首页 > 文献资料
-
反相高效液相色谱法同时检测4种细胞色素P450探针药物
目的 建立同时检测小鼠血浆中4种细胞色素P450(CYP450)探针药物,即咖啡因(CYP1A2)、氨苯砜(CYP3A4)、苯妥英(CYP2C9)和氯唑沙宗(CYP2E1)的反相高效液相色谱方法.方法 血浆样品用乙酸乙酯提取处理.色谱柱为Dikma Diamonsil-C_(18)(4.6 mm×200 mm,5.0 μm),保护柱4.6 mm×10 mm(Agilent),流动相为甲醇-磷酸盐缓冲系(含0.02 mol·L~(-1)的磷酸二氢钾,0.02 mol·L~(-1)的三乙胺,磷酸调pH 6.5),体积比为48:52,流速1.0 mL·min~(-1),柱温25℃,安替比林为内标,检测波长为265 nm.结果 咖啡因、氨苯砜、苯妥英和氯唑沙宗的线性范围分别为0.2～1.6,0.075～0.600,0.2～1.6,0.25～2.00 mg·L~(-1),4种探针药物日内、日间RSD均<5.14%,方法回收率均>95.0%(RSD<6.14%).结论 该反相高效液相色谱法快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于探针药物评价主要CYP450亚型酶的活性.
-
淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响
目的 研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响.方法 无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50 mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖.结果 MTT法检测淫羊藿提取物在50 mg/L时细胞存活率达52.36 0A.Con A作用6 h后,对照组CD69+表达率为(4.61±0.85)%,Con A组CD69+T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50 mg/L时均抑制Con A诱导的CD3+T淋巴细胞CD69的表达(P＜0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%.培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50 mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P＜0.01),48 h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72 h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01.结论 淫羊藿提取物能明显抑制Con A刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性.
-
淫羊藿提取物抗抑郁作用研究
目的研究淫羊藿提取物的抗抑郁作用.方法采用行为绝望模型悬尾试验(TST)和强迫游泳试验(FST)研究淫羊藿提取物对小鼠行为、脑内单胺氧化酶A(MAO-A)、单胺氧化酶B(MAO-B)活性与肝脏中MAO-A和MAO-B活性及丙二醛(MDA)水平的影响;采用利血平拮抗模型探讨淫羊藿提取物可能存在的抗抑郁作用途径.结果淫羊藿提取物(25、50、100、200 mg/kg)能显著缩短TST和FST小鼠悬尾和游泳不动时间,显著抑制TST小鼠脑和肝组织MAO-A和MAO-B活性,逆转肝组织MDA水平的升高.淫羊藿提取物对利血平所致小鼠体温的下降无明显改善作用.结论淫羊藿提取物具有一定抗抑郁作用.
-
淫羊藿提取物对急性心肌缺血模型犬血气的影响
目的 观察淫羊藿提取物对急性心肌缺血模型犬血气的影响.方法 将实验犬24只,随机分为4组(每组6只):模型组、阳性对照药地奥心血康胶囊组及淫羊藿提取物(生药52.0、104.0mg/kg)组.采用结扎麻醉开胸犬左冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型,经十二指肠1次性给药.观察240 min内对冠脉流量(CBF)动、静脉血氧饱和度,动、静脉氧分压.心肌耗氧量.心肌氧摄取率的影响.结果 淫羊藿提取物增加CBF、静脉血氧饱和度、静脉氧分压,降低心肌氧摄取率.结论 淫羊藿提取物对实验性心肌缺血犬的心肌有保护作用.
-
淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的HPLC测定
淫羊藿药材为<中华人民共和国药典>2000年版收载品种,淫羊藿苷为其中有效成分.为了控制其质量,本实验建立了HPLC法测定淫羊藿提取物中淫羊藿苷的含量,并在方法学考察过程中,对文献[1～6]报道的多种色谱条件进行了比较,建立了合适的测定方法.
-
淫羊藿提取物对去卵巢大鼠离体骨骨密度及骨重量的影响
目的：研究淫羊藿提取物对去卵巢大鼠骨密度、骨重量的影响,探讨中医肾主骨理论。方法：取84只雌性大鼠随机分成假手术组、模型组、己烯雌酚组、骨疏康组、淫羊藿提取物高、中、低剂量组7组,每组12只。造模成功后,饲养90 d,开始灌胃90 d后,检测离体骨骨密度、骨重量。结论：淫羊藿提取物可提高去卵巢大鼠离体骨骨密度、增加离体骨湿重、干重。对实验大鼠去卵巢所致骨质疏松症有明显的治疗作用。
-
淫羊藿提取物干预阿尔茨海默病病理发生机制的作用
淫羊藿是小檗科淫羊藿属多年生草本植物,始载于《神农本草经》,是安神、健脑、补肾、治疗脑疾病的首选药材.经实验证明,淫羊藿提取物具有抗氧化应激、减轻炎症反应、调节神经递质、减少淀粉样蛋白(Aβ)生成、抑制神经细胞凋亡及改善阿尔茨海默病(AD)患者的认知功能等多种神经生物学功能[1].本文就淫羊藿提取物有效成分对AD的病理发生机制的可能作用做一综述.
-
淫羊藿提取物中淫羊藿苷及其代谢产物在骨质疏松模型大鼠肾脏中的分布研究
目的:骨质疏松模型大鼠灌胃给予淫羊藿提取物后,利用HPLC法对其肾脏中的淫羊藿苷及其代谢产物(淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ)进行测定,以考察淫羊藿苷及其代谢产物在肾脏中的分布情况.方法:按118mg/kg(相当于淫羊藿苷)灌胃给予骨质疏松模型大鼠淫羊藿提取物后,于40min、1.5h、8h、24h取组织,经生物样品预处理后,利用HPLC法测定肾脏中各成分的浓度.色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm);柱温为40℃;流动相:A(0.4％ HAC水)-B(甲醇);流速为1.0mL/min进行梯度洗脱;检测波长为270nm.结果:淫羊藿提取物给药40min后在肾脏中即有分布且能被检测,1.5h浓度较高,其后逐渐消除或代谢为其代谢产物;其代谢产物淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素、淫羊藿次苷Ⅱ在肾中均被检测;给药8h后,淫羊藿苷在肾脏中浓度较低,其代谢产物仍维持一定浓度;给药24h后各成分逐渐消除.结论:淫羊藿苷在大鼠肾脏中有一定程度的蓄积,并且与其代谢产物共存于肾脏组织中,并能维持一定的时间,与中医学认为淫羊藿归肾经补肝肾强腰膝的理论相符.
-
羊藿三七提取物中主成分淫羊藿苷的肠吸收研究
目的 考察羊藿三七(淫羊藿、三七)提取物中主成分淫羊藿苷的肠吸收情况.方法 采用Caco-2细胞模型,以药物表观渗透系数为指标,考察羊藿三七提取物中淫羊藿苷的吸收转运并与淫羊藿提取物及淫羊藿苷单体比较.结果 在淫羊藿苷质量浓度相同的条件下,羊藿三七提取物及淫羊藿提取物中淫羊藿苷的吸收渗透系数都较小,且略小于单体,但无显著性差异,而两者分泌渗透系数与单体比较均有显著性降低,外排比率均下降了1倍左右.结论 虽然单体淫羊藿苷的吸收较差,但羊藿三七提取物及淫羊藿提取物中的某些成分能抑制外排泵对淫羊藿苷的外排作用,从而有利于淫羊藿苷的吸收.
关键词： 羊藿三七提取物 淫羊藿提取物 淫羊藿苷 Caco-2细胞模型 渗透系数 -
Cocktail探针药物评价淫羊藿提取物对大鼠CYP450酶的影响
目的 研究淫羊藿提取物对大鼠CYP450酶系的影响.方法 将SD雄性大鼠随机分成2组(均n=20),用药组给予淫羊藿提取物(相当于淫羊藿总黄酮300 mg·kg-1,ig,qd×14 d),空白对照组给予生理盐水,于d 15日清晨灌胃给予Cocktail探针药物咖啡因(15 mg·kg-1)、氨苯砜(15 mg·kg-1)、苯妥英(75 mg·kg-1)和氯唑沙宗(30 mg·kg-1).采用RP-HPLC法检测各探针药物浓度,通过药动学参数来评价各组CYP450酶系的活性.结果 咖啡因、氨苯砜、苯妥英和氯唑沙宗的线性范围分别为0.2～1.6 mg·L-1、0.075～0.600 mg·L-1、0.2～1.6 mg·L-1、0.25～2.00 mg·L-1,4种探针药物日内、日间RSD均<5.14%,方法回收率均>95.0%(RSD<6.14%).给予淫羊藿提取物的大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的活性水平显著高于对照组(P<0.05).结论 该RP-HPLC法快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于探针药物评价主要CYP450亚型酶的活性.淫羊藿提取物对大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2E1的活性均有诱导作用.
-
LC-MS/MS法同时测定大鼠尿液中4种淫羊藿黄酮苷
目的：应用高效液相色谱-串联质谱联用（LC-MS/MS）法建立大鼠尿液中朝藿定A、 B、 C及淫羊藿苷的同时测定方法，初步探讨淫羊藿提取物在大鼠体内的排泄规律。方法以人参皂苷Rg1为内标，选用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（2.1 mm×150 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%乙酸水（30∶70）；流速：0.3 mL·min-1；柱温：40℃；采用电喷雾离子源（ESI）负离子多反应检测（MRM）模式测定。结果朝藿定A、B、C以及淫羊藿苷在1~500 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好，日内精密度（RSD）均小于7.4%，日间精密度（RSD）均小于12.7%。大鼠口服灌胃给予淫羊藿提取物36 h后朝藿定A、B、C及淫羊藿苷的平均尿累积排泄量/给药量比值不超过0.27‰，0.20‰，0.30‰和0.43‰。结论本研究建立的LC-MS/MS方法简便灵敏快速，适用于尿液中朝藿定A、 B、 C以及淫羊藿苷的同时测定及淫羊藿提取物尿排泄动力学研究的应用，研究结果显示淫羊藿提取物原形药物基本不经尿液排泄，提示肾排泄不是其主要消除途径。
关键词： 高效液相色谱-串联质谱联用法 淫羊藿提取物 淫羊藿黄酮 尿药浓度 尿排泄 -
淫羊藿提取物对急性髓系白血病SCID小鼠模型细胞生物学特性的影响
目的 观察淫羊藿提取物对急性髓系白血病SCID模型小鼠细胞生物学特性的影响.方法 SCID小鼠共60只,随机选取其中的50只,采用腹腔注射对数生长期HL-60细胞株于经环磷酰胺预处理的SCID小鼠以建立急性髓系白血病SCID小鼠模型,4周后随机均分为模型组、阿糖胞苷组、观察1组、2组和3组,另10只正常小鼠设为空白对照组.观察1组、2组和3组分别用淫羊藿提取物10、5、2.5 mL/kg灌胃治疗5周,模型组和空白对照组灌胃等体积0.9%氯化钠注射液5周,阿糖胞苷组尾静脉注射阿糖胞苷.在治疗第5周时尾静脉采血,采用人工法计数外周血血象及分类;采用Western blotting法检测同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)和多聚腺苷二磷酸核糖多聚酶(PARP)蛋白表达;流式细胞学检测HL-60细胞膜CD13和CD71表达率及细胞各周期细胞百分率.结果 观察2组、3组外周血白细胞、淋巴细胞和HL-60细胞总数明显降低,中性粒细胞升高,PARP蛋白表达量、CD13和CD71阳性表达率明显下降,PTEN蛋白表达量增加,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).两组HL-60细胞均被阻滞于G1期,且G1和S期细胞百分率呈浓度效应关系.结论 淫羊藿提取物有与阳性药阿糖胞苷相似的药理作用,在体内对急性髓系白血病HL-60细胞株有一定的抑制作用,其机制可能通过下调CD13和CD71,裂解PARP以诱导急性髓系白血病细胞凋亡,增强PTEN蛋白表达并促使细胞阻滞于G1期,从而发挥抑制白血病细胞的增殖作用.
-
淫羊藿提取物自乳化软胶囊的制备工艺研究
目的:优选淫羊藿提取物自乳化软胶囊的处方及制备工艺.方法:根据溶解度试验和伪三元相图确定佳处方,通过稳定性试验、溶出度试验以及粒径的测定对淫羊藿提取物自乳化软胶囊进行评价.结果:该自乳化软胶囊中的油相、乳化剂和自乳化剂分别为油酸乙酯、吐温80和乙二醇单乙基醚,其佳处方比例为淫羊藿提取物-油酸乙酯-吐温80-乙二醇单乙基醚(10:33.75:45:11.25).结论:所选处方合理,制得的自乳化软胶囊较普通软胶囊溶出度高,可为进一步提高淫羊藿提取物的口服生物利用度奠定基础.
-
顶空气相色谱法测定大孔树脂提取物中的残留溶剂研究
目的:建立了测定大孔树脂淫羊藿提取物、栀子提取物以及HP中乙醇、正己烷、苯、甲苯、甲基环己烷、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯残留有机溶剂含量的顶空气相色谱法.方法:采用顶空气相色谱法,FID检测器,以20%～50%二甲基亚砜为溶媒,顶空预热温度为90℃,预热时间为10 min,进样口温度为180℃,检测器温度为250℃,以氮气为载气,使用DB-1交联毛细管柱(60m×0.32mm,1 μm),程序升温,实现了各组分的基线分离.结果:乙醇、正己烷、苯、甲苯、甲基环己烷、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯在各自对应的浓度范围内,线性关系良好;乙醇、正己烷、苯、甲苯、甲基环己烷、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯的小检测限分别为2.72,0.22,0.03,0.03,0.28,0.33,0.03,0.31 μg·mL~(-1);加样回收率均在75%以上,精密度较好.结论:经方法学验证,该方法灵敏、准确、可靠,可适用于大孔树脂淫羊藿提取物、栀子提取物及HP中乙醇、正己烷、苯、甲苯、甲基环己烷、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯等残留有机溶剂的测定.
-
顶空气相色谱法测定淫羊藿提取物中的残留有机溶剂
目的:建立淫羊藿提取物中残留有机溶剂:氯仿、乙酸乙酯、乙醇、正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯的检测方法.方法:采用静态顶空色谱法,用Agilent INNOWAX毛细管柱(30 m×0.320 mm,0.25 μm)分离测定氯仿、乙酸乙酯、乙醇、正己烷、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯.以60℃为起始柱温,保持5 min,再以5℃·min-1升至120 ℃,保持2 min,后以15℃·min-1升至180℃,保持3 min,使用氢火焰离子检测器.结果:9种残留溶剂在26 min内能很好地分离;标准曲线线性良好,r均≥0.9927,残留溶剂的回收率在82.26%～117.00%之间,RSD<10.32%;精密度<9.80%;9种有机溶剂的检测限范围为0.00001706%～0.004890%.淫羊藿提取物中仅检测到乙酸乙酯和乙醇,其含量都低于0.15%,而正己烷、氯仿、苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯在样品中未检出.结论:本实验建立的方法能有效检测淫羊藿提取物中9种残留有机溶剂,待测样品中残留有机溶剂含量符合中国药典规定.
-
朝鲜淫羊藿有效单体工业化生产工艺研究
淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物.具有补肾阳,强筋骨,祛风湿作用.用于阳痿,遗精,筋骨痿软,风湿痹痛,麻木拘挛;更年期高血压[1].朝鲜淫羊藿为长白山区道地药材之一,为药典收载的品种之一.其中有效单体为淫羊藿苷(Icariine).淫羊藿苷是一种8-异戊烯基黄酮类化合物,具有多种生理活性[2].国内外对淫羊藿苷研究报道的较多[3～6],但对淫羊藿苷的提取物生产工艺报道较少.本实验应用HPLC检测方法,以淫羊藿苷为指标,对朝鲜淫羊藿提取物生产工艺进行了研究.
