUC0-x极显著减小,CL/F和V/F极显著增大.结论 辣椒素灌胃7d后对大鼠肝药酶CYP1A2、CYP2C11和CYP3A可能存在不同程度的诱导作用,其中对CYP3A的诱导作用较强.
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血栓通注射液对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响
目的 用Cocktail探针药物法,研究血栓通注射液对大鼠肝细胞细胞色素P450(CYP450)的影响.方法 分别以茶碱、氯唑沙宗和咪哒唑仑作为CYPIA2,CYP2E1及CYP3A4的探针药,将大鼠随机分为低剂量和高剂量两组,每日尾静脉注射血栓通注射液,采用高效液相色谱法测定连续使用血栓通注射液前后大鼠血浆中相应的探针药物的浓度及其药动学参数.结果 连续注射14 d后,与用药前比较,茶碱、氨苯砜的血药浓度及其药动学参数未见显著性改变;但低剂量组和高剂量组中氯唑沙宗的AUC,_(0-t)减少,ρ_(max) 明显降低,CL/F显著增加,t_(1/2)和V_d/F变化不明显.高剂量组中t_(max)有所降低(P<0.05).结论 连续注射血栓通注射液14 d后,对CYP2E1酶活性有显著诱导作用,而对CYP3A4、CYPlA2酶活性无影响.
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Cocktail探针药物法用于评价细胞色素P450同工酶影响的研究进展
目的综述Cocktail探针药物法用于评价药物对细胞色素P450同工酶影响的方法可行性及研究概况,为此方面的研究工作提供参考.方法查阅、总结和归纳近年来国内外有关文献.结果与结论Cocktail探针药物法已被设计用来证实药物-药物相互作用的体外预测,评估某种药物对细胞色素P450同工酶的诱导和抑制作用,用于表型分析及比较不同个体中酶活性的差异,在药动学研究和临床合理用药方面有重大意义.
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Cocktail探针药物同时评价连翘对肝细胞色素P450的影响
目的用Cocktail探针药物法,研究连翘对大鼠肝CYP450的影响.方法将SD 大鼠随机分组,给予连翘的水提物,以生理盐水组为空白对照,通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组CYP450.结果给予连翘组的大鼠CYP1A2的水平显著低于对照组,CYP3A4的水平显著高于对照组,CYP2E1的水平没有显著变化.结论连翘对大鼠CYP1A2有抑制作用,对大鼠CYP3A4有诱导作用,但对大鼠CYP2E1的影响不显著.
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五味子和甘草对大鼠肝药酶的诱导作用导致利多卡因药动学的改变
通过大鼠的体外和体内药代动力学研究,探讨了五味子和甘草与其他药物之间的相互作用.雄性SD大鼠口服6 d五味子或甘草水煎液,剂量为生药1 g或3 g/kg,空白对照和阳性对照分别给予蒸馏水和苯巴比妥钠(0.12 g/kg),制备各给药组肝微粒体并测定P450水平.以利多卡因为探针药物,以给予五味子、甘草或苯巴比妥钠6 d的大鼠肝微粒体研究其体外代谢速率;在体内药代动力学的研究中,大鼠先口服6 d五味子、甘草或苯巴比妥钠,第7天静脉给予利多卡因(10 mg/kg),测定血浆和尿液中利多卡因的浓度,计算出药动学参数.结果:五味子组和甘草组大鼠P450水的平与对照相比有显著差异,P450水平与剂量和时间呈相关性.第6天,与空白对照的P450水平(0.695 μmol/g)相比,五味子组、甘草组和苯巴比妥钠组分别增加了58%、91%和270%.在服用了五味子、甘草和苯巴比妥钠的大鼠肝微粒体中利多卡因的代谢速率明显高于空白对照,而体内的药动学参数也明显改变.在五味子组和甘草组中,利多卡因的半衰期分别缩短了28%和39%,总清除率增加了76%和59%.表明五味子和甘草对P450同工酶具有诱导作用.因此,当其他药物与五味子或甘草合用时,其有效性和安全性将会受到影响.
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Cocktail探针药物评价姜黄对肝细胞色素P450酶的影响
用Cocktail探针药物法,研究姜黄对大鼠肝细胞P450(CYP450)的影响.将SD雄性大鼠分组,给予姜黄的水提物,以生理盐水组为空白对照,以苯巴比妥组为阳性对照,通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组的CYP450.结果:给予姜黄组的大鼠CYP1A2和CYP2E1的水平显著低于对照组,CYP3A4的水平没有显著变化.表明:姜黄对大鼠CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,但对大鼠CYP3A4的影响不显著.
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无梗五加果实提取物对大鼠CYP450活性的影响
目的 研究无梗五加果实提取物对大鼠CYP450亚型CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4活性的影响.方法 以咖啡因、奥美拉唑、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2C19、CYP2E1和CYP3A4特异性探针药物,配制cocktail混合探针溶液,建立同时测定4种探针药物血药浓度的高效液相色谱法.将SD大鼠随机分为无梗五加果实70%乙醇提取物组、水提取物组和对照组,每天分别ig无梗五加果实70%乙醇提取物溶液、水提取物溶液和溶剂10 mL/kg,连续给药1周,于第8天ip混合探针药物10 mL/kg,分别在给药0、0.083、0.25、0.417、0.583、0.833、1、2、3、5、8、11、12 h于大鼠眼眶静脉丛采血,采用HPLC法对血浆样品进行分析,对给药组和对照组探针药物的药动学参数生物半衰期(t1/2)进行比较.结果 与对照组比较,无梗五加果实水提取物组和70%乙醇提取物组咖啡因、咪达唑仑的t1/2显著降低,奥美拉唑、氯唑沙宗的t1/2显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05、0.01).结论 无梗五加果实70%乙醇提取物和水提取物对大鼠的CYP2C19、CYP2E1有抑制作用,对大鼠的CYP1A2、CYP3A4有诱导作用.
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苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP450酶5个亚型的体外抑制作用
目的 研究苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP450酶的体外抑制作用.方法 制备大鼠肝微粒体.将苦碟子注射液分别与混合探针药物非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、睾酮和氯唑沙宗共同孵育,UPLC-MS/MS法检测各探针药物的代谢物.结果 在测定浓度范围内,苦碟子注射液对CYP2E1、CYP2C9和CYP2C19的活性抑制率小于50％;对CYP1A2、CYP3A4的IC50值分别为12.68％、8.11％,远高于临床日用药浓度0.20％～0.80％.结论 在正常剂量下,苦碟子注射液对大鼠CYP2E1、CYP2C9、CYP2C19几乎不显示抑制作用,对CYP1A2、CYP3A4几乎没有抑制作用.
关键词： 苦碟子注射液 肝微粒体 CYP450酶 探针药物 UPLC-MS/MS -
"Cocktail"体外探针法评价补骨脂素对人肝微粒体P450酶亚型活性的影响
[目的]利用Cocktail体外探针法,测定补骨脂有效成分补骨脂素对人肝微粒体多种P450酶亚型活性的影响,为补骨脂临床联合用药安全提供参考.[方法]建立液质联用方法,同时测定人肝微粒体P450酶中各探针代谢产物6α-OH紫杉醇、α-OH咪达唑仑、4-OH甲苯磺丁脲、去甲基右美沙芬、7-OH香豆素、对乙酰氨基酚和6-OH氯唑沙宗的含量.通过Cocktail体外探针实验中补骨脂素对人肝微粒体P450酶各亚型的影响,证明补骨脂对人体肝脏的代谢有影响作用.[结果]所建立的液质联用方法精密可靠,符合生物样品测定要求,可用于人肝微粒体中各P450酶探针的代谢产物的定量分析.与对照组相比,补骨脂素组各底物的转化率均下降,其中香豆素的转化率下降为显著,补骨脂素对其转化的抑制率为95.84％,而紫杉醇的转化的抑制不明显,仅为10.39％.补骨脂素对其他几种底物的转化抑制率均在82％～91％之间.[结论]补骨脂素对人肝微粒体的CYP1A2、2A6、2C8、2C9、2D6、2E1和3A4亚型均有抑制,其中对CYP2A6、1A2和2D63种亚型的影响较为显著,表明补骨脂素对人肝微粒体P450酶不同亚型影响差异显著,长期给药补骨脂应关注药物联合用药安全.
关键词： Cocktail 补骨脂素 人肝微粒体P450酶 探针药物 -
人体内细胞色素P450 3A探针的研究进展
人体内细胞色素P450 3A(CYP3A)是细胞色素P450酶系中主要的一类.评价CYP3A的活性可用于研究药动学、药物或毒物的代谢、药物相互作用、药物代谢酶的遗传多态性及疾病与代谢酶的相互影响,从而预测佳给药剂量,达到提高药物治疗效果和减少不良反应的目的.评价CYP3A的活性一般采用探针法,其评价结果的优劣取决于探针的特异性,安全性和方法的科学性.本文就目前被广泛应用的几种CYP3A探针的研究进展作一综述和评价.
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Cocktail探针药物评价淫羊藿提取物对大鼠CYP450酶的影响
目的 研究淫羊藿提取物对大鼠CYP450酶系的影响.方法 将SD雄性大鼠随机分成2组(均n=20),用药组给予淫羊藿提取物(相当于淫羊藿总黄酮300 mg·kg-1,ig,qd×14 d),空白对照组给予生理盐水,于d 15日清晨灌胃给予Cocktail探针药物咖啡因(15 mg·kg-1)、氨苯砜(15 mg·kg-1)、苯妥英(75 mg·kg-1)和氯唑沙宗(30 mg·kg-1).采用RP-HPLC法检测各探针药物浓度,通过药动学参数来评价各组CYP450酶系的活性.结果 咖啡因、氨苯砜、苯妥英和氯唑沙宗的线性范围分别为0.2～1.6 mg·L-1、0.075～0.600 mg·L-1、0.2～1.6 mg·L-1、0.25～2.00 mg·L-1,4种探针药物日内、日间RSD均<5.14%,方法回收率均>95.0%(RSD<6.14%).给予淫羊藿提取物的大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的活性水平显著高于对照组(P<0.05).结论 该RP-HPLC法快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于探针药物评价主要CYP450亚型酶的活性.淫羊藿提取物对大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的活性均有诱导作用.
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探针药物法评价艾瑞昔布对大鼠CYP2C9酶的影响
利用探针药物法研究艾瑞昔布对大鼠体内CYP2C9酶的影响.将大鼠随机分为试验组和对照组,每组18只,试验组经口灌胃艾瑞昔布,对照组经口灌胃等量蒸馏水,连续给药7d(2次/d).d8,每只大鼠经口灌胃甲苯磺丁脲,并于给药后24 h内眼内眦取血,以HPLC法测定血浆药物浓度,拟合药动学参数,并对两组的药动学参数进行统计学分析.结果表明,试验组的AUC0→24h、AUC0→∞、tmax、CL和V与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).合用艾瑞昔布后,甲苯磺丁脲的AUC0→24h和AUC0→∞显著降低,CL明显增加,表明艾瑞昔布诱导CYP2C9酶的活性,加快甲苯磺丁脲的代谢.
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羟基喜树碱的代谢与 CYP450的相关性研究
目的：研究羟基喜树碱（HCPT）在体外小鼠肝微粒体中对 CYP450活性的影响，为临床合理联合用药提供参考。方法：在小鼠体外肝微粒体中分别加入六种亚型酶的探针药物对乙酰氨基酚、非那西丁、双氯芬酸钠、睾酮、酒石酸美托洛尔、奥美拉唑和羟基喜树碱溶液，在优化的孵育体系下温孵。用 HPLC 法测定各空白对照组和羟基喜树碱溶液中各探针药物代谢产物的浓度并比较代谢率的差异，以评价羟基喜树碱对各亚型酶活性的影响。结果：在代谢反应过程中，在50~200μmol·L-1内，羟基喜树碱的浓度与孵育体系中 CYP3A4的特异性底物睾酮、CYP2E1的特异性底物对乙酰氨基酚的剩余药量呈正比例关系，且具显著性差异（P＜0.05），与其他四种探针药物的剩余药量无明显的浓度依存关系（P＞0.05）。结论：HCPT 在肝微粒体的代谢反应过程中受代谢酶 CYP3A4和 CYP2E1的作用，竞争性地抑制了睾酮和对乙酰氨基酚在肝微粒体中的代谢。
